吴朝兴
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 供职机构：广西大学农学院亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广西壮族自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 甘蔗Rubisco和PEPC基因的克隆及其在不同施氮水平下不同甘蔗品种中的表达
- 甘蔗（Saccharrum spp.）是一种重要的C4作物，在我国90％以上食糖年产量来自甘蔗。近年来，中国的甘蔗产业面临着许多新的挑战，过量施肥是其中之一。氮肥施用过量是国内蔗区极为普遍的现象，施氮过量不仅导致氮利用效...
- 吴朝兴
- 关键词：甘蔗PEPC基因施氮处理
- 文献传递
- 桂糖11号Rubisco基因克隆、原核表达及纯化
- 2016年
- 【目的】通过原核表达及纯化获得甘蔗1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)的大、小亚基融合蛋白,为获得符合抗体制备条件的高纯度融合蛋白提供技术支持。【方法】以甘蔗品种桂糖11号(GT11)+1叶为材料,根据NCBI公布的甘蔗Rubisco大、小亚基基因(rbc L和rbc S)的编码域序列(CDS)设计特异性引物,PCR扩增rbc L和rbc S基因的CDS,然后连接至原核表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒后转入原核细胞(大肠杆菌Rosetta)中诱导表达,用镍亲和层析柱对融合蛋白进行纯化,并比较分析桂糖11号与其他甘蔗品种在rbc L和rbc S基因的CDS及编码蛋白序列方面的差异。【结果】rbc L和rbc S基因的CDS长度分别为1431和510 bp,其中桂糖11号rbc L基因的CDS与Saccharum hybrid cultivar SP80-3280(Gen Bank登录号AE009947)、Saccharum hybrid cultivar Q155(Gen Bank登录号KU214867)的一致,桂糖11号rbc S基因的CDS与Saccharum hybrid cultivar GT28(Gen Bank登录号JN591757)的存在7个碱基差异,但仅有2个氨基酸发生错义突变。Rbc L和Rbc S融合蛋白以包涵体形式存在原核细胞中,用镍离子亲和层析纯化及超滤浓缩后其浓度均在1.0 mg/m L以上。【结论】从桂糖11号成功克隆Rubisco大亚基和小亚基基因的CDS,大亚基基因的CDS比小亚基的保守性更高,且均可在原核细胞中高度表达,经纯化浓缩获得的高纯度融合蛋白可用于制备Rubisco单克隆抗体。
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- 关键词：原核表达融合蛋白
- 甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nifD基因的克隆、原核表达及纯化被引量：2
- 2015年
- 基于NCBI数据库中固氮菌nif D基因的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E为模板,通过PCR方法获得了Klebsiella variicola DX120E nif D基因的ORF;以p ET30a(+)为原核表达载体,构建重组表达质粒p ET30a-nif D。将正确的重组质粒转入原核表达菌株BL21(DE3),在28℃培养条件下经1 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(isopro-ply-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达;通过SDS-PAGE电泳检测融合蛋白表达情况。结果表明,本研究克隆得到甘蔗内生固氮菌Klebsiella variicola DX120E nif D基因的ORF为1 452 bp,编码483个氨基酸;原核诱导表达后经提纯和质谱鉴定,该蛋白等电点为5.90,分子量为53.87 k D,与预期大小一致。该蛋白在原核表达系统中以包涵体的形式成功表达。利用Ni柱亲和层析方法进一步获得了纯度较高的重组蛋白,为今后单克隆抗体的制备、蛋白质印记杂交检测(Western Bloting)等研究奠定了基础。
- 张琨琨邵敏吴朝兴杨丽涛李杨瑞邢永秀
- 关键词：甘蔗KLEBSIELLA原核表达蛋白纯化
- 甘蔗SoNIN1基因结构及其内含子信息分析
- 根据前期克隆得到的SoNIN1基因的全长cDNA和部分启动子序列设计引物,应用PCR技术从甘蔗叶片gDNA中克隆SoNIN1基因,并利用生物信息学方法分析基因的结构.结果表明,SoNIN1基因的DNA序列长4938bp,...
- 牛俊奇吴朝兴杨丽涛李杨瑞
- 关键词：甘蔗转化酶生物信息学
- 桂糖11号Rubisco基因克隆、原核表达及纯化
- 目的：通过原核表达及纯化获得甘蔗1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)的大、小亚基融合蛋白,为获得符合抗体制备条件的高纯度融合蛋白提供技术支持.
方法：以甘蔗品种桂糖11号(GT11)+1叶为材料...
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- 关键词：1,5-二磷酸核酮糖羧化酶加氧酶原核表达融合蛋白
- 甘蔗SoNIN1基因结构及其内含子信息分析被引量：1
- 2014年
- 根据前期克隆得到的So NIN1基因的全长c DNA和部分启动子序列设计引物,应用PCR技术从甘蔗叶片g DNA中克隆So NIN1基因,并利用生物信息学方法分析基因的结构。结果表明,So NIN1基因的DNA序列长4 938 bp,包含6个外显子和5个内含子,Gen Bank登录号KF563902。在该基因5'非翻译区存在一个268 bp内含子序列,同时5个内含子序列中含有与低温、干旱和激素等胁迫响应相关的作用元件,这些可能对So NIN1基因转录表达起调控作用。依据So NIN1蛋白聚类和外显子-内含子基因结构可以将植物NINs分为两类。
- 牛俊奇吴朝兴杨丽涛李杨瑞
- 关键词：甘蔗外显子内含子
