杨海强
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CTFβ表达纯化及生物学性质鉴定
- 2014年
- 目的 表达和纯化淀粉样前体蛋白（APP）的羧基末端水解片段CTFβ,并鉴定其生物学性质,为在阿尔茨海默病（AD）抗体筛选中的应用奠定基础.方法 以APP基因为模板,克隆CTFβ的基因并测序鉴定;将CTFβ基因克隆到表达载体pET-30a（＋）上,构建重组表达质粒pET30a-CTFβ;转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析对重组蛋白进行纯化,并用Western Blot和ELISA检测其免疫反应性,并初步探索其作为检测抗原的实验条件.结果 重组蛋白在大肠埃希菌中可溶性表达,Western Blot结果,用抗组氨酸标签抗体做为一抗,（10～25） ×103处显示与预计相对分子质量大小一致的条带;此外,在80×103以上的位置尚有较粗的蛋白条带.用抗Aβ的单抗进一步分析发现,（10～25） ×103及80×103以上的条带可以被抗Aβ（17-24）单抗4G8识别,而80×103以上的条带还可以被Aβ寡聚体单抗识别,说明表达产物还形成了高相对分子质量的聚集体,位于80×103以上.间接ELISA结果表明CTFβ用于AD抗体检测的最佳包被剂量是1 nv孔.结论 本研究成功表达和纯化了CTFβ,并鉴定了其单体和聚集体的免疫反应性,为其在AD检测中的应用提供实验依据.
- 宋琳琳杨海强张莹何金生古应彩侯明旭刘楠楠
- 关键词：阿尔茨海默病原核表达
- 抗Aβ单链抗体的杆状病毒表达及其干预Aβ体外聚集的机制研究
- 阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一种常见的衰老相关的痴呆，在全球有3560万以上的老人患病。β-淀粉样蛋白（β-Amyloid peptide，Aβ）的错误折叠和聚集是AD的主要病理特点之一...
- 杨海强
- 关键词：阿尔茨海默病Β-淀粉样蛋白单链抗体
- 文献传递
- β淀粉样蛋白聚集-解聚机制研究进展被引量：1
- 2014年
- 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种严重的神经退行性疾病,在全球范围内发病成上升趋势。淀粉样蛋白级联假说是AD发病机制的重要学说之一,同时也为AD的预防和治疗提供了研究方向。在该假说中,主要认为大脑内的淀粉样蛋白的错误折叠和聚集是导致AD的核心因素,相关的研究是AD研究领域的热点问题。本文将就Aβ的聚集-解聚机制等问题进行阐述,旨在对现有的研究状况和进展进行总结。
- 杨海强
- 关键词：阿尔茨海默病
- 基于负染-电镜的Aβ体外聚集表征测试要点分析
- 2016年
- 本文应用电镜负染色技术,对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)中所涉及的β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)的聚集规律进行了分析。通过对样品的浓度、p H值、温度和时间等设置系列梯度,以及调整负染试剂的种类、浓度和染色时间,优化了Aβ寡聚体样品制备以及电镜观察的最佳条件,获得了清晰的Aβ纤维图像并用以估算纤维长度。实验结果表明:经过六氟异丙醇给予单体化处理,并溶于无水二甲基亚砜(DMSO)的Aβ(100μmol·L^(-1)),在p H7.2的PBS中4℃孵育24 h,Aβ寡聚体形态清晰,且Aβ42寡聚体比Aβ40寡聚体聚集趋势更明显。在p H 8.0的硼酸缓冲液中,Aβ42(40μmol·L^(-1))在37℃孵育72 h后,纤维形成明显;而Aβ纤维样品经过煮沸后再制备负染样品,所得电镜图像更为清晰,便于对纤维长度和结构进一步分析。因此电镜负染色技术,可作为一种快捷,直观的Aβ体外聚集形貌表征的质控方法。
- 张钊董润敏张莹孙维敏王荷王欢杨海强温杰
- 关键词：透射电子显微镜Β-淀粉样蛋白
