王亚会
- 作品数：9 被引量：44H指数：3
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- 稻曲病菌T-DNA插入突变体B1464插入位点分析被引量：2
- 2015年
- 以稻曲病菌致病力丧失的突变菌株B1464为材料,对其生物学形态和分子遗传变异进行分析。B1464田间接种表现为不致病,与野生型菌株相比,在营养贫瘠的MM培养基上生长速率没有显著差异,而在PSA和TB3培养基中生长速率较慢,并且在PS液体培养基中产孢能力下降,同时突变菌株的分生孢子与野生型相比形态和大小均发生变化。Southern杂交结果显示T-DNA在突变菌株B1464中以单拷贝形式插入,利用TAIL-PCR技术扩增得到的紧邻T-DNA两侧的侧翼序列在野生型中不相邻,与野生型菌株基因组比对发现突变菌株插入位点处丢失约20kb的DNA片段。RT-PCR结果表明突变菌株中T-DNA插入位点两侧基因表达量均下调。推断突变菌株B1464的致病能力丧失可能是由于T-DNA的插入导致了染色体重排及破坏了某些基因的正常表达。
- 王亚会刘永锋陆凡俞咪娜黄磊郑梦婷于俊杰尹小乐
- 关键词：稻曲病菌T-DNA插入突变致病力
- 稻曲病菌致病力丧失突变菌株B-1015的T-DNA标记基因的克隆被引量：2
- 2014年
- 【目的】研究稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)致病力丧失突变菌株B-1015,克隆和分析T-DNA插入位点的侧翼序列,为稻曲病菌的致病机制研究提供参考。【方法】分析稻曲病菌T-DNA插入突变体B-1015菌株的生长速率、产孢量、孢子萌发率以及致病力等生物学表型。用PCR检测T-DNA在B-1015基因组中插入的稳定性,用Southern杂交检测T-DNA插入的拷贝数,用hiTail-PCR扩增T-DNA侧翼序列,用RACE PCR克隆T-DNA标记基因,半定量RT-PCR分析所克隆基因的表达情况。【结果】与野生菌株P1相比,突变菌株B-1015的生长速率和产孢量都有较明显的降低,孢子萌发率无明显差异,致病力丧失。分子检测结果表明T-DNA在B-1015基因组中为稳定的单拷贝插入。hiTail-PCR得到的T-DNA两端侧翼序列在野生型菌株基因组上不相连,RACE PCR在两边的侧翼序列上分别克隆得到Uvt-1015R和Uvt-1015L。预测分析表明Uvt-1015R包含一个长度为948 bp的开放阅读框(open reading frame finder,ORF),可编码295个氨基酸,5′端非编码区(5′-untranslated regions,5′-UTR)长度为341 bp,3′端非编码区(3′-untranslated regions,3′-UTR)长度为271 bp。Uvt-1015L包含一个长度为351 bp的ORF,可编码116个氨基酸,5′-UTR为31 bp,3′-UTR长度为174 bp。在已知功能的蛋白中检索,没有发现与Uvt-1015R和Uvt-1015L基因同源的蛋白。序列分析发现T-DNA插入在两个基因序列中间,RT-PCR结果显示,在突变菌株B-1015中,Uvt-1015R表达量下降,Uvt-1015L不表达。【结论】稻曲病菌突变菌株B-1015致病力等重要生物学表型发生改变,可能是由于T-DNA的插入导致了B-1015基因组重排和Uvt-1015R、Uvt-1015L基因结构的破坏。
- 黄磊胡建坤俞咪娜于俊杰王亚会郑梦婷郑睿刘永锋
- 关键词：稻曲病菌致病力T-DNA基因克隆
- 稻曲病菌T-DNA插入突变菌株B1241侧翼基因克隆被引量：3
- 2016年
- 【目的】分析稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)致病力减弱的T-DNA插入突变菌株B1241的生物学性状和致病力,并结合分子生物学手段研究其T-DNA插入位点的侧翼基因,以解析突变基因在稻曲病菌生长和致病过程中的作用,从而为阐明稻曲病菌致病机制提供理论基础。【方法】以野生菌株P1作为对照,观察并检测突变菌株B1241的菌落形态、生长速率、孢子形态、产孢量等生物学性状;采用注射接种的方法将菌丝和孢子的混合液接种于水稻穗苞中,统计每穗发病的病粒数,分析B1241的致病性变化;突变菌株B1241在不含有潮霉素的PSA平板上转接5代之后,PCR检测T-DNA插入的稳定性并通过Southern杂交分析B1241中T-DNA插入的拷贝数;利用Hi Tail-PCR获得T-DNA插入位点的侧翼序列,经NCBI比对得到侧翼基因;运用RACE-PCR克隆插入位点侧翼基因全长;q RT-PCR分析侧翼基因的表达情况。【结果】经生物学特性观察及田间接种发现,与野生菌株P1相比,突变菌株B1241在固体培养基MM、PSA和TB3上的菌落和孢子形态以及生长速率无显著差异,其致病力、产孢能力均呈极显著下降。B1241在不含潮霉素的PSA平板上转接5代之后,仍能扩增到GFP和HPH基因,说明T-DNA已经稳定地插入到其基因组中。Southern杂交结果显示T-DNA在该突变菌株中以单拷贝的形式插入。经扩增并比对侧翼序列,T-DNA的插入位点处少了28 bp的稻曲序列,有37 bp在T-DNA及稻曲病菌基因组中都没有比对到。NCBI比对发现,侧翼基因Uvt-1241与UV-8b菌株的UV8b-7878基因同源,开放阅读框长2 317 bp,包含81和106 bp的2个内含子,编码709个氨基酸。经RACE-PCR获得基因全长2 650 bp,5'非编码区长度为14 bp,3'非编码区长度为319 bp。T-DNA插入在基因Uvt-1241的启动子区域,位于起始密码子之前516 bp处。q RT-PCR分析结果表明,Uvt-1241在该突变体中表达量下降。该基因编码一个糖基水解酶18家族的蛋�
- 薄惠文俞咪娜于俊杰尹小乐丁慧王亚会刘永锋
- 关键词：稻曲病菌T-DNA致病力基因克隆
- 水稻恶苗病菌田间抗咪鲜胺菌株的适合度及其交互抗性被引量：10
- 2016年
- 恶苗病是水稻生产上较为严重的种传真菌病害,咪唑类广谱内吸性杀菌剂咪鲜胺是目前防治该病害的主要药剂。以对咪鲜胺抗性及敏感的田间水稻恶苗病菌为试材,研究了其适合度及对几种常用杀菌剂的交互抗性。结果显示:抗性菌株的抗药性可稳定遗传,其温度敏感性与敏感菌株无明显差异,部分抗性菌株在菌丝生长速率、产孢量、孢子萌发率和致病力方面显著高于田间敏感菌株;咪鲜胺与三唑类及2-氰基丙烯酸酯类杀菌剂之间均无交互抗性。研究表明,对咪鲜胺产生抗性的水稻恶苗病菌具有较强的适合度,在田间自然条件下有可能形成优势群体,因此需合理轮换使用不同作用机制的杀菌剂,以延缓其抗药性的发展。
- 周俞辛于俊杰俞咪娜尹小乐王亚会杜艳齐中强宋天巧张荣胜刘永锋
- 关键词：水稻恶苗病菌咪鲜胺抗药性适合度交互抗性
- 稻曲病菌突变体B-1464的生物学特性分析
- 研究稻曲病菌的ATMT失活突变体库中致病力减弱的突变菌株B-1464的生物学形态和分子遗传变化,为稻曲病菌致病机制研究提供方法基础.首先测定和观察出发菌株P1和B-1464的菌落直径、菌落形态、产孢能力、孢子形态等生物学...
- 王亚会俞咪娜黄磊郑梦婷于俊杰尹小乐陆凡刘永锋
- 关键词：稻曲病菌T-DNA插入突变致病力生物学特性
- 稻曲病菌特异性的SSR标记筛选
- 水稻稻曲病是由稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）侵染引起的一种水稻穗部真菌病害。近年来,稻曲病菌呈现发生范围扩大的趋势,逐渐由水稻次生病害发展为主要病害。而且,稻曲病的发生会影响稻米的产量和品质,严重...
- 俞咪娜王亚会于俊杰尹小乐刘永锋
- 关键词：稻曲病菌特异性SSR标记
- 文献传递
- 八株芽孢杆菌的鉴定及其生物活性差异比较被引量：8
- 2014年
- 已有研究显示同为芽孢杆菌其抑菌作用机制存在着显著不同,本文通过16S rRNA序列和gyrB基因序列等方法鉴定了8株芽孢杆菌,分析了其生物活性。结果表明,8株芽孢杆菌均为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens;表型及生物活性分析显示,8株解淀粉芽孢杆菌在菌落形态、菌体大小、芽孢形成等方面存在差异;菌株JT261和T455具有较强的分泌蛋白酶能力、菌株JT84具有较强的分泌嗜铁素能力;菌株JT81和T429形成生物膜能力较强;菌株JT81具有较强的抑菌活性,菌株T455分泌物质具有较强的抑菌活性;本研究为从分子遗传学角度解析同为解淀粉芽孢杆菌生物活性差异提供了研究基础。
- 王亚会孟祥坤刘永锋束长龙俞咪娜于俊杰聂亚锋陆凡
- 关键词：芽孢杆菌生物活性
- 稻曲病菌T-DNA插入突变体B2510的插入位点分析被引量：1
- 2016年
- 以稻曲病菌T-DNA插入突变体库中致病力减弱突变菌株B2510为材料,通过分析T-DNA插入位点的侧翼序列和突变基因,分离出在稻曲病菌致病过程中起作用的基因。通过测定突变菌株B2510的生长速率、产孢能力及致病力发现,与野生型菌株P1相比,B2510田间接种表现为致病性减弱;在MM培养基上生长速率下降,而在PSA和TB3培养基中生长速率与野生型没有显著差异,但丧失产孢能力。Southern杂交显示T-DNA在突变菌株B2510中以双拷贝形式插入,利用TAIL-PCR技术扩增紧邻T-DNA两侧的侧翼序列,经过比对分析发现,T-DNA分别插在基因UV8b_1412的启动子区域和UV8b_1386的下游3′端,且稻曲菌基因组序列均未丢失,T-DNA上只有几个碱基发生变化。半定量RT-PCR分析基因的表达情况,显示两个基因在突变体B2510的表达量较P1均显著下降,推测T-DNA插入位点处的基因与稻曲病菌致病性相关,可能在某一阶段参与调控稻曲病菌在水稻上的致病过程。
- 丁慧俞咪娜王亚会于俊杰尹小乐薄惠文黄星刘永锋
- 关键词：稻曲病菌T-DNA插入突变致病力侧翼序列
- 江苏省水稻恶苗病菌对咪鲜胺和氰烯菌酯的敏感性被引量：21
- 2014年
- 对采自江苏省姜堰、靖江和常州3个地区的水稻恶苗病样品进行了病原菌的分离和鉴定,利用菌丝生长速率法测定了病原菌对咪鲜胺和氰烯菌酯的敏感性。结果表明：分离得到77株水稻恶苗病菌Fusarium fujikuroi;咪鲜胺对水稻恶苗病菌的EC50值在0.020~1.333μg/m L之间,分离到的菌株对咪鲜胺均表现为中抗和高抗,其中中抗菌株18株,占23.38%,高抗菌株59株,占76.62%,说明咪鲜胺高抗菌株已经成为江苏省的恶苗病菌优势群体。氰烯菌酯（JS399-19）对水稻恶苗病菌的EC50值在0.012~2.040μg/m L之间,菌株的敏感性频率近似正态分布,EC50均值为（0.684±0.265）μg/m L,建议将此值作为江苏省水稻恶苗病菌对氰烯菌酯的敏感性基线。
- 郑睿聂亚锋于俊杰黄磊俞咪娜尹小乐黄星王亚会郑梦婷刘永锋
- 关键词：水稻恶苗病菌咪鲜胺氰烯菌酯抗药性敏感性基线
