刘圆
- 作品数：3 被引量：25H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院茶叶研究所更多>>
- 发文基金：国家茶叶产业技术体系建设项目国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 不同氮处理茶树实时定量PCR内参基因筛选和验证被引量：19
- 2016年
- 为筛选不同氮处理下茶树(Camellia sinensis)实时荧光定量PCR(q RT-PCR)试验体系中最佳内参基因,以茶树幼叶、成熟叶和幼根为材料,应用qRT-PCR分析GAPDH、18S rRNA、β-actin、RPL13、a-tubulin、Ru BP等6个内参基因在不同氮浓度和氮源处理下的表达变化,借助GeNorm和NormFinder程序对候选内参基因稳定性进行评价。结果表明,在不同氮浓度和氮源处理下,GAPDH、b-actin和RPL13表达稳定性较好,GAPDH+β-actin组合稳定性最佳,可用作茶树基因表达研究的内参基因;而a-tubulin和RuBP表达稳定性较差,不适合做内参基因。为进一步证实上述结果,分别以GAPDH、a-tubulin、GAPDH+β-actin组合为内参基因,分析茶树幼叶中硝酸根转运蛋白基因(CsNRT1.2)和铵根转运蛋白基因(Cs AMT1.1)的表达水平,发现以GAPDH和GAPDH+β-actin组合为内参基因时,目的基因的相对表达量随处理时间延长变化规律基本一致;而以a-tubulin为内参基因时,目的基因的变化规律与前两者存在明显差别。因此,根据特定试验体系选择合适的内参基因对于qRT-PCR定量结果的准确性和可靠性具有重要意义。
- 刘圆王丽鸳韦康成浩张芬吴立赟胡娟
- 关键词：茶树内参基因QRT-PCR
- 一种SSR核心引物组及其鉴定茶树品种的方法
- 一种SSR核心引物组及其鉴定茶树品种的方法，属于生物技术领域。其特征在于包括：（1）材料选取；（2）基因组DNA提取；（3）目标产物的PCR扩增；（4）PCR产物的电泳分离；（5）银染显色；（6）数据分析；（7）结果判定...
- 张成才成浩王丽鸳韦康吴立赟刘圆
- 文献传递
- 茶树亚硝酸还原酶基因CsNiR的克隆及表达分析被引量：6
- 2016年
- 以‘龙井43’茶树叶片的c DNA为模板,利用RT PCR技术克隆了茶树亚硝酸还原酶基因(CsNiR),得到完整的ORF全长为1 764 bp,编码587个氨基酸;所推导的氨基酸序列与垂枝桦(Betula pendula)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、菠菜(Spinacia oleracea)和水稻(Oryza sativa)的同源性均大于76%。生物信息学分析表明,CsNiR分子量为68.648 k D,等电点为6.12,为亲水性的非分泌蛋白;二级结构的预测显示,Cs Ni R具有完整的Ni R蛋白结构,含血红素蛋白β–化合物区域和4Fe-4S区域。实时荧光定量结果表明,该基因在成熟叶片中表达量高于一芽二叶和根。采用营养液水培3个茶树品种,在氮饥饿两周后分别供应正常氮素和低氮素(1和0.1 mmol·L^(-1) NH4NO3),q RT-PCR测定发现,正常氮素处理的2 h和6 h,诱导根CsNiR表达量显著增加,叶片中的表达量变化延迟到24 h之后,且变化幅度存在基因型之间的差异;低氮处理对CsNiR表达量的影响相对较小。因此,研究Cs Ni R基因的表达特性及其在茶树氮素利用中所发挥的作用,需结合茶树基因型、组织部位、供氮水平等进行综合评价。
- 张芬王丽鸳成浩韦康胡娟张成才刘圆吴立赟李海琳
- 关键词：茶树克隆基因表达氮素
