李晓宁
- 作品数：14 被引量：5H指数：1
- 供职机构：东华大学化学化工与生物工程学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金上海市科委实验动物专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 借助双色荧光报告系统筛选并解析miRNA参与的Kiss1基因表达调控
- 下丘脑Kiss1基因通过感应机体的代谢状态,性激素水平等因素调控促性腺激素释放激素GnRH的脉冲式分泌,在哺乳动物的青春期起始调控和生殖功能维持方面发挥重要作用。而Kiss1基因自身表达调控机制还有待进一步解析。micr...
- 李晓宁周宇荀
- 关键词：MICRORNAS
- 基于RNA-seq的脂代谢相关基因Tmem176a功能分析
- 2022年
- 探讨在Hepa1-6细胞中过表达、敲低Tmem176a基因对脂质代谢途径的影响。将构建成功的Tmem176a慢病毒过表达载体、siRNA分别转染进Hepa1-6细胞中,将过表达或敲低Tmem176a后的Hepa1-6细胞进行RNA-seq、生物信息学分析、Real-Time PCR验证。与对照组相比,Tmem176a在Hepa1-6细胞中过表达182倍(P<0.05)和敲低0.2倍(P<0.05),OE-Tmem176a相较于OE-Vector差异表达基因共计424个,其中下调基因192个,上调基因共233个;KD-Tmem176a相较于KD-Scramble差异表达基因共计405个,其中下调基因248个,上调基因共157个,部分差异基因富集在脂肪的消化吸收、胆固醇代谢、甘油酯代谢、脂肪酸合成等代谢途径,Real-Time PCR验证部分差异表达的基因,差异基因表达水平的变化趋势与RNAseq一致。RNAseq结果提示Tmem176a基因会影响脂质代谢基因响应。Tmem176a表达水平改变会促进小鼠肝癌Hepa1-6细胞中脂质代谢基因表达水平发生显著变化。
- 崔茂生段维旺李晓宁汤晨李凯周宇荀肖君华
- 关键词：脂质代谢RNA-SEQ
- miR-92a-3p和miR-25-3p海绵上调Kiss1并影响雌性小鼠的青春期启动及动情周期被引量：2
- 2021年
- 下丘脑Kiss1神经元产生的神经肽kisspeptin通过影响促性腺激素释放激素的分泌,参与青春期的启动、生殖系统的成熟以及排卵等过程的神经内分泌调节。Kiss1基因的表达受到包括多种反式调控因子及表观遗传的调控。预测与前期研究表明,miR-92a-3p、miR-25-3p的种子序列能够与Kiss1的3′-UTR直接结合,抑制Kiss1的表达。为进一步研究miR-92a-3p、miR-25-3p在Kiss1表达调控中的作用,本研究分别构建了对miR-92a-3p、miR-25-3p具有抑制作用的特异性吸附海绵载体:sponge-miR-92a和sponge-miR-25,以实现miRNA的功能缺失。流式细胞术和双荧光素酶报告基因系统分别证实,这2个海绵载体均能够非常有效地吸附外源性或内源性靶miRNA。sponge-miR-92a和sponge-miR-25载体被进一步包装成慢病毒LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25。实时荧光定量PCR结果显示,经LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25感染的下丘脑原代神经元细胞中,Kiss1表达水平均显著上调(P<0.05);将LV-sponge-miR-92a注射到下丘脑后,雌性小鼠阴门开启时间明显提前(P<0.05);下丘脑注射LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25扰乱了雌性小鼠的正常动情周期。综上所述,成功构建了能够有效吸附miR-92a-3p、miR-25-3p的海绵载体,证明它们在解除miR-92a-3p、miR-25-3p对Kiss1的抑制中的作用,下丘脑注射海绵对雌性小鼠的阴门开启时间和动情周期均产生一定程度的影响,提示miR-92a-3p、miR-25-3p可能在青春期的启动和生殖成熟过程中发挥重要的作用。
- 陈佳贤李晓宁王欣肖君华李凯周宇荀
- 关键词：性发育
- 适合对kiss1基因表达调控因子高通量筛选的荧光报告系统的构建
- Kisspeptin(吻素)是多功能小肽,尤其在哺乳动物中的下丘脑中发挥性发育启动调控和维持生育功能的重要作用。了解其编码基因Kiss1的表达调控方式有助于解析生殖调控的分子机制。GT1-7细胞是来源于小鼠下丘脑的能表达...
- 李晓宁周宇荀
- 关键词：高通量筛选
- 适合对kiss1基因表达调控因子高通量筛选的荧光报告系统的构建
- Kisspeptin(吻素)是多功能小肽,尤其在哺乳动物中的下丘脑中发挥性发育启动调控和维持生育功能的重要作用。了解其编码基因Kiss1的表达调控方式有助于解析生殖调控的分子机制。GT1-7细胞是来源于小鼠下丘脑的能表达...
- 李晓宁周宇荀
- 关键词：高通量筛选
- 文献传递
- 借助双色荧光报告系统筛选并解析miRNA参与的Kiss1基因表达调控
- 下丘脑Kiss1基因通过感应机体的代谢状态,性激素水平等因素调控促性腺激素释放激素GnRH的脉冲式分泌,在哺乳动物的青春期起始调控和生殖功能维持方面发挥重要作用。而Kiss1基因自身表达调控机制还有待进一步解析。micr...
- 李晓宁周宇荀
- 关键词：MICRORNAS
- 文献传递
- 一种优化小鼠成纤维细胞中自噬小体示踪的方法被引量：1
- 2017年
- 目的为了提高对自噬小体示踪的精确度和清晰度,全面展示细胞自噬相关进程,优化基于绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3β(GFP-LC3β)标记物的自噬小体示踪方法。方法组织块贴壁法原代培养小鼠耳成纤维细胞,脂质体转染过表达GFP-LC3β;GFP-LC3β充分表达后给予药物刺激以激活或阻断细胞自噬通路,然后进行免疫荧光染色。对染色操作进行优化:首先,延长多聚甲醛的固定细胞时间(从15min延长至45min);其次,提高Triton X-100处理时间,除第一次和最后一次使用PBS润洗,其余每一次使用的PBS都添加0.2%Triton X-100;最后,提升抗体稀释液中BSA和Triton X-100含量,BSA从3%提升至5%,TritonX-100的含量从0.1%提升至0.2%。结果拍照后统计自噬小体发现,新方法更加准确地标记GFP-LC3β指示物,自噬激活条件下示踪准确度显著提升(达4.2倍);新方法更加清晰地呈现自噬小体的形态和胞内分布,将自噬小体示踪的清晰度显著提升(达2.5倍);新方法还能使用不同荧光通道,同时标记其他自噬相关基因。结论本研究提供的一种优化小鼠成纤维细胞中自噬小体示踪的方法将为全面展示细胞自噬进程、深入了解细胞自噬相关机制提供有力的技术支持。
- 杨侃李晓宁OmaribaGideon李凯周宇荀肖君华
- 关键词：原代培养
- miR-505-3p在小鼠胚胎成纤维细胞中抑制可变剪接因子以调控运动神经元存活基因可变剪接
- 2016年
- 目的探究微小RNA 505-3p(miR-505-3p)对于运动神经元存活基因(survival motor neuron gene,SMN)可变剪接的影响。方法利用生物信息学数据库预测miR-505-3p靶基因,构建双荧光素酶报告载体,在小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)中验证靶基因为可变剪接因子(alternative splicing factor,ASF)基因,运用免疫印迹和免疫荧光染色验证miR-505-3p对ASF的抑制效果,利用实时定量PCR技术检测miR-505-3p对具有正常功能的全长SMN(SMN-FL)以及含有毒性的第7号外显子缺失的SMN(SMN-D7)表达量的影响及ASF在其中的作用。结果 miR-505-3P直接结合ASF3'端调控区并抑制ASF mRNA及蛋白表达量,抑制ASF蛋白在细胞核中的表达和分布。过表达miR-505-3p促进SMN-FL向SMND7的转化,而过表达靶基因ASF或者抑制miR-505-3p促进SMN-FL的保留。结论 ASF对SMN基因正常剪接形成SMNFL是必需的,miR-505-3p通过抑制ASF,从而干扰ASF对于SMN可变剪接的调控,导致正常的SMN-FL向毒性的SMN-D7转化。
- 杨侃李晓宁马骁骁李凯周宇荀肖君华
- 关键词：运动神经元存活基因
- 适合对kiss1基因表达调控因子高通量筛选的荧光报告系统的构建
- Kisspeptin(吻素)是多功能小肽,尤其在哺乳动物中的下丘脑中发挥性发育启动调控和维持生育功能的重要作用。了解其编码基因Kiss1的表达调控方式有助于解析生殖调控的分子机制。 GT1-7细胞是来源于小鼠下丘脑的能表...
- 李晓宁周宇荀
- 关键词：高通量筛选
- 借助双色荧光报告系统筛选并解析miRNA参与的Kiss1基因表达调控
- 下丘脑Kiss1基因通过感应机体的代谢状态，性激素水平等因素调控促性腺激素释放激素GnRH的脉冲式分泌，在哺乳动物的青春期起始调控和生殖功能维持方面发挥重要作用.而Kiss1基因自身表达调控机制还有待进一步解析.micr...
- 李晓宁周宇荀
- 关键词：MICRORNAS
