孙鹏
- 作品数：17 被引量：52H指数：5
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项NSFC-广东联合基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- K亚群禽白血病病毒gp85单因子血清的制备及其特异性鉴定被引量：3
- 2016年
- 为了制备一种快速特异性识别K亚群禽白血病病毒(ALV-K)的单因子血清,本试验将ALV-K接种DF1细胞,提取感染细胞DNA作为模板,PCR扩增1 005bp ALV-K-gp85和510bp ALV-K-gp85(fragment)基因。将其正确的阅读框插入表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(Rosetta)菌株中表达。将表达蛋白常规免疫昆明白小鼠制备抗血清。结果表明成功获得39.85和22.01ku的重组融合蛋白,且具有良好的免疫原性。间接免疫荧光试验(IFA)结果表明两血清均可与ALV-K反应,而不与ALV-A、ALV-B和ALV-J反应。本试验首次研制获得能特异性识别ALV-K的单因子血清,为K亚群禽白血病的快速检测奠定了基础。
- 孙鹏陈孜孟赵国梁崔宁祖铭崔治中苏帅
- 关键词：GP85基因
- 免疫抑制性病毒感染肉鸡群继发大肠杆菌的分离鉴定及多样性研究被引量：3
- 2014年
- 旨在了解免疫抑制性病毒感染肉鸡群后继发大肠杆菌的血清型及其耐药性的多样性。用J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增生症病毒感染或共感染1日龄商品代肉鸡,对两次重复试验中发生细菌感染而导致死亡的鸡进行麦康凯培养基分离培养。每个病变脏器各随机挑取5个红色菌落或(及)白色菌落,并分别进行生化试验、血清型鉴定和药敏试验。结果从58只呈现肝周炎或(和)心包炎的死亡鸡中分离到典型的红色菌落445个,白色菌落71个。经生化试验鉴定,516个菌落均为大肠杆菌。O抗原血清型鉴定结果表明,这些菌落分别属于12个不同的血清型。对12种常用抗生素的药敏试验(药敏片法和试管稀释法)结果表明,共感染能在较短时间内引起典型的大肠杆菌病,并引起较高的死亡率。从516个大肠杆菌中挑选的17组菌落(来自同一病鸡、同一脏器且经鉴定为同一血清型的5个菌落定义为一组菌落)的试管药敏试验的比较表明,第3组的5个菌落对黏杆菌素的最小抑菌质量浓度的范围为0.05~51.20 mg·mL-1;第17组菌落对丁胺卡那的最小抑菌质量浓度从0.05到51.20mg·mL-1,均相差1 000倍。同一群鸡肝周炎和心包炎的大肠杆菌分离株的高度多样性,证明这是在病毒感染诱发免疫抑制状态下发生条件性致病菌的继发性细菌感染。鸡群中大肠杆菌在耐药性上的多样性,是鸡群在不合理应用抗生素的条件下体内大肠杆菌迅速产生耐药菌株的遗传基础。
- 琚思迪董宣赵鹏李阳孟凡峰孙鹏董向磊高崧崔治中
- 关键词：免疫抑制性病毒肉鸡大肠杆菌血清型
- 招远市苹果园土壤营养状况分析与栽培调控技术研究
- 土壤本是生命之源亦是农业生产的基础，安全质优果品的生产依赖于良好的果园土壤状况。以我国苹果园土壤质量现状及施肥现状等统计数据为基础，通过对招远市苹果园土壤营养成分及酸化程度的研究分析，采用农业、物理、化学、生物相结合的栽...
- 孙鹏
- 关键词：苹果土壤营养起垄栽培自然生草
- H9N2亚型禽流感病毒HA基因的表达及其单因子血清的制备被引量：2
- 2015年
- 为了制备特异性识别H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的单因子血清,本试验提取H9N2亚型AIV RNA,RT-PCR后,分别扩增上段HA1、中段HA2和下段HA3 3段基因。将他们插入原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(Rosetta)菌株中表达。将表达的蛋白常规免疫昆明白小鼠,以制备抗血清。结果显示,成功获得3段重组融合蛋白,且均具有良好的免疫原性。间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,上段HA1、中段HA2制备的单因子血清均可与H9N2亚型AIV反应,而下段HA3则不能。重组马立克氏病病毒(MDV)MZC12 HA/NA同样证明HA1、HA2两段制备的单因子血清能识别HA基因的表达。本试验成功制备了识别H9N2亚型AIV HA的单因子血清,为H9N2亚型AIV的鉴别诊断及研究奠定了基础。
- 陈俊霞孙鹏许书珍李思菲苏帅赵鹏崔治中
- 关键词：H9N2亚型禽流感HA基因
- 敲除Meq基因的重组鸡马立克氏病毒与CVI988/Rispens疫苗株免疫保护效力的比较被引量：1
- 2014年
- 【目的】比较敲除meq基因的马立克氏病毒(MDV)与标准疫苗株CVI988/Rispens对MDV超强毒GX0101攻毒的免疫保护作用。【方法】本实验将1日龄SPF鸡120只随机分成4组,每组30只,分别饲养在正压过滤空气的SPF动物饲养隔离罩内。1日龄时,第1组鸡以2000PFU/只的剂量颈部皮下接种SC9-1;第2组鸡以2000PFU/只的剂量颈部皮下接种CVI988/Rispens;第3、4组为不免疫攻毒对照组。免疫接种后5 d后,第1、2、3组分别以2000PFU/只的剂量腹腔接种MDV GX0101。饲养至90日龄,记录死亡情况,对死亡鸡只剖检,并取疑似马立克特有病变脏器做病理切片。期间,检测不同免疫状态下病毒GX0101的增殖动态以及禽流感、新城疫灭活苗在鸡体诱导产生抗体的水平。对含有MDV母源抗体的海蓝褐鸡的试验方案与SPF鸡一致。【结果】SC9-1株免疫对感染MDV GX0101攻击SPF鸡、海兰褐鸡均提供100%的免疫保护作用;CVI988/Rispens对SPF鸡、海兰褐鸡分别提供86.7%、93%的免疫保护作用。未免疫SPF鸡攻毒组死亡率为53.3%,肿瘤率为16.7%;未免疫海兰褐鸡攻毒组死亡率为36.7%,肿瘤率为6.67%;相比,空白对照组鸡只没有任何病变及死亡。荧光定量结果显示,淋巴细胞和羽毛囊DNA中,SC9-1免疫组鸡体内GX0101的病毒拷贝数显著低于CVI988/Rispens免疫组。血凝抑制试验结果显示,SC9-1免疫攻毒组鸡的产生的AIV、NDV抗体水平高于CVI988/Rispens免疫攻毒组。【结论】SC9-1株免疫无论在SPF鸡还是含有MDV母源抗体的海兰褐鸡均能提供比CVI988/Rispens更好的免疫保护效果。
- 段伦涛苏帅王一新李思菲孙鹏陈文青崔治中
- 关键词：马立克氏病毒免疫保护作用
- 自然重组马立克氏病毒超强毒缺失meq基因生物学活性的比较研究
- 引言马立克氏病是由马立克氏病毒(MDV)引起的鸡的传染性肿瘤病。MDV疫苗的使用有效的预防了MD的爆发,随着疫苗的使用,MDV的毒力呈现逐渐增强的趋势。目前广泛使用的疫苗CVI988/Rispens已经不能对MDV超强毒...
- 苏帅崔宁孙鹏段伦涛陈孜猛崔治中
- 表达NDV-F基因重组马立克病病毒的构建及其在鸡体内外的复制被引量：3
- 2015年
- 以敲除meq基因的MDV-Ⅰ型弱毒GX0101△meq为载体构建一株表达外源基因NDV-F的重组病毒。将外源基因NDV-F的ORF插入到真核表达载体pcDNA3.1(-)中,扩增含有CMV启动子的NDV-F表达盒,同时扩增筛选基因Kan+表达盒,将他们插入到载体PMD18-T中。用含有MDV-US2区50bp同源臂的引物扩增串联表达盒,将产物电转进含有GX0101△meq的EL250宿主菌中,1%阿拉伯糖诱导掉阳性重组病毒基因组中的Kan+表达盒。挑选敲除Kan+表达盒的阳性克隆提取质粒,转染CEF细胞拯救重组病毒。将重组病毒腹腔注射鸡体,观察其在鸡体内的生长复制。成功拯救插入外源基因NDV-F的重组马立克病病毒rMDV-F,重组病毒在CEF细胞内能很好的复制表达且其在鸡体内也能很好的生长复制。以GX0101△meq为载体,结合Red E/T和FLP/FRT重组系统成功构建了表达外源基因NDV-F的重组病毒,为我们重组病毒的研究奠定了基础。
- 孙鹏李思菲张芙寿苏帅董宣赵鹏陈俊霞许书珍崔治中
- 关键词：马立克病病毒重组病毒
- 马立克氏病病毒meq基因缺失株细菌人工染色体序列自我敲除的分子鉴定被引量：3
- 2015年
- 本试验旨在对缺失meq基因的马立克氏病病毒（MDV）感染性克隆基因组中细菌人工染色体（BAC）序列的自我敲除进行分子鉴定。将含有表达cre重组酶真核表达盒的SC9—1重组质粒通过转染鸡胚成纤维细胞（CEF）拯救SC9—1重组病毒。将SC9—1重组病毒在CEF细胞上进行连续传代培养，利用病毒表达的cre重组酶在传代过程中逐步敲除病毒的BAC序列。分别提取1～10代不同代次SC9—1重组病毒的DNA作为模板，利用BAC序列特异性引物对病毒基因组中的BAC进行PCR检测。利用针对BAC序列gpt基因的特异性检测引物，以MDV保守基因pp38作为内参，对不同代次病毒基因组中BAc序列进行荧光定量PCR的检测。利用PCR扩增SC9—1病毒敲除BAC序列后基因组中残留loxp位点两端序列，通过测序分析进一步验证BAC序列的敲除。利用BAC序列特异性引物对不同代次病毒基因组中BAC序列的检测结果显示，1～5代病毒DNA均能扩增出600bp的特异性目的条带，证实病毒的基因组中含有BAC序列。6～10代病毒DNA均不能扩增出特异性目的条带，证实病毒基因组中没有BAC序列。荧光定量PCR结果显示，病毒基因组中的BAC序列随着病毒的传代逐渐减少，直至第6代已经完全检测不到BAC序列。在病毒BAC序列敲除的过程中，对每代病毒BAC序列敲除后残留loxp位点序列进行PCR测序鉴定，结果显示BAC序列敲除后基因组中仅留下一个loxp位点，序列同源性均在99．7％以上。结果表明，利用cre／loxp系统将病毒在CEF细胞上连续6代传代培养可将MDVmeq基因缺失株SC9—1的BAC序列完全敲除掉，且同源重组酶敲除BAC序列具有高度一致性。
- 孙鹏苏帅李延鹏丁家波崔治中
- 关键词：马立克氏病MEQ基因细菌人工染色体
- 3株马立克氏病病毒的分离鉴定及其主要致病基因分析被引量：7
- 2017年
- 为了解国内鸡群马立克病(MD)毒株目前的流行情况,在我国3个已免疫MD疫苗的白羽肉种鸡场暴发MD的鸡群中,通过临床剖检,组织病理学变化,病毒分离,IFA检测从发病鸡的淋巴细胞中分离到3株马立克氏病毒(MDV),并分别命名为SDAU1501、SDAU1502和SDAU1503。采用PCR方法扩增3株MDV的vIL8、pp38、meq致病基因,所得氨基酸序列与已发表的参考毒株序列进行比较分析,结果显示SDAU1501和SDAU1502的致病基因与强毒株的同源性达到97%以上,具有强毒特征;而SDAU1503的meq基因在第194位具有与CVI988同样的缺失(P),但其没有CVI988中177个核苷酸的插入突变,其具有与弱毒疫苗株的特征。MDV新的变异在不断发生,出现了不同类型的变异株,因此,对MD的流行情况与基因监测应当继续下去;同时,在MDV疫苗的研制更新上还有待于进一步研究。
- 刘英楠孟凡峰李阳孙鹏栾怀彪苏红芹崔贺常爽赵鹏崔治中
- 关键词：马立克病病毒病毒分离鉴定
- 马立克氏病毒SC9-2株生物学活性的比较研究及表达NDV-F基因重组病毒的构建
- 马立克氏病（Marek’s disease，MD）是鸡的一种高度接触性肿瘤病，其主要特征是淋巴组织增生和肿瘤的形成。马立克氏病病毒(Marek’s disease virus，MDV)包括三种血清型：血清1型（MDV-Ⅰ...
- 孙鹏
- 关键词：马立克氏病病毒生物学活性
