宋小凤
- 作品数：9 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 特异性表达人TBM、CD39的转基因猪创建
- 异种移植被认为是解决器官短缺的有效途径之一。猪与人类生理结构相似，是异种移植器官供体理想来源。人源化基因修饰猪到非人灵长类的异种移植临床前研究已取得显著进展，然而分子不匹配造成的凝血紊乱等问题是目前的主要障碍。血栓调节蛋...
- 宋小凤
- 关键词：血栓调节蛋白特异性表达
- 文献传递
- 胰腺特异性表达Hes1基因的构建及体外表达
- 2015年
- 为了探究胰腺的发育机制,以及制备胰腺缺陷型的小型猪模型,构建了特异性表达载体,开展了相关载体构建及体外验证研究.本研究以小鼠PDX1启动子为特异性启动元件,构建胰腺特异性启动小鼠Hes1基因的表达载体PDX1-Hes1,载体转染MIN-6胰岛β细胞、猪耳成纤维细胞及猪肾细胞,培养48h后,通过qRT-PCR、Western Blot检测.结果显示:Hes1在MIN-6胰岛β细胞中的RNA水平和蛋白水平均高效表达,而在非胰腺细胞猪耳成纤维细胞及猪肾细胞中均不表达.试验表明:胰岛特异性表达载体PDX1-Hes1的成功获得,为构建相关基因在胰腺中特异性表达的载体提供参考,为后续制备胰腺缺陷型的小型猪提供了条件.
- 魏静杨希祥石宁宁宋小凤冯冲潘登科臧荣鑫
- 胰腺特异性表达载体PDX1-eGFP构建及体外验证被引量：1
- 2015年
- 为了研究胰腺发育与缺陷的转基因特异性表达系统,探索胰腺特异性表达载体的构建并进行体外验证。以增强型绿色荧光蛋白(e GFP)为报告基因,小鼠PDX1启动子为特异性启动元件,构建胰腺特异性启动e GFP表达载体PDX1-e GFP,载体转染MIN-6胰岛β细胞和猪耳成纤维细胞,培养48 h后,进行荧光观察和RT-PCR、Western blot检测。结果显示,e GFP在MIN-6胰岛β细胞中的RNA水平和蛋白水平均表达,而在非胰腺细胞猪耳成纤维细胞中均不表达。本研究结果表明,成功获得胰岛特异性表达载体PDX1-e GFP,为构建相关基因在胰腺中特异性表达的载体提供依据,为制备胰腺缺陷动物奠定基础。
- 杨希祥魏静宋小凤石宁宁冯冲臧荣鑫潘登科李娟
- 猪胰岛素启动子调控EGFP表达载体的优化及体外验证
- 2014年
- 目的获得猪胰岛素启动子调控外源基因的高效表达载体,为制备转基因猪胰岛特异性表达目的基因奠定基础。方法利用猪胰岛素启动子(PIP,包含5'调控区、第一外显子、第一内含子及第二外显子ATG前的序列共1.5 kb)构建表达载体,连接PIP和EGFP的酶切位点HindⅢ设计在起始密码子前,命名为PIP-Hind IIIEGFP。鉴于酶切位点的插入位置可能会影响外源基因的表达效率,对载体进行了优化:将Hind III酶切位点删除,实现PIP和EGFP无缝连接,载体命名PIP-EGFP;将第一内含子3'端的内含子剪接受体位点(splicing acceptor site,SA)突变为Hind III内切酶识别位点,命名为PIP-SA(M)-EGFP。三种载体分别电转染小鼠胰岛素瘤β细胞株MIN-6细胞、猪耳成纤维细胞以及猪肾细胞,48 h后通过荧光强度、流式分析、RT-PCR及Western blot检测,验证载体的表达效率。结果转染细胞后,三种载体都仅在MIN-6胰岛β细胞表达绿色荧光。RT-PCR及其产物测序结果显示三种载体的胰岛素启动子第一内含子的剪切存在差异:载体PIP-Hind III-EGFP和PIP-EGFP的内含子存在剪切和不剪切两种情况,剪切不稳定;载体PIP-SA(M)-EGFP的SA位点突变后内含子不剪切,流式细胞及Western blot检测显示,与另外两种载体相比,该载体目的蛋白的表达量最高。结论通过突变胰岛素启动子第一内含子的3'端的剪接受体位点,成功获得了胰岛β细胞的高效表达载体,可用于制备胰岛特异表达外源基因的转基因猪。
- 于淑珍冯冲石宁宁宋小凤潘登科
- 关键词：特异性表达EGFP五指山小型猪
- 黄地老虎颗粒体病毒enhancin-like基因的表达与增效功能研究被引量：1
- 2012年
- 增效蛋白(ENHANCIN)是一种主要在昆虫杆状病毒中存在的杀虫增效因子,黄地老虎颗粒体病毒(Agrotis segetum granulovirus,AgseGV)基因组中有一个ORF的编码产物为杆状病毒ENHANCIN同源物,命名为en-hancin-like。生物信息学分析结果表明,AgseGV的enhancin-like基因编码产物含有ENHANCIN的保守域,无信号肽序列,不存在a-螺旋跨膜区,在其C-末端拥有类似哺乳动物的脯氨酸富集区。为了确定AgseGV的EN-HANCIN-like蛋白是否具有增效功能,构建了AgseGV的enhancin-like全基因和5′端片段(1 017bp)的原核表达载体。利用层析技术纯化截短片段的原核表达产物,以其为抗原制备了抗体。利用自制抗体和His-tag抗体,Western blot检测了enhancin-like全基因的表达产物。结果表明,在融合蛋白预期大小处显示出阳性条带,证明目的基因得到了良好的表达。以棉铃虫为供试虫进行生物测定,证明在棉铃虫核多角体病毒(HaNPV)浓度为1.17×102 PIBS/mL时,AgseGV enhancin-like的全基因原核表达产物能使其感染3龄初幼虫的死亡率提高16.25%,增效作用显著。但是,5'端截短片段的原核表达产物对HaNPV没有增效作用。
- 张小霞梁振普陈晓慧宋小凤王丽薇邵新峰
- 关键词：增效蛋白WESTERNBLOT棉铃虫核多角体病毒
- TnGV ENHANCIN原核表达产物功能验证及真核表达
- 增效蛋白(Enhancin)是一类主要由昆虫杆状病毒基因编码金属蛋白酶，分子量大小约89～110KDa，它通过破坏昆虫中肠围食膜的完整结构，加速病毒粒子的侵入，从而提高生物杀虫剂对害虫的感染效率。
为了寻找和确定增...
- 宋小凤
- 关键词：粉纹夜蛾增效蛋白围食膜真核表达载体生物杀虫剂
- 文献传递
- 河南省杨树新生黄叶病害的差异蛋白质组学分析
- 2012年
- 采用双向电泳和MALDI-TOF-TOF质谱联用技术,对近年来河南省的新生黄叶病害杨树进行了差异蛋白质组学研究。经图谱分析,在叶片、韧皮部和根部分别获得了98个(61个上调,37个下调)、90个(42个上调,48个下调)和41个(19个上调,22个下调)差异蛋白点。对其中差异表达1.5倍以上的61个蛋白点进行了质谱鉴定,58个蛋白质点鉴定成功,这些蛋白点可归类于26种蛋白质。这些蛋白包括参与光合作用和与抗性相关的蛋白。研究结果有助于揭示病害的发生机理,铁蛋白的鉴定结果对病因的确定具有重要参考价值。
- 梁振普宋小凤张小霞许锋邵新峰
- 关键词：蛋白质组双向电泳质谱
- 绿色荧光蛋白在α-1,3半乳糖基转移酶敲除猪组织器官的表达分析被引量：1
- 2015年
- 猪是人类异种器官移植的理想供体,然而猪-人的异种器官移植会产生剧烈的排斥反应。虽然已制备的α-1,3半乳糖基转移酶基因敲除(Galactosyltransferase gene knockout,GTKO)猪可有效缓解猪-人异种器官移植引起的超急性免疫排斥,但缺少报告基因直观示踪移植后的细胞迁移及器官排斥状态。本文将CAG启动子驱动增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达载体导入GTKO猪耳成纤维细胞,通过体细胞核移植技术制备了EGFP猪。利用双荧光蛋白观测镜、荧光显微镜及定量PCR扩增观察、检测和分析克隆猪各组织器官中EGFP蛋白和转录本的表达状况。结果显示,EGFP蛋白及转录本在克隆猪各组织器官中均有表达,但在肝脏和中枢神经系统中表达较弱。本文成功获得了各组织器官表达EGFP的GTKO猪,为EGFP示踪异种细胞组织移植奠定了基础。
- 李智方冯冲纪慧丽石宁宁宋小凤赵勤丽龙川潘登科杨小淦
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白异种移植
