刘志华
- 作品数：10 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划军队“十一五”科技攻关课题军队科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙型肝炎病毒B基因型与C基因型preC/C区重组的研究
- 乙型肝炎病毒(HBV)可分为A-F6个基因型,其中B和C型主要分布于亚洲.当某一基因型全基因组序列有一段与另一个基因型序列的相应部分相同的杂合结构,则认为这一序列可能发生了重组;重型B基因型可能与临床疾病的严重性相关.本...
- 骆抗先刘志华何海棠彭劼戴炜梁蔚芳侯金林
- 关键词：乙型肝炎病毒B基因型C基因型
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒C基因G87变异对宿主细胞HLA-I表达的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨HBVC基因G87变异对宿主细胞表面HLA I表达的影响。方法 采用定点突变技术和亚克隆技术 ,将HBV野生型基因组质粒构建为C基因G87变异株表达载体 (EBO G87)和野生株表达载体 (EBO WT) ,以脂质体技术分别转染HepG2细胞 ,转染细胞经FITC标记的鼠抗HLA ABCmAb染色 ,流式细胞术测定细胞表面HLA I的表达。结果 构建的EBO G87和EBO WT重组载体经内切酶双酶切鉴定及核苷酸序列测定证实。HepG2细胞表面HLA I表达的平均荧光强度 ,EBO空载体转染的细胞为 2 3,EBO WT转染的细胞明显增强至 18 8,EBO G87转染的细胞增至 10 5。结论 2株HBV上调HLA I表达强度不同 ,C基因G87变异可使宿主细胞表面的HLA
- 陈伟红刘志华潘蕾张岩张颖洪沙王九平周永兴
- 关键词：肝炎病毒乙型点突变基因MHC
- 缺失耶尔森菌HPI irp6基因EAggEC的构建被引量：2
- 2003年
- 目的 构建小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6重组自杀质粒 ,并应用其构建EAggEC上该基因的缺失株。方法 根据已知小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6基因序列 ,设计PCR引物 ,扩增并克隆了irp6结构基因 ,在体外进行精确突变后 ,插入氯霉素抗性基因。再将含氯霉素的irp6缺失基因亚克隆入自杀质粒 pKNG1 0 1中 ,构建成irp6基因重组自杀质粒 pKH6 ,并以肠粘附聚集性大肠杆菌EAggEC 1 7 2为出发菌株 ,通过体内同源重组 ,置换其irp6基因。结果 经接合转移和同源重组 ,利用蔗糖抗性筛选 ,pKH6上的同源序列有效的置换了EAggEC 1 7 2的irp6基因。结论 以小肠结肠炎耶尔森菌为靶构建的irp6基因重组自杀质粒成功的缺失了EAggEC 1 7 2的irp6基因 ,获得了携带耶尔森菌强毒力岛的EAggEC 1 7 2irp6基因缺失株EAG6 。
- 胡静俞守义阚飙刘志华
- 关键词：耶尔森菌
- HBV全基因重组腺病毒感染免疫研究
- 复制缺陷型腺病毒载体是一种比较成熟的病毒载体,因其能够感染多种类型细胞,外源基因转移和表达效率高,腺病毒转载的外源基因以附加体的形式表达特点,目前已被广泛地应用于基因治疗、基因疫苗和基因功能的研究中.本文借助复制缺陷型腺...
- 刘志华何海棠侯金林骆抗先
- 关键词：病毒感染免疫应答乙肝病毒乙型肝炎
- 文献传递
- 一株鸭乙型肝炎病毒DHBV全基因的克隆和序列分析被引量：3
- 2004年
- 目的从本地樱桃谷鸭血清中克隆鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA,并进行序列分析.方法用PCR扩增DHBV全基因,连接至T载体上,挑选克隆进行测序分析,与GenBank中16株DHBV全基因组进行同源性比较,并进行分子进化树分析.结果24-18与16株DHBV基因组比较,核苷酸同源性介于89.4%99.3%之间,各开放阅读框氨基酸同源性比较显示差异显著地方位于P区.结论24-18属于DHBV西方基因型中的一个亚型.
- 梁蔚芳刘志华何海棠骆抗先
- 关键词：鸭乙型肝炎病毒克隆
- HBV全基因核心蛋白变异株稳定表达载体的构建及其抗原表达被引量：2
- 2003年
- 通过定点突变技术将HBV质粒p3.8Ⅱ构建成核心蛋白变异株V6 0和L97。经序列测定和生物学活性检测后 ,亚克隆入EB病毒稳定表达载体。重组载体分别作内切酶酶切鉴定和序列测定证实 ,用脂质体介导转染HepG2 细胞稳定传代 ,定量测定各株培养上清HBV抗原表达。结果发现 ,3株HBsAg含量S/N值接近 ,变异株HBeAg含量S/CO值低于野生株。上述
- 陈伟红刘志华王九平何海棠骆抗先
- 关键词：HBVEB病毒
- 乙型肝炎病毒核壳蛋白变异株在HepG2细胞的HLA-I表达被引量：3
- 2003年
- 目的：研究HBV adr亚型野生株和核壳蛋白变异株在HepG2细胞表面的HLA-I／抗原肽复合物的表达．方法：通过定点突变技术将1．2拷贝HBV野生型质粒p3．8Ⅱ构建成核壳蛋白变异株V60和L97．经序列测定和生物学活性检测后，野生株和变异株重组质粒分别亚克隆入EB病毒表达载体EBO-plpp以稳定表达．重组载体EBO-野生株、EBO-V60和EBO-L97分别作内切酶双酶切和序列测定鉴定，再用脂质体介导转染HepG2细胞，ELISA(Abbott)试剂盒定量检测各株培养上清HBV抗原，转染细胞用FITC标记的鼠抗HLA-ABC单抗染色，流式细胞术分析细胞表面HLA—I表达．结果：3株重组载体经内切酶消化，电泳后显示2条区带，分别与1．2拷贝HBV基因组和EBO载体大小相同．测序结果证实EBO-V60和EBO-L97分别在nt2078c→G和nt2189A→C，保持原定点突变．EBO-野生株的培养上清HBeAg定量S／CO值明显高于变异株V60和L97，3株：HBsAg定量S／N值接近，HBsAg表达相近表明实验的转染效率相当．EBO空载体转染的HepG2细胞HLA-I轻微表达，3株重组载体转染细胞HLA—I的荧光强度不同，野生株增强为18．2，L97明显升高至34．5，而V60降低至3．4．结论：HBV能增强HepG2细胞表面HLA-I／抗原肽复合物的表达，核壳蛋白热点变异V60和L97可使宿主细胞HLA-I表达发生变化。
- 陈伟红何海棠张明霞刘志华周永兴
- 关键词：乙型肝炎病毒HEPG2细胞HLA-I野生株流式细胞术基因表达
- 两种DNA的PCR产物克隆入同一载体的构建策略
- 2001年
- 目的 以克隆小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛可变区首尾区域的双独立片段为例 ,探讨克隆入同一载体的基因数多于一个时可采取的构建策略。方法 在一个基因A正义引物与另一基因B负义引物的 5′端分别设计与克隆载体相匹配的酶切位点 ,在B基因正义引物与A基因负义引物的 5′端设计相同的酶切位点。分别进行PCR扩增 ,再通过引物的 5′端相同的酶切位点进行两PCR产物的酶切与连接 ,以连接产物为模板 ,应用A基因正义引物和B基因负义引物进行PCR扩增 ,将此次PCR产物经常规方法克隆入载体。
- 胡静俞守义刘志华李文全
- 关键词：克隆DNA重组小肠结肠炎耶尔森菌可变区
- 一株输血传播病毒新变种的克隆和序列分析
- 2002年
- 目的从1例不明原因转氨酶升高的病人血清中克隆输血传播病毒(TTV)DNA,并进行序列分析。方法用巢式PCR扩增TTVDNA长片段,连接至pGEM-T载体上,挑选一个克隆(56-B)进行测序。将56-B与GenBank中五株TTV进行氨基酸和核苷酸序列的同源性分析,并用最大似然法进行分子进化分析。结果56-B株与TA278等五株TTV序列的核苷酸同源性分别为42.4%、48.2%、47.9%、49.8%、61.7%,氨基酸序列的同源性更低,但其5'和3'两端非编码区的序列仍然很保守。结论56-B株与其他TTV株之间的同源性很低,有很高的基因异质性,是TT 的一个新变种,代表TTV的一个新的基因型。
- 刘志华骆抗先何海棠
- 关键词：输血传播病毒基因异质性巢式PCR
- 用腺病毒载体介导的基因转移研究HBV//C区热点变异对小鼠免疫应答的影响
- 国内外的研究发现HBV／C区变异与病变重度相关，但两者之间的因果关系尚未确定。本研究以重组腺病毒为载体，将含有变异位点的HBV基因组转入HepG2细胞和BALB／C小鼠，从体内和体外研究变异位点的生物学意义，旨在阐明C区...
- 刘志华
- 关键词：HBV重组腺病毒免疫应答
- 文献传递
