目的探讨LSD1基因对卵巢癌SKOV3细胞系紫杉醇耐药性、增殖和细胞周期的影响。方法采用大剂量间断冲击方法建立人卵巢癌耐药细胞系SKOV3 res TAX。针对LSD1基因m RNA靶向设计小分子干扰RNA(si RNA)沉默片段,构建慢病毒颗粒载体,并转染卵巢癌耐药细胞系SKOV3 res TAX。流式细胞术检测慢病毒转染效率;实时定量聚合链式反应检测转染后LSD1的转录水平;CCK-8试剂盒检测转染后耐药细胞系的增殖能力及紫杉醇耐受能力;流式细胞术检测转染后细胞周期的时相变化;蛋白质免疫印迹法检测LSD1基因、抑癌基因p53和p21、细胞周期依赖性蛋白CDK2、周期蛋白cyclin E及核增殖抗原PCNA的表达。结果通过测定卵巢癌细胞系紫杉醇半抑制浓度,证明耐药性细胞系建立成功。流式细胞术结果显示,慢病毒颗粒载体转染效率均非常高,LSD1沉默慢病毒载体si-LSD1-1能显著降低LSD1的转录水平。转染后耐药细胞系的增殖能力及紫杉醇耐受能力都显著下降,细胞周期被阻滞在G0/G1期。蛋白质印迹结果显示,同si-control组相比,LSD1蛋白表达量下降,同时p53和p21表达上调,CDK2、cyclin E和PCNA表达被显著下调。结论 LSD1基因与卵巢癌SKOV3耐药细胞系的增殖、细胞周期以及紫杉醇耐受能力具有密切关系,可作为紫杉醇等化疗药物联合基因治疗的候选靶点。
