冯娟
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 供职机构：广东药科大学基础学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程轻工技术与工程化学工程更多>>
- 响应面法优化漆酶基因lac1338表达漆酶的发酵条件被引量：2
- 2016年
- 为提高Escherichia coli BL21(DE3)中漆酶基因lac1338的表达水平,采用响应面法对其发酵条件进行优化.首先用Plackett-Burman法筛选出3个影响较大的重要因素,分别为温度(Q1)、诱导时间(Q3)以及诱导前菌体浓度OD600 nm(Q4).继而结合响应面分析,建立以漆酶酶活为响应值的二次回归方程模型,即Y=75.33+3.30A+9.35B+5.35C-1.69AB+0.80AC+11.50BC-25.97A^2+1.83B^2-4.66C^2,从中获得最优的发酵条件:诱导温度为31℃,诱导时间为20 h,诱导前的菌体浓度OD600 nm值为1.8.采用该发酵条件,供试菌株的漆酶比酶活达到22.8 U/mg,较优化前漆酶的表达量(10.7 U/mg)提高了2.13倍,其试验值与预测值基本相符.说明预测模型可靠性高,可应用于漆酶发酵条件的优化.
- 夏玉林冯娟李荷
- 关键词：漆酶PLACKETT-BURMAN响应面发酵条件优化
- 漆酶基因lac1338在大肠杆菌中的表达条件优化及其染料降解作用被引量：6
- 2014年
- 在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对已构建好的表达漆酶蛋白HIS-Lac1338的工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338的诱导表达条件进行优化,以期提高蛋白产量,降低生产成本.研究了培养温度、诱导时间、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、铜离子(Cu2+)浓度等不同条件对HIS-Lac1338表达量和活性的影响.通过聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)分析确定最佳表达条件,用酶标仪测其酶活性.结果显示,温度为30℃,初始菌体浓度D600 nm为1.6,加终浓度为0.2 mmol/L的IPTG及终浓度0.5 mmol/L的Cu2+,培养16 h,融合蛋白表达量提高了约2.5倍,为450 mg/L,是已报道的最高表达量;以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为底物测纯酶的比酶活为22.8 U/mg.染料降解作用显示其对刚果红和靛红有95%以上的降解能力.研究表明,工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338产漆酶量高且大部分为可溶性蛋白,可以快速生产,具有较好的应用价值.
- 冯娟覃炎锋李荷
- 关键词：漆酶大肠杆菌表达条件优化染料降解
- 漆酶基因lac1338的原核表达、酶学性质及定向进化研究
- 漆酶(laccase，EC1.10.3.2)是一类含铜的多酚氧化酶，作用底物包括酚类、芳胺类、羧酸类、甾体激素和生物色素等。其不仅在木质素的降解和制浆造纸中有重要的应用前景，在废水处理、生物漂白、环境污染物降解、土壤修复...
- 冯娟
- 关键词：漆酶基因酶学性质定向进化分子改造
- 源于红树林土壤宏基因组文库的新型磷脂酶A_1基因的筛选、克隆表达及酶学性质被引量：3
- 2015年
- 【目的】利用宏基因组学的方法从红树林土壤中筛选新型酯水解酶类。【方法】构建红树林土壤宏基因组文库,采用以三丁酸甘油酯为底物的功能筛选方法,对筛选出的阳性克隆进行系统发育树分析,实现新型磷脂酶A1基因的原核表达,研究重组酶的酶学性质。【结果】筛选到一个新的磷脂酶A1编码基因phop1413(GenBank登录号KF767097),测序表明其全长1413bp,可编码470个氨基酸残基,表达蛋白约51.7kD,表达量高达220mg/L,NCBI中BLAST比对及系统进化树分析显示该蛋白属于磷脂酶类的FAMILYⅥ家族;酶学性质分析表明,该重组酶的最适反应底物为对硝基苯酚己酸酯,比酶活为124U/mg;最适反应温度为54°C,最适pH7.8;50°C热处理1.5h剩余相对酶活为44%,表现出很好的热稳定性。【结论】通过构建宏基因组文库利用功能筛选方法获得一个新型磷脂酶A1基因;研究中获得的新型磷脂酶A1性质较好,可用于植物油酶法脱胶。
- 冯娟李荷
- 关键词：宏基因组文库磷脂酶克隆表达酶学性质
