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Fat-1基因载体构建及其在家鸡中的体外表达: 2016年; 试验旨在构建一种适合于家禽体外表达的ω-3脂肪酸脱氢酶Fat-1基因的真核生物表达载体,为后续转基因鸡的生产奠定基础。根据家鸡密码子使用频率,对秀丽隐杆线虫Fat-1基因进行优化改造;将改造后的Fat-1基因(cFat-1)连接至pLL3.7表达载体,构建重组质粒pLL3.7-cFat-1;经PCR、酶切、序列分析等手段对重组质粒进行鉴定;用胰酶消化法培养鸡成纤维细胞,利用TurboFect TM转染试剂将pLL3.7-cFat-1转染体外培养的成纤维细胞;通过RT-PCR检测和绿色荧光观察分析cFat-1基因在细胞中的表达。结果表明cFat-1基因在鸡成纤维细胞中高效转录并表达,成功构建了可在家禽体外表达cFat-1基因的特异性表达载体。本研究首次获得可在家禽体外表达cFat-1基因的转基因细胞系,证实了经基因改造后cFat-1基因可在家禽体外的高效转录和表达,为后续制备富含ω-3脂肪酸的转基因鸡奠定基础。; 王颖顾真真郭若婷欧科鹏刘乙刘小军; 关键词：成纤维细胞基因表达转基因

绵羊甲状腺自主合成并分泌褪黑素的研究被引量：5: 2015年; 本研究旨在探讨绵羊甲状腺是否表达催化褪黑素合成的关键酶基因AANAT、HIOMT以及褪黑素受体基因MT1,并自主合成和分泌褪黑素,为研究甲状腺在绵羊季节性繁殖中的功能奠定基础。利用RT-PCR、组织免疫荧光、细胞免疫荧光和ELISA技术,分别在基因、蛋白质和细胞水平对绵羊甲状腺中合成褪黑素的关键酶基因AANAT、HIOMT以及褪黑素受体基因MT1的表达、细胞定位以及褪黑素的合成与分泌进行了研究。结果表明:绵羊甲状腺表达褪黑素合成酶基因AANAT、HIOMT和褪黑素受体基因MT1,并能够自主合成和分泌褪黑素。该研究首次证实了绵羊甲状腺具有自主合成并分泌褪黑素的功能,表明甲状腺内部可能存在有通过褪黑素调控甲状腺素合成的新通路,为进一步研究绵羊甲状腺自主合成褪黑素的功能奠定了基础。; 欧科鹏李尤简郭若婷王颖顾真真刘乙刘小军; 关键词：甲状腺褪黑激素 AANAT HIOMT 绵羊

绵羊甲状腺细胞原代培养及鉴定被引量：1: 2015年; 试验旨在建立一套完整的绵羊甲状腺细胞的原代培养方法,为绵羊甲状腺功能的体外研究奠定基础。通过常规消化分离得到甲状腺滤泡上皮细胞,光镜下对不同培养时间的细胞进行形态学观察,并结合RT-PCR、细胞免疫荧光和ELISA,对培养的绵羊甲状腺细胞从形态,甲状腺球蛋白(TG)、甲状腺过氧化物酶(TPO)、促甲状腺激素受体(TSHR)特异基因mRNA表达,TG特异抗原蛋白表达和甲状腺激素T3、T4的分泌功能等方面进行鉴定。结果显示,绵羊甲状腺细胞在体外呈贴壁式生长,具有上皮样细胞特点;TG染色呈胞浆阳性,具有特异TPO、TG、TSHR mRNA表达及分泌T3、T4的功能,但T3、T4的分泌量随培养时间的延长呈递减趋势。本研究成功地建立了简便可行的绵羊甲状腺细胞的原代培养方法,为深入研究绵羊甲状腺的功能提供了试验平台。; 欧科鹏李尤简郭若婷王颖刘小军; 关键词：绵羊甲状腺细胞原代培养形态学

绵羊Otx-2基因的分子克隆、组织表达及其与季节性繁殖关系的研究被引量：1: 2015年; 旨在研究绵羊Otx-2基因与绵羊繁殖的关系,从阿勒泰绵羊下丘脑组织中克隆Otx-2及MT1、KISS-1、GnRH基因CDs(Coding region)区部分序列,采用RT-PCR分析了这些基因在心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠、胃、大脑、小脑、子宫、垂体、松果体、下丘脑和甲状腺组织中的表达差异;进一步用实时荧光定量PCR方法分析繁殖期和繁殖间期绵羊下丘脑中这些基因在日间和夜间表达的变化规律。结果表明,Otx-2和KISS-1、MT1基因在各组织中均有不同程度的表达,其中Otx-2和KISS-1在下丘脑中的表达量较高。Otx-2基因与KISS-1和GnRH基因在繁殖期的表达量均高于繁殖间期的表达量,且均表现出夜间的表达量极显著高于日间表达量的相似表达规律,综上表明,Otx-2基因可能参与绵羊的季节性繁殖调控。; 郭若婷鲁慧文欧科鹏王颖刘乙顾真真刘小军; 关键词：下丘脑季节性繁殖绵羊

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王颖