庄志超
- 作品数：13 被引量：9H指数：2
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- 肠道病毒71型VP1蛋白毒力候选位点的筛选及其对病毒复制能力的影响
- 手足口病是由多种肠道病毒引起的病毒性传染病，主要感染五岁及以下婴幼儿，可导致患者出现发热以及手足口周的疱疹等临床症状，严重时可出现无菌性脑膜炎以及神经源性肺水肿等一系列神经系统的并发症，甚至可以导致患者死亡。目前手足口病...
- 庄志超
- 关键词：肠道病毒71型VP1蛋白重组病毒致病机制
- 文献传递
- 肠道病毒71型微复制子的构建
- 2015年
- 目的 构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系,研究微复制子的复制及表达情况。方法聚合酶链式反应扩增绿色荧光蛋白（EGFP）,利用特定酶切位点及连接酶,将目的基因片段连接至p MD19-T载体,分别构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系。荧光显微镜下观察微复制子表达情况,实时荧光定量PCR观察微复制子复制情况。结果 EV71非结构蛋白微复制子及EV71 3C蛋白酶微复制子表达后,均可观察到特异性绿色荧光,荧光强度有明显差异;转染后12~72 h取样所测RNA含量几乎不变。结论 非结构蛋白全长及3C蛋白酶启动微复制子转录强度不同,所构建微复制子不具备复制功能,提示结构蛋白编码区对病毒RNA复制有重要意义。
- 马英伟孙乐乐李静乔乔庄志超赵丽于学杰王志玉温红玲孙妍琳
- 关键词：肠道病毒71型报告基因非结构蛋白
- 肠道病毒71型5’UTR嵌合病毒及其拯救方法和应用
- 一种肠道病毒71型5’UTR嵌合病毒，拉丁文学名：(Human？enterovirus？71？5’UTR？chimeric？virus)，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：湖北省武汉市武汉大学校内，保藏...
- 温红玲郝树彬孙乐乐李静乔乔马英伟庄志超王志玉
- 文献传递
- 肠道病毒71型3CD蛋白对细胞的损伤作用被引量：1
- 2015年
- 目的研究肠道病毒71型(EV71)3CD蛋白在致病机制中的作用。方法实验分为对照组、SDLY1组、SDLY107组和SDLY107(1-3CD)组。通过反向遗传技术将弱毒株SDLY1株的3CD蛋白编码区置换到强毒株SDLY107株,形成拯救病毒SDLY107(1-3CD)株。将EV71病毒接种于RD细胞和Vero细胞,于37℃和39.5℃孵育一定时间后,采用MTT试验检测活细胞量,以判断病毒对细胞损伤作用的改变。结果 37℃下,拯救病毒SDLY107(1-3CD)对细胞的损伤作用弱于SDLY107株,但仍强于SDLY1株(P<0.05);39.5℃下,拯救病毒SDLY107(1-3CD)株对细胞的损伤作用较SDLY107株下降(P<0.05),但与SDLY1株的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EV71 3CD编码区的置换可以改变病毒对细胞的损伤作用,3CD蛋白编码区可能存在影响病毒毒力的位点。这一发现有助于理解EV71的致病机制。
- 李静乔乔孙乐乐马英伟庄志超赵丽王志玉温红玲
- 关键词：肠道病毒71型细胞损伤
- 1例手足口病患者及其密切接触者的病原检测与序列分析被引量：2
- 2016年
- 目的 对山东省济宁市手足口病患者及其接触者标本进行病毒分离以及基因组序列测定与分析,捕捉病毒在传播过程中的变异情况.方法 使用RD细胞分离病毒,通过8对位于保守区的首尾重叠的全序列扩增引物进行扩增和序列的测定与拼接,并对全基因序列以及氨基酸序列与肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)各亚型标准株进行同源性分析以及遗传进化分析.结果 自1例患儿及其密切接触者各分离得到1株EV71分离株,分别命名为SDJN2015-01和SDJN2015-01.1;同源性分析显示分离到的两株病毒与C4a亚型株EU703813同源性最高;遗传进化分析显示两株病毒同属于C4a亚型.序列比对发现,两株病毒共存在12个核苷酸的差异,导致6个氨基酸的差异,分别为VP1区K98E(全编码区为K663E)和A133T(A698T)以及2C区D48N(D1159N)、V126I(V1237I)、I238V(I1349V)和N314Y(N1425Y).结论 SDJN2015-01和SDJN2015-01.1株同属EV71C4a亚型,其与C4a亚型标准株EU703813具有高度同源性;两株病毒间在VP1和2C区产生的氨基酸的变异对病毒毒力以及感染能力是否有影响有待进一步研究.
- 庄志超颜丙新郝树彬姜文国白永娟李纯鲁燕赵丽王志玉
- 关键词：EV71同源性分析遗传进化分析
- 肠道病毒71型毒力候选位点的筛选及其作用机制研究
- 温红玲李纯董祯刘子薇温小菁陈锐庄志超赵丽王志玉
- 肠道病毒71型嵌合体病毒感染性克隆的构建与鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的：构建含有弱毒株（SDLY 1株）2A、3B基因片段的强毒株（SDLY 107株）的嵌合体病毒，为进一步研究EV71的毒力建立初步的反向遗传操作平台。方法利用重叠PCR的方法，获得2A、3B基因片段，双酶切后置换到含有SDLY 107株全长的质粒pMD19-T中，利用体外转录获得感染性RNA，转染Vero细胞，成功拯救病毒后经PCR、免疫荧光和免疫印迹对其进行鉴定，测序验证， CCID50和空斑试验测定病毒的滴度。结果成功构建了嵌合体病毒SDLY 107-2A-1和SDLY 107-3B-1感染性克隆，其转染Vero细胞后可观察到典型的细胞病变，PCR试验、间接免疫荧光和免疫印迹试验均证明EV71感染性克隆构建成功，CCID50和空斑试验测得嵌合体病毒SDLY 107-2A-1和SDLY 107-3B-1的滴度分别为1．25×10^5 PFU／ml和0．7×10^5 PFU／ml。结论成功拯救了嵌合体病毒SDLY 107-2A-1和SDLY 107-3B-1，其对细胞病变效应与亲本病毒SDLY 107株相似，为进一步在细胞和体内试验中测定病毒的毒力提供基础研究。
- 乔乔李静孙成玺马英伟庄志超孙乐乐赵丽王志玉温红玲
- 关键词：EV71毒力
- 肠道病毒71型3C嵌合病毒及其拯救方法和应用
- 一种肠道病毒71型3C嵌合病毒及其拯救方法和应用，拉丁文学名：(Human？enterovirus？713C？chimeric？virus)，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：湖北省武汉市武汉大学校内，...
- 温红玲郝树彬李静乔乔马英伟庄志超王莉鸿王志玉
- 文献传递
- 肠道病毒71型3CD嵌合病毒及其拯救方法和应用
- 一种肠道病毒71型3CD嵌合病毒及其拯救方法和应用，拉丁文学名：(Human？enterovirus71？3CD？chimeric？virus)，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：湖北省武汉市武汉大学校...
- 温红玲郝树彬乔乔李静马英伟庄志超王莉鸿王志玉
- 文献传递
- MTT试验检测EV71 2A蛋白对宿主细胞损伤作用被引量：1
- 2016年
- 目的在Vero细胞、RD细胞和U87细胞3种细胞系中,研究EV71的2A蛋白对宿主细胞增殖能力的影响及对细胞的损伤作用,揭示2A蛋白在EV71的致病机制中所起的作用。方法将野毒株EV71SDLY 107株(强毒株)、EV71SDLY 1株(弱毒株)和嵌合毒株EV71SDLY 107-2A-1感染Vero细胞、RD细胞、U87细胞后,利用MTT试验测定3种细胞在感染病毒后不同时间点的存活情况,绘制细胞生长曲线,比较细胞增殖程度,并利用单因素方差分析法分析3种细胞在感染不同病毒48h后的存活率;结果 EV71SDLY 107株感染Vero细胞和RD细胞后细胞增殖程度和存活率均低于EV71SDLY 1株(t=41.64,P<0.001;t=33.28,P<0.001);EV71SDLY 107-2A-1嵌合株感染Vero细胞和RD细胞后,细胞增殖程度和存活率均高于亲本病毒EV71SDLY 107株,低于EV71SDLY 1株(t=17.97,P<0.001;t=42.09,P<0.01);EV71SDLY 107-2A-1株感染U87细胞后细胞存活率低于EV71SDLY 1株(t=8.85,P<0.001),但与EV71SDLY 107株感染后细胞存活率无统计学差异(t=0.74,P=0.603);不同细胞感染同株病毒48h后,U87细胞存活率均为最低,Vero细胞存活率均为最高。结论 EV71强毒株的2A蛋白对细胞产生的损伤作用大于弱毒株的2A蛋白,提示2A蛋白在EV71对宿主细胞的作用中发挥功能。
- 乔乔李静张文强马英伟庄志超白永娟赵丽王志玉温红玲
- 关键词：EV71细胞增殖存活率
