孙慧
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肠出血性大肠埃希菌O157：H7Ⅱ型志贺毒素的纯化及功能鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的亲和层析纯化肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157：H7Ⅱ型志贺毒素，并鉴定其生物学功能。方法用抗-Ⅱ型志贺毒素分子A亚单位的抗体S1D8耦联至柱填料Sepharose 4B，制备亲和层析柱。纯化EHEC O157：H7菌体分泌的毒素分子，分别用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹法鉴定毒素分子纯度和特异度，将纯化毒素倍比稀释，观察其对Vero细胞和小鼠的毒性作用，计算其对细胞半数致死量（CD50）和对小鼠的全数致死量（LD100）；观察抗毒素血清对小鼠进行毒素攻击的保护作用。结果通过亲和层析从EHEC O157：H7培养物中成功纯化Ⅱ型志贺毒素。SDS-PAGE显示，其A、B亚单位的相对分子质量分别为32000和7500，纯化的毒素分子可分别与Ⅱ型志贺毒素A、B亚单位特异性的单抗结合；对Vero细胞和小鼠均存在致死作用，其CD50和LD100分别为20ng／L和5ng，小鼠体内抗毒素血清对毒素可有效中和。结论成功纯化Ⅱ型志贺毒素，并证实其在细胞和动物模型中的毒性作用。
- 焦永军曾晓燕郭喜玲汪华崔仑标李显冯振卿孙慧万佳艺史智扬
- 关键词：大肠埃希菌O157:H7志贺毒素VERO细胞疾病模型印迹法
- 肝细胞癌人源抗c-Met抗体Fab的筛选及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的从大容量人源Fab抗体库中筛选全人源抗c-Met抗体，并对抗体与肝癌细胞的结合活性进行初步鉴定。方法利用Met-Fc融合蛋白对大容量人源Fab抗体库进行固相筛选，经过5轮固相筛选，随机挑选30个克隆经酶联免疫吸附法差减鉴定，阳性克隆进行可溶性表达；用c-Met表达阳性的人肝癌细胞株鉴定抗c-Met抗体Fab的结合活性。结果Western blot、免疫荧光结果显示，c-Met分子表达于SMMC721、BEL7402人肝癌细胞膜上；从大容量人源Fab抗体库中筛选出1株抗c-Met抗体Fab（AM2-26），经免疫共沉淀、荧光激活细胞分类术、免疫荧光分析，结果显示AM2-26与人肝癌细胞表面c-Met分子有较好的结合活性。结论从人源Fab抗体库中筛选的AM2-26能够与肝癌细胞表面c-Met分子特异性结合，为研制用于肝癌生物治疗的靶向药物，提供了候选分子。
- 孙慧万佳艺朱晓娟焦永军朱进冯振卿刘政
- 关键词：肝细胞受体蛋白质酪氨酸激酶类
- 人源天然Fab噬菌体抗体库的构建及抗c-Met抗体的筛选、鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的:构建大容量人源天然Fab噬菌体抗体库,筛选抗c-Met特异性抗体并进行初步鉴定。方法:采集20位健康成人的骨髓淋巴细胞,用PCR扩增人Fab片断抗体基因,插入载体pComb3XSS内,构建人源天然Fab抗体库。以固相化的抗原对抗体库进行6轮筛选后,随机挑选60个克隆用Phage ELISA、BstOⅠ酶切片断分析进行检测,阳性克隆作可溶性表达和鉴定。结果:构建的Fab噬菌体抗体库的库容为1.2×109,从中筛选到1株与c-Met特异性结合的人源抗体克隆,命名为AM2-26。DNA序列分析证明为人免疫球蛋白可变区基因,Western blot证实为人源抗c-Met Fab抗体片段,ELISA特异性鉴定阳性。结论:构建了大容量人源天然Fab抗体库,从中获得1株抗c-Met人源Fab抗体片段,有望为抗肿瘤药物的研制提供新的候选分子。
- 万佳艺孙慧焦永军朱晓娟朱进刘政冯振卿
- 关键词：C-MET噬菌体抗体库FAB片段
- EHEC O157：H7志贺毒素Ⅱ型A、B亚单位的表达及功能鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的克隆、表达肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）O157：H7志贺毒素（Shigatoxin，Stx）Ⅱ型A、B亚单位，并鉴定其免疫学功能。方法从EHECO157：H7基因组中克隆编码StxⅡ型A、B亚单位的基因，经测序、酶切后，导人表达载体pGEX-4T-2，转化大肠杆菌Top10F′，经诱导、纯化得到谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）-A和GST-B融合蛋白。分别用A、B亚单位融合蛋白免疫BALB／c小鼠获得高免血清，观察A、B亚单位血清对小鼠进行毒素攻击的保护作用。结果StxⅡ型A、B亚单位的GST融合蛋白获得高效表达并纯化；A、B亚单位的高免血清可以保护小鼠对致死量毒素的攻击。结论StxⅡ型A、B亚单位蛋白可以作为EHECO157：H7疫苗的候选分子，同时针对A、B亚单位蛋白的中和单抗可以对易感人群起到紧急保护作用。
- 焦永军郭喜玲史智扬曾晓燕朱进孙慧万佳艺汪华
- 关键词：B亚单位
