孙敏
- 作品数：92 被引量：157H指数：7
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目中国国际公共关系协会项目国家质检公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 用于检测食品中鱼类过敏原的引物和探针
- 本发明属于食品中过敏原的检测技术，具体地说是用于检测食品中鱼类过敏原的引物/探针组。本发明针对鱼类主要过敏原蛋白小清蛋白，根据其基因的保守序列，设计一组特异性引物和探针。使用该引物和探针，采用实时荧光PCR技术，可快速、...
- 孙敏梁成珠高宏伟刘彩霞贾俊涛
- 文献传递
- 用于检测食品和饲料中貉成分的引物和探针
- 本发明公开了一种用于检测食品和饲料中貉成分的引物和探针，属于食品和饲料中动物源性成分的定性检测技术，本发明选取貉的线粒体细胞色素C氧化还原酶Ｉ亚单位基因序列，设计一组特异性引物和探针，使用该引物和探针，采用实时荧光PCR...
- 孙敏邓明俊吴兴海高宏伟
- 文献传递
- 梨泡状溃疡类病毒分子标准样品及其制备方法
- 本发明提供一种梨泡状溃疡类病毒分子标准样品及其制备方法，具体包括PBCVd的原料选取、标准样品的制备、均匀性和稳定性检查、定性检定、定值等过程。所述标准样品的制备方法包括：由PBCVd病毒液中提取病毒RNA、RT‑PCR...
- 张成标吴兴海王振华孙敏历艳张京宣宋涛王英超
- 文献传递
- 猴D型反转录病毒巢式PCR检测方法的建立被引量：2
- 2006年
- 目的建立SRV-1巢式PCR检测方法并进行初步应用。方法针对SRV-1env基因的保守区序列,设计特异性引物,以感染SRV-1 Raji细胞提取出的含有前病毒DNA的基因组DNA为模板,进行巢式PCR反应。扩增产物测序后与GenBank报道的序列进行同源比对。将DNA样本进行10倍梯度稀释,以检测巢式PCR反应的灵敏度。使用该方法对正常Raji细胞以及感染SIV、STLV的外周血淋巴细胞DNA样本进行扩增,检测该方法的特异性。用建立的巢式PCR方法检测40份储存猴血标本。结果使用巢式PCR扩增出的特异片段经测序分析,结果证实与GenBank报道的序列一致。所建立的巢式PCR检测法检测限度可达1.5×10-3ng/μL,而且方法特异。用此方法检测40份猴血标本,未检测到阳性标本。结论初步建立SRV-1的巢式PCR检测方法,该方法灵敏、特异,为SRV-1的检测提供了一个快速、有效的手段。
- 孙敏涂新明丛喆蒋虹佟巍于浩魏强
- 关键词：聚合酶链反应
- SHIV病毒在猴体内的复制与传代被引量：8
- 2005年
- 目的为建立SHIV艾滋病动物模型提供毒力较强的病毒株,将新合成的SHIV XJ02170病毒适应猴体,并增强其毒力。方法实验前采集猴血清并进行血清学检查和PCR检测。选出13只无SIV,STLV1,SRV D和B病毒感染的猴。第一批实验,将SHIV前病毒DNA质粒经肌肉注射到猴体内,每只500μg;SHIV病毒液,经静脉注射到猴体内,每只2ml。病毒质粒和病毒液各接种2只猴。当第一批猴体检出病毒后,10ml感染猴的全血,抗凝后静脉注射到第二批猴体内,当第二批猴检出病毒后再将10ml感染猴的全血静脉注射到第三批猴体内,连续传代4次。每批实验均定期采集血液标本,分别用肝素和EDTA抗凝,进行病毒分离;病毒基因PCR检测;CD4,CD8测定;病毒抗体检测。结果SHIV XJ02170病毒和SHIV XJ02170前病毒DNA质粒在猴体内的传代中均能分离出病毒;从传代猴的血浆和外周血单核细胞(PBMC)中检出了病毒DNA和RNA基因;CD4,CD8测定结果显示有暂时性倒置现象,后变为正常倒置与正常交替出现;在传代的猴血清中检测出特异性HIV病毒抗体。结论SHIV XJ02170病毒与SHIV XJ02170前病毒DNA质粒,均能在恒河猴体内复制。
- 涂新明丛喆蒋虹佟巍魏强杨贵波孙敏于浩秦川
- 关键词：病毒DNARNA基因连续传代批实验SIVSRV
- 食品及加工品中萝卜成分检测试剂盒的制备和检测方法
- 本发明属于食品及其加工品的植物源成分——萝卜源性成分的快速筛查与检测的技术和试剂盒，具体是使用实时荧光PCR技术检测食品中萝卜的物种特异性基因orfB的物种特异性片段。本发明针对orfB基因的保守序列，设计特异性引物和探...
- 刘彩霞高宏伟孙敏龚方徐彪梁成珠
- 文献传递
- PCR技术在猴免疫缺陷病毒(SIV)感染模型中的应用被引量：19
- 2005年
- 目的(1)建立RT PCR方法,定性测定SIV感染猴血浆中病毒RNA,比较其与传统血浆病毒分离方法的敏感性;(2)建立DNA PCR方法,检测SIV感染猴外周血淋巴细胞(PBMCs)中的前病毒DNA。(3)检验DNA PCR和RNA PCR方法在猴SAIDS模型应用中的实用性和可操作性。方法用SIVmac251静脉感染恒河猴,定期采血,从血浆中提取病毒RNA,以RNA为模板通过RT PCR法扩增,凝胶电泳定性;从感染猴PBMC中提取带有整合的SIV前病毒DNA的细胞基因组DNA,巢式PCR扩增,凝胶电泳定性。结果DNA PCR和RNA PCR经两轮扩增后均得到一长度为477bp的特异条带,测序鉴定确为目的片段。9只实验猴感染SIV后7d,RNA PCR结果为79阳性,DNA PCR结果为100%阳性,而血浆病毒分离只有59阳性;此后一直到感染后的42d,RNA PCR和DNA PCR的结果一直为100%阳性,而血浆病毒分离阳性率在感染后35d下降到49,到42d时下降为零。结论PCR方法比病毒分离方法的敏感性高。尤其是DNA PCR,既可检测具有活跃病毒复制的受感染细胞,又可检测那些携带病毒处于转录休眠期的细胞,所以在感染的早期和中后期———血浆病毒水平较低的情况下或病毒处于潜伏感染的阶段,它作为猴艾滋病(SAIDS)模型病毒学指标之一有其必要性和重要性。这个指标的检测方法应该是较血浆病毒RNA检测更为敏感。
- 丛喆涂新明蒋虹魏强佟巍孙敏于浩秦川
- 关键词：猴免疫缺陷病毒PCR技术RT-PCR方法RT-PCR法病毒DNASIV
- 沙门氏菌分离过程中铜绿假单孢多克隆抗体的应用
- 本发明涉及沙门氏菌分离过程中铜绿假单孢多克隆抗体的应用。本发明将多克隆抗体应用于沙门氏菌的检测，具体的是首先制备沙门氏菌的分离过程中的干扰菌-铜绿假单胞菌的多克隆抗体，经饱和硫酸铵法纯化后，将纯化的抗体添加到沙门氏菌分离...
- 肖西志吴振兴高宏伟邓明俊郑小龙王群孙涛朱来华岳志芹臧伟卢瑜孙敏林超徐彪梁成珠
- 文献传递
- 居泉沙雷菌多克隆抗血清、制备方法及其在检测沙门氏菌中的应用
- 本发明公开了一种居泉沙雷菌多克隆抗血清及其制备方法以及在检测沙门氏菌中的应用，包括下列步骤：（1）居泉沙雷菌免疫抗原的制备；（2）抗原接种；（3）多克隆抗血清的采集；居泉沙雷菌多克隆抗血清在检测沙门氏菌中的应用包括含有居...
- 肖西志孙敏吴振兴陈煜邓明俊林超吴信海房保海谭乐义朱来华
- 文献传递
- 鱼肉制品中鳕鱼种源的检测方法
- 本发明属于鱼肉制品中物种来源鉴定的检测技术，具体地说是用实时荧光PCR技术检测食品中鳕鱼的快速检测方法。方法包括PCR扩增反应液和上游引物CO88F：5-GGCTTTGGGAACTGACTC-3，下游引物CO88R：5-...
- 高宏伟林超孙敏刘彩霞梁成珠
