郑汉
- 作品数：9 被引量：42H指数：5
- 供职机构：中国中医科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 香樟1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因CcDXR1的克隆和表达分析被引量：6
- 2016年
- 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase,DXR)是萜类甲基赤藓醇-4-磷酸途径(methylerythritol-4-phosphate pathway,DXP/MEP)上的第二个限速酶。本研究以5种化学型的香樟(Cinnamomum camphora)作为实验材料,基于转录组数据,运用快速扩增c DNA末端技术(RACE),从香樟中克隆出DXR基因的c DNA,命名为Cc DXR1(Gen Bank登录号:KU886266)。该基因开放阅读框(ORF)长1 413 bp,编码470个氨基酸残基,生物信息学分析推测其分子质量为51.1 k D,等电点(Theoretical p I)为6.62,不含信号肽,不存在跨膜结构。结合蛋白质保守区以及进化树分析,证实该基因确为DXR家族基因。利用实时荧光定量PCR检测得出香樟中CcDXR1基因在成熟叶片表达量高于幼嫩叶片,根与叶中表达量相当,枝中最低。Cc DXR1在香樟5种化学型中的表达量不同,在龙脑樟中的表达量要高于油樟、芳樟、脑樟和异樟4种化学型。本研究首次从香樟中克隆出了Cc DXR1序列全长,并揭示了Cc DXR1在不同组织、生长时期及5种化学型中的差异表达,为香樟萜类化合物生物合成途径关键酶基因的挖掘提供研究基础。
- 郑汉荆礼姚娜杨青山彭华胜申业黄璐琦
- 关键词：香樟RACE
- 丹参茉莉酸甲基转移酶蛋白表达和纯化的研究被引量：2
- 2016年
- 茉莉酸甲基转移酶(jasmonic acid carboxyl methyltransferase,JMT)是茉莉酸生物合成途径中的关键酶,能够催化茉莉酸甲基化形成茉莉酸甲酯。本研究将丹参茉莉酸甲基转移酶基因(SmJMT1)c DNA构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE凝胶电泳结果表明该蛋白的大小约66 kDa,与预测的蛋白分子质量相同;同时对影响蛋白表达的4个因素:诱导时间、诱导温度、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度及诱导前菌液的浓度进行优化,结果表明当诱导前菌液的A600在0.8左右时,加入0.4 mmol·L^(-1)IPTG,20℃诱导培养8 h后SmJMT1蛋白的表达量较高。蛋白质印迹检测显示,anti-GST抗体可以特异性地识别SmJMT1蛋白,证实丹参SmJMT1蛋白在大肠杆菌中表达成功;Q-TOF检测数据检索分析表明,SmJMT1蛋白属于甲基转移酶亚家族。丹参中茉莉酸甲基转移酶SmJMT1的成功表达和纯化对研究茉莉酸生物合成途径及茉莉酸对药用植物次生代谢调控奠定了一定基础。
- 姚娜郑汉荆礼马利刚申业陈敏
- 关键词：丹参蛋白表达纯化蛋白质印迹Q-TOF
- 樟树4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶基因的克隆及表达分析被引量：5
- 2016年
- 4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶(4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol kinase,CMK)是植物萜类化合物生物合成途径甲基赤藓醇-4-磷酸途径(methylerythritol-4-phosphate pathway,DXP/MEP)上的第4个关键酶。该研究根据樟树转录组数据,利用RT-PCR(reverse transcription-PCR)方法从药用植物樟树Cinnamomum camphora中克隆得到4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶基因,命名为Cc CMK1(Gene Bank登录号Ku376098),对其序列进行生物信息学分析,结果表明该基因开放阅读框(ORF)为1 212 bp,编码403个氨基酸,推测其相对分子质量为44.46 k Da,等电点(theoretical p I)为4.99。跨膜结构分析表明CMK蛋白不存在跨膜结构。信号肽分析表明其为非分泌蛋白,不存在信号肽。亚细胞定位表明其定位于叶绿体中。利用荧光实时PCR检测了龙脑樟、油樟、芳樟、脑樟和异樟5种化学型樟树中Cc CMK1基因的表达量,结果表明Cc CMK1基因在油樟中的表达量最高,龙脑樟中表达量最低,为樟树萜类化合物生物合成途径关键酶基因元件挖掘提供研究基础。
- 荆礼郑汉姚娜陈美兰申业黄璐琦
- 关键词：基因克隆生物信息学分析
- 丹参小分子热激蛋白SmHSP21.8基因克隆、诱导模式和原核表达被引量：1
- 2022年
- 为揭示小分子热激蛋白在丹参抵御逆境胁迫和有效成分积累的分子机制,根据橙根丹参转录组测序结果并结合RT-PCR技术在丹参中克隆获得一个小分子热激蛋白基因,其开放阅读框长度为585 bp,编码194个氨基酸,根据该基因编码的蛋白分子质量命名为SmHSP21.8。根据氨基酸多重序列比对和系统进化树分析,SmHSP21.8属于小分子热激蛋白的内质网亚族,并含有内质网小分子热激蛋白N端保守基序DPFR-I/V-LE-H/Q-x-P。构建原核表达载体pMAL-c2X-SmHSP21.8,并转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,经诱导,成功表达出目的蛋白。时空表达分析表明,该基因在花中表达量最高,有显著的组织特异性。经38℃、PEG6000、脱落酸(abscisic acid,ABA)和吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid,IAA)的诱导,该基因的相对表达量均有提高,表明SmHSP21.8参与了丹参幼苗对非生物胁迫高温、干旱,以及外源激素ABA和IAA响应的过程,为进一步研究小分子热激蛋白参与丹参响应逆境的分子机制奠定了基础。
- 王世威屈仁军彭佳铭王新新时晨晶郑汉申业黄璐琦
- 关键词：丹参小分子热激蛋白基因克隆原核表达胁迫处理
- 一种标本定型干燥装置
- 本实用新型一种标本定型干燥装置，解决现有标本烘干装置布局松散，占地面积大，组装较复杂，安装调试繁琐等不便于标本制作的问题。本实用新型采用可移动一体化设计，将送风系统、加热系统、控温系统、标本夹支架等集成在一个箱体内，结构...
- 李传润杨青山郑汉彭代银刘鹤龄桂双英向龙孙晓妹戴逸飞董晓曼张磊
- 文献传递
- 茉莉酸信号通路中的转录因子对药用植物次生代谢调控的研究进展被引量：12
- 2018年
- 莱莉酸类物质作为植物体内源激素，能够诱导萜类、生物碱和黄酮类等多种药用活性成分在植物体内的生物合成，在植物次生代谢过程中发挥着非常重要作用。茉莉酸信号通路中的转录因子能通过与靶基因启动子中的顺式作用元件相互作用，激活或抑制植物次生代谢生物合成途径中多个关键酶基因的表达，有效地启动或关闭次生代谢生物合成途径，调控特定次生代谢产物的生物合成过程，从而影响次生代谢产物的积累。该文主要综述了莱莉酸信号通路中的转录因子（包括AP2／ERFs，bHLH，MYB，WRKY）在植物次生代谢中的调控作用等方面的研究进展，并探讨了转录因子在提高药用活性成分方面的潜在应用价值，为解析茉莉酸信号通路调控植物内的次生代谢过程提供参考和依据。
- 姚娜荆礼郑汉陈敏陈敏
- 关键词：茉莉酸转录因子次生代谢
- 香樟甲羟戊酸-5-磷酸激酶基因CcPMK的克隆和表达分析被引量：11
- 2020年
- 甲羟戊酸-5-磷酸激酶(5-phosphomevalonate kinase,PMK)是甲羟戊酸(mevalonate,MVA)途径中的关键限速酶,其在ATP和二价金属离子的存在下能够可逆地催化甲羟戊酸-5-磷酸(mevalerate 5-phosphoric acid,MVAP)磷酸化从而形成甲羟戊酸-5-焦磷酸(mevalonate-5-pyrophosphate,MVAPP)。该文以香樟Cinnamomum camphora作为研究材料,基于前期的转录组数据,从cDNA中克隆出PMK基因,命名为CcPMK(GenBank登录号MN163057)。该基因开放阅读框(ORF)为1545 bp,编码514个氨基酸,生物信息学分析推测其相对分子质量为56.14 kDa,等电点(theoretical pI)为7.64,不含信号肽,不存在跨膜结构。通过多序列比对及系统进化树分析,发现CcPMK与其他植物的PMK氨基酸序列相似性高达75%,其包含45%的α-螺旋和16%的β折叠,CcPMK具有3个PMK蛋白质家族的特征motif和1个ATP结合位点Gly-Leu-Gly-Ser-Ser-Ala-Ala,并且它的3级模型中含有1个催化反应的口袋状结构,证实其为PMK家族基因。系统进化树结果显示其与海枣等单子叶植物具有较近的亲缘关系。利用实时荧光定量PCR检测得出CcPMK在香樟5种化学型中的表达量不同,在龙脑樟中的表达量显著高于油樟、芳樟、脑樟和异樟,并且CcPMK基因在根中表达量最高,枝中最低。该研究首次从香樟中克隆出了CcPMK cDNA全长,并揭示了CcPMK在5种化学型及不同组织中的差异表达,为香樟萜类化合物生物合成途径关键酶基因的挖掘提供研究基础。
- 郑汉郑汉濮春娟陈美兰陈美兰申业申业
- 关键词：香樟生物信息学
- 香樟3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(CcHMGRs)基因家族的克隆及表达分析被引量：9
- 2020年
- 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase, HMGR)是萜类甲羟戊酸途径(mevalonic acid pathway, MVA)上的第一个限速酶,是细胞质中萜类代谢途径中的重要调控位点。本研究以5种化学型的香樟(Cinnamomum camphora)作为实验材料,基于转录组数据,从香樟cDNA中克隆出2个HMGR基因,分别命名为CcHMGR1 (GenBank登录号:MN163055)和CcHMGR2 (GenBank登录号:MN163056)。基因包含开放阅读框(ORF)分别为1 689 bp和1 683 bp,编码562和560个氨基酸残基,生物信息学分析推测其分子质量为59.819 kDa和59.397 kDa,等电点(theoretical pI)为8.20和8.61,均不含信号肽,存在2个跨膜结构。结合蛋白质保守区以及进化树分析,证实该基因确为HMGR家族基因。利用实时荧光定量PCR检测, CcHMGR1和CcHMGR2在香樟5种化学型中的表达模式类似,均在油樟中的表达量要高于另外4种化学型;并且2个CcHMGRs基因均在根中表达量最高,枝中最低。本研究首次从香樟中克隆出了CcHMGRs cDNA全长,并揭示了CcHMGRs在5种化学型及不同组织中的差异表达,为香樟萜类化合物生物合成途径关键酶基因的挖掘提供研究基础。
- 郑汉郑汉濮春娟陈美兰陈美兰申业申业
- 关键词：香樟生物信息学
- 一种标本定型干燥装置及制备方法
- 本发明一种标本定型干燥装置，解决现有标本烘干装置布局松散，占地面积大，组装较复杂，安装调试繁琐等不便于标本制作的问题。本发明采用可移动一体化设计，将送风系统、加热系统、控温系统、标本夹支架等集成在一个箱体内，结构合理，设...
- 郑汉杨青山李传润彭代银刘鹤龄桂双英向龙孙晓妹戴逸飞董晓曼张磊
- 文献传递
