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一种特异性结合CD4的全人源抗体及应用: 本发明提供了一种全人源抗CD4抗体，其重链可变区具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO：4所述的氨基酸序列，本抗体分子与辅助T细胞膜上的表面抗原分化簇4(CD4抗原)特异性地结合，其...; 何明跃王明蓉高强杜天飞张勇侠代云见何勇智丛聪; 文献传递

一种新的大肠埃希菌蛋白质快速合成方法: 2019年; 目的在大肠埃希菌中建立同时进行PCR克隆和重组蛋白快速表达的方法。方法通过TA载体将包含目的基因和全部蛋白表达元件的蛋白表达单位引入大肠埃希菌后,无需使用任何限制性酶,直接在大肠埃希菌中表达编码的蛋白质。结果通过小规模或大规模表达多种不同蛋白质,证实了该方法的有效性和可靠性。使用该方法获得的绿色荧光蛋白和血管内皮生长因子特异性VH的可溶性蛋白表达量分别达到30和20 mg/L。结论该法设计灵活,且易于进行多种蛋白质的平行表达,为快速筛选理想的蛋白突变体提供了新途径。; 何勇智余馨丛聪代云见王明蓉何明跃; 关键词：大肠埃希菌聚合酶链反应

一种特异性结合CD15的全人源抗体及应用: 本发明提供了一种全人源抗CD15抗体，其重链可变区具有SEQID NO：2所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO：4所述的氨基酸序列，本抗体分子与细胞粘附分子(CD15抗原)特异性地结合，其亲和力大于10<S...; 何明跃王明蓉高强杜天飞张勇侠代云见何勇智丛聪; 文献传递

全人源抗体基因库的构建及抗表皮生长因子受体单链抗体的筛选: 2016年; 目的从肿瘤患者外周血中构建全人源单链可变区抗体基因库，并采用真核核糖体展示技术高效筛选全人源抗表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）单链抗体。方法采用PCR技术从52例晚期肿瘤患者外周血中构建大容量的全人源抗体基因库。针对EGFR抗原靶标，应用真核核糖体展示技术对该基因库进行高效富集筛选。通过大肠埃希菌表达体系对回收的基因库进行克隆、表达，并鉴定抗体活性。结果构建的全人源抗体基因库库容估算为4．3×1013。分子。对该基因库进行3轮富集筛选后，获得EGFR富集的单链抗体基因库。对回收基因库进行克隆、表达，并随机鉴定了49个克隆，获得结合力为10-8～10-7mol／L的2株全人源抗EGFR单链抗体。结论利用肿瘤患者外周血，结合核糖体展示技术可以较快获得具有医用价值的全人源单链抗体。; 余馨何勇智丛聪李坤代云见张勇侠何静王明蓉何明跃; 关键词：基因文库单链抗体核糖体展示技术外周血

功能性包涵体的研究进展被引量：6: 2013年; 利用原核系统表达外源重组蛋白的一个特点是表达蛋白多以包涵体形式存在。在过去人们一直认为包涵体是错误折叠、无生物活性的蛋白,需要经过变复性的过程重新获得有生物活性、可溶的蛋白,因而变复性条件的摸索迄今仍然是该领域的难点。但近几年的研究表明包涵体并非都是无生物活性的,功能性包涵体(或者称为非传统意义包涵体)概念的提出是该领域的一个重大研究进展。由于功能性包涵体本身具有生物活性,可在非变性条件下提取,目前已经在生命科学的基础研究、生物制药、生物材料、生物催化等领域展现出良好的应用前景。重点从功能性包涵体的定义、形成机理、提取条件等近期研究进展进行综述,以期为原核细胞表达和工业生产重组蛋白药物提供新的思路。; 罗莉何勇智张勇侠王明蓉; 关键词：生物活性

VEGF抗体及其制备方法和用途: 本发明公开了VEGF单域抗体及其融合抗体和多聚体抗体。本发明还公开了编码前述抗体的核苷酸序列，包含该核苷酸序列的表达载体、重组菌以及前述抗体的制备方法和用途。本发明VEGF抗体分子量小，可塑性高，具有广泛的应用前景。; 何勇智丛聪代云见张勇侠李坤李春阳王保成秦娇荣赵兆王明蓉何明跃; 文献传递

抗体药物的设计及其研究进展: 2016年; 先进的展示技术为重组抗体的筛选和改造提供了有效而灵活的方法.通过展示技术可以获得更适用于诊断和治疗的优化分子,而后者不能直接通过动物免疫接种的方式获得.展示技术可通过自动化或与新一代测序技术和阵列技术联合应用得到进一步提高,形成高通量筛选技术平台,用于筛选多种对应大量基因组编码靶标的抗体.从头设计抗体已开始成为制造新抗体的一种策略,但仍具有技术挑战性.然而,抗体-抗原结构数据库的不断增加和计算工具的不断开发,都表明这些挑战是可以克服的.预计未来以物理分子模拟知识为基础的计算方法,将成为提高抗体设计准确性和成功性的主要驱动力.; 王明蓉史晋海何勇智代云见余馨丛聪何明跃; 关键词：药物设计抗体单链抗体互补决定区抗体亲和力

应用核糖体展示技术高效筛选人源抗IgE单链抗体被引量：4: 2012年; 本研究从哮喘患者外周血分离淋巴细胞、提取总mRNA,采用RT-PCR技术分别构建重链可变区VH(variable region of heavy chain)和轻链可变区VL(variable region of light chain)cDNA库,然后通过连接肽(Gly4Ser)3和特定引物将VH和VL cDNA基因组装成人源单链抗体(scFv)核糖体展示模板基因库。应用兔网织红细胞核糖体展示技术,单引物原位反转录技术,经3轮展示富集并回收针对人源IgE蛋白(免疫球蛋白E)的目的单链抗体基因;回收的抗体基因经双酶切后与pET22b(+)载体连接,转化至E.coli Rosseta(DE3)宿主细胞,应用菌落PCR结合Dot blotting技术快速鉴定阳性克隆,抗原ELISA法进一步鉴定阳性克隆。VH和VL基因库得到正确的构建,长度分别为400和710 bp,库容为1013。核糖体展示模板构建正确,长度为1 100 bp。该基因库经过3轮针对IgE蛋白的核糖体展示,目的基因得到了有效富集和回收。经过高效克隆、表达和鉴定,确定1株针对人IgE蛋白显示最强亲和力的阳性克隆菌pET-IgE-6。经测序和序列分析证实该单链抗体为人源抗体,序列未见国内外报道。结果表明,采用患者外周血构建人源抗体基因库,结合核糖体展示技术,可以成功获得高亲和力的人源单链抗体分子。该技术路线为快速获得具有药用价值的人源抗体提供了参考。; 张勇侠王保成余馨代云见何勇智丛聪夏永王明蓉; 关键词：免疫球蛋白E 人源抗体核糖体展示技术过敏性疾病

多糖样品中微量蛋白含量检测方法的验证: 2018年; 目的验证多糖样品中微量蛋白的Micro-BCA检测方法。方法根据分析方法质量源于设计(the quality of analytical method is derived from design,AQb D)的开发流程,选择Micro-BCA法进行多糖微量蛋白含量的检测,并对方法的专属性、精密性及准确度进行验证,确定方法的检测限(detection limit,DL)及定量限(quantitative limit,QL)。结果多糖样品不影响该方法的检测,选择无机盐类纯化缓冲液,通过使标准品与样品的基质均一化,可消除基质效应,得到准确的检测效果。BSA浓度在10~40μg/mL范围内线性良好,线性相关系数(R^2)> 0. 99;试验内及试验间检测结果的相对标准偏差(RSD)均<3%;试验内及试验间回收率均在(100±5)%之间;重复3次检测DL均值为0. 4μg/mL,QL均值为1. 1μg/mL。结论多糖样品微量蛋白Micro-BCA检测方法的检测通量高,与工艺缓冲液兼容性好,且具有良好的精密性及准确度。; 何勇智张涛; 关键词：多糖微量蛋白

Anti-IgE单链抗体纯化工艺研究及活性鉴定被引量：1: 2015年; 目的:建立anti-IgE单链抗体纯化工艺并对其活性进行鉴定。方法:根据protein L亲和层析填料和Ni亲和层析填料的特点分析,经初筛后选用protein L填料作为第一步初纯化填料,Ni亲和层析填料作为第二步精细纯化填料。通过对这两种纯化方式的上样条件和洗脱条件进行研究,建立了anti-IgE单链抗体的纯化工艺。结果:protein L亲和层析的初纯化工艺:最佳杂质洗涤pH=3.5,最佳目标蛋白洗脱pH=2.0,并且pH=2.0洗脱的目标蛋白收集在第二步Ni亲和层析的上样缓冲液中,可直接进行第二步Ni亲和层析纯化。所建立的Ni亲和层析精细纯化工艺:最佳杂质洗涤为50mmol/L咪唑,最佳目标蛋白洗脱为500mmol/L咪唑。经两步亲和纯化,目标产物在SDS-PAGE上纯度为99.0%,CE-SDS上纯度为99.5%,两步总收率为80.0%。纯化后的蛋白经竞争ELISA和Biacore检测,证实该产品特异性识别IgE靶标,与IgE靶标的亲和力达到8.59e^(-9)M,并且竞争Biacore结果显示该抗体对IgE有良好的中和活性,其抑制IgE的EC50值为70n M。结论:建立了一种高效、简洁的大肠杆菌表达的anti-IgE单链抗体纯化工艺,为其进一步规模放大工艺的建立奠定了基础。同时证明了该新型小分子anti-IgE抗体对靶标具有良好的特异性、亲和力以及中和活性,并展示出其在医用中的应用价值。所建立的小分子抗体纯化工艺技术对其他小分子单链抗体的纯化具有参考价值。; 代云见张勇侠何勇智丛聪张涛王明蓉; 关键词：哮喘

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何勇智

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