卢晓燕
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 水痘-带状疱疹病毒糖蛋白I基因在昆虫细胞中的表达及纯化
- 2003年
- 目的 将北京水痘 带状疱疹病毒 (VZV) 84 7株克隆糖蛋白I(gpI)基因在杆状病毒 昆虫细胞表达系统中表达 ,并对其表达产物进行纯化。方法 采用PCR方法从VZVDNA中扩增gpI全基因序列 ,并将其插入杆状病毒转移质粒 pBacPAK9中 ,获得重组转移质粒pBacVZVgpI ,对pBacVZVgpI中的插入基因进行测序。重组转移质粒与线性杆状病毒BacPAK6DNA (Bsu36Idigested)共转染Sf9昆虫细胞 ,获得重组病毒BacPAK gpI。通过亲和层析纯化重组蛋白 ,并检测其抗原性。结果 PCR扩增得到 gpI基因 ,测序结果表明克隆的外源基因正确。经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)、免疫印迹 (western blot)方法证明gpI基因在昆虫细胞中获得表达 ,表达产物在培养 72h达到高峰 ,重组蛋白的相对分子质量约为 5 80 0 0和 70 0 0 0 ,与理论值相符 ,蛋白质加工与天然蛋白类似。动物实验结果表明 ,重组蛋白具有较好的免疫原性 ,可刺激小鼠产生中和抗体。SDS PAGE检测纯化的重组蛋白 ,纯度达 80 %。纯化蛋白经western blot和ELISA检测后显示 ,具有特异的抗体结合活性。结论 应用昆虫细胞表达水痘 带状疱疹病毒 gpI基因 ,可为水痘 带状疱疹病毒抗原定量分析、糖蛋白ELISA的研制和制备亚单位疫苗提供基础。
- 郭立征卢晓燕项金忠章以浩郭存三张鹏飞
- 关键词：水痘-带状疱疹病毒昆虫细胞基因表达纯化
