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嗜水气单胞菌胁迫对黄鳝肝脏等四种组织器官抗菌活性的影响被引量：1: 2016年; 为研究黄鳝机体对细菌的免疫应答规律及其抗病机理,用不同浓度的嗜水气单胞菌感染健康黄鳝,采用抑菌圈法,检测不同处理时间黄鳝肝脏、肾脏、肠和皮肤等4种组织器官中抗菌肽粗提物对嗜水气单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抗菌活性。结果显示:胁迫后,黄鳝4种组织器官的乙酸提取物对嗜水气单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等3种菌均具不同程度的抗菌活性,但对枯草芽孢杆菌均无明显抑制作用。各组织器官的抗菌活性规律大体表现为:对金黄色葡萄球菌的抑制作用>对大肠杆菌的抑制作用>对嗜水气单胞菌的抑制作用。对嗜水气单胞菌的抑制作用表现为:随着感染时间的延长,肾脏提取物的抗菌活性有所增强,皮肤提取物的抗菌活性有所减弱。对大肠杆菌的抑制作用表现为:皮肤提取物最强,肠提取物最弱,随着感染时间的延长,皮肤的抗菌活性变弱。对金黄色葡萄球菌的抑制作用表现为:肾脏和肝脏提取物较强,肠和皮肤提取物较弱。; 王霞方晨韦明武张小雪; 关键词：黄鳝嗜水气单胞菌抗菌活性

麦穗鱼囊胚细胞的分离与冷冻保存: 2015年; 为了探讨麦穗鱼囊胚细胞的分离方法及其较佳的冷冻保存条件,采用胰蛋白酶酶解法和低温冷冻保存技术对麦穗鱼囊胚细胞的分离和保存进行研究。结果显示,20℃微流水条件下,受精后120 min左右麦穗鱼胚胎发育达到囊胚期;25℃条件下,0.25%胰蛋白酶作用12~18 min,麦穗鱼囊胚细胞即可脱去胚胎膜,且所获的囊胚细胞存活率可达90%以上;10%DMSO＋DMEM作为冷冻储存保护液,储存于-80℃超低温冰箱中8 d,囊胚细胞存活率保持在50%以上;储存于-196℃,8 d后囊胚细胞存活力可达70%以上,储存128 d后,细胞存活率仍可保持60%以上。表明25℃、0.25%胰蛋白酶作用是较好的麦穗鱼囊胚细胞卵膜去膜条件,10%DMSO＋DMEM保护液、细管和液氮（-196℃）保存囊胚细胞128 d可保持其有60%以上的存活率。; 方晨王霞王伟龚良超刘学罗昌妃张小雪; 关键词：麦穗鱼囊胚细胞冷冻保存

亮甲酚蓝染色法评价斑马鱼卵母细胞体外成熟度的实验研究: 2016年; 通过不同浓度亮甲酚蓝(BCB)对斑马鱼卵母细胞进行染色,探讨该方法用于判断鱼类卵母细胞成熟度的可行性,并利用该法对孕酮促斑马鱼卵母细胞体外成熟实验中的卵母细胞成熟情况进行了判断和分析。结果表明:(1)BCB染色法用于判断鱼类卵母细胞成熟度是可行的。(2)低浓度(1 nmol/L和10 nmol/L)孕酮处理6 h,对斑马鱼卵母细胞的成熟并无明显促进作用,高浓度的孕酮(100 nmol/L和1000 nmol/L)不利于卵母细胞的成熟。(3)浓度为100 nmol/L的孕酮处理12 h,对卵母细胞成熟的促进作用显著。; 方晨张钊韦祥相李贤梅张小雪; 关键词：斑马鱼卵母细胞孕酮

玻璃化冻存对斑马鱼卵母细胞的影响被引量：1: 2017年; 采用比色法测定了在不同玻璃化冻存液中冻存1、2、4、8d时斑马鱼卵母细胞中谷胱甘肽含量和三磷酸腺苷酶的活性,以研究玻璃化冻存对卵母细胞谷胱甘肽含量和线粒体三磷酸腺苷酶活性的影响。试验结果显示,V4组斑马鱼(玻璃化液组分是:1.5mol/L甲醇、6.0mol/L乙二醇、0.25mol/L蔗糖)卵母细胞冻存1、2、4、8d后存活率最高[分别为(48.89±2.58)%、(39.35±1.34)%、(24.18±2.32)%和(14.56±1.64)%],显著高于其他组。经玻璃化冻存后,斑马鱼卵母细胞谷胱甘肽含量和线粒体三磷酸腺苷酶活性均随冻存天数的增加而显著下降(P<0.05)。V4组的谷胱甘肽含量[(13.37±0.59)mg/g]和线粒体三磷酸腺苷酶活性较高,线粒体Ca^(2+)-三磷酸腺苷酶[(3.823±0.144)U/mg]、Mg^(2+)-三磷酸腺苷酶[(4.503±0.144)U/mg]和Na^+/K^+-三磷酸腺苷酶[(7.520±0.198)U/mg]活性最高。各组细胞的活性随着冻存天数的增加而逐渐下降。试验结果表明,玻璃化冻存不能完全避免低温和冷冻保护剂的毒性和对卵母细胞的损伤。; 方晨韦祥相张钊李贤梅张小雪; 关键词：斑马鱼卵母细胞玻璃化冻存谷胱甘肽

嗜水气单胞菌对黄鳝内脏器官酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性的影响被引量：2: 2015年; 近年来,随着黄鳝养殖规模的扩大,疾病也随之增多,其中出血病是黄鳝养殖业中最常见、危害最严重的疾病之一。该病具有传染性强、发病快、死亡率高的特点。嗜水气单胞菌普遍存在于淡水和土壤中,是黄鳝出血病发病的主要病原菌。碱性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）是鱼类重要的体液免疫因子,是溶酶体标志性酶,可以间接地反映体内组织损伤情况,是评价动物体非特异性免疫作用的主要指标。; 方晨王霞张小雪; 关键词：嗜水气单胞菌酸性磷酸酶碱性磷酸酶活性免疫因子溶酶体酶生物因子

人工感染嗜水气单胞菌对黄鳝血细胞的影响被引量：1: 2015年; 用不同浓度嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染健康黄鳝(Monopterus albus),采用血细胞计数、血涂片及显微测量等方法分别测定感染24 h、48 h、72 h后各组黄鳝血细胞数量,红细胞长、短径。结果表明:随着处理组菌浓度增加,感染24 h的黄鳝红细胞浓度逐渐减小,感染48h和72h的呈先增大后减小的变化趋势,但各处理组差异不显著;感染后白细胞中主要是嗜中性粒细胞、单核细胞核淋巴细胞在血细胞中所占百分比显著升高。; 王霞方晨黄学波张小雪; 关键词：黄鳝嗜水气单胞菌血细胞

嗜水气单胞菌感染对黄鳝hepcidin抗菌肽基因表达的影响被引量：6: 2015年; 为了研究嗜水气单胞菌对黄鳝hepcidin抗菌肽基因表达的影响,用不同密度嗜水气单胞菌感染健康黄鳝后,采用荧光定量PCR方法分别检测染菌黄鳝肾脏hepcidin抗菌肽基因在感染后24h、48h、72h的表达量。试验结果表明,hepcidin基因在健康黄鳝中就有表达,腹腔注射嗜水气单胞菌后,该基因的表达量明显升高。随着处理时间的延长,处理菌密度较低组(0.5×108 cfu/mL)和较高组(2×108 cfu/mL和4×108 cfu/mL)黄鳝抗菌肽hepcidin基因的表达量都逐渐降低,只有菌密度为1×108cfu/mL时该基因的表达量是随着处理时间的延长而逐渐升高,但升高的幅度逐渐减小。密度为1×108 cfu/mL的嗜水气单胞菌能诱导黄鳝hepcidin抗菌肽基因表达量逐渐增加。; 王霞方晨韦明武张小雪; 关键词：黄鳝嗜水气单胞菌

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方晨