柯丽华
- 作品数：27 被引量：169H指数：9
- 供职机构：中国科学院武汉病毒研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国科学院知识创新工程更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- α—^(32)P HBV DNA探针的制备及其在血清检测中的应用被引量：2
- 1989年
- 采用缺口转移(Nick-translation)方法标记克隆化的乙型肝炎病毒(HBV)DNA制备探针,能特异地与HBV DNA杂交,在本实验条件下,其最低检测量为0.2pg,同位素参入率为23.5—67.0％,使用100μCi ^(32)P dCTP,比放射活性为10~8cpm//μg DNA左右。临床血清检测统计分析表明:HBV DNA与HBsAg、HBeAg、HBcAg、DNAP的阳性符合率分别为53.3％、69.7％、78.6％、81.7％,其灵敏性和特异性均比免疫学检测法高。
- 丁清泉陈少俊柯丽华
- 关键词：乙肝病毒DNA探针血清检测
- 三株草鱼出血病病毒免疫原性的比较被引量：4
- 1991年
- 从湖南邵阳、湖北仙桃、武汉南湖地区分离到的三株草鱼出血病病毒(GCHV873、GCHV875、GCHV876),分别对家兔进行免疫,并测定了它们在家兔体内形成抗体的水平以及这些抗体对相应抗原的中和能力。实验结果显示:GCHV873产生抗体滴度比GCHV875高一倍,较GCHV876高8倍;其抗体的中和效价分别是1:1778(10^(-3.25))、1:386(10^-(2.59))和1:181(10^-(2.25))。上述结果表明:GCHV873的免疫原性是三个分离株中最强的一个毒株。
- 柯丽华余兰芬方勤丁清泉蔡宜权
- 关键词：免疫原性
- 草鱼出血病病毒的血清学鉴定被引量：2
- 1991年
- 草鱼出血病病毒(GcHV)具有弱的凝集人“O”型红血球的能力。其抗体与呼肠孤病毒、轮状病毒不发生免疫反应,说明此病毒与上述病毒无共同的抗原关系。
- 柯丽华方勤余兰芬丁清泉蔡宜权
- 关键词：草鱼出血病病毒免疫反应血凝试验
- 草鱼出血病病毒多肽及其基因组的体外翻译被引量：11
- 1992年
- 纯化的草鱼出血病病毒经SDS-PAGE分析,有11条多肽,即Vp1～Vp11,分子量为27×10~8～130×10~3。完整病毒颗粒与缺失核酸的病毒空壳均由相同的多肽组成。其中Vp1、Vp2、Vp7、Vp10和Vp11是主要的5个多肽,Vp1、Vp2、Vp3、Vp4、Vp5和Vp10属病毒核心成分。用90％DMSO变性的病毒基因组在兔网织红细胞裂解物翻译系统中进行体外翻译,其翻译产物经SDS-PAGE和放射自显影检查,在X感光片上有11条与病毒多肽一致的片段。此结果为呼肠孤病毒核酸具有mRNA性质增加了又一个证据。人工释放的病毒核酸,其双链RNA的一端与核心相连,构成类似反应核心的形态。核心上的12个钉状物可能是病毒基因组溢出的通道。
- 柯丽华王炜方勤蔡宜权
- 关键词：草鱼出血病病毒多肽
- 从随机噬菌体肽库中筛选抗草鱼出血病病毒多肽的研究被引量：16
- 1998年
- 从随机噬菌体九肽表位库中筛选出抑制草鱼出血病病毒（ＧｒａｓＣａｒｐＨｅｍｏｒｈａｇｅＶｉｒｕｓ，ＧＣＨＶ８７３）感染的多肽分子。采用完整、生物素化的草鱼出血病病毒颗粒作为受体，与以融合蛋白形式在丝状噬菌体ｆＵＳＥ５的外壳蛋白Ⅲ的Ｎ端表达的随机九肽库作用。经三轮体外亲和筛选（Ｂｉｏｐａｎｎｉｎｇ）及ＥＬＩＳＡ法检测后，从肽库中筛选出１６个与病毒高亲和力结合的噬菌体克隆，其中六个阳性克隆能有效地抑制病毒在ＣＩＫ细胞中的复制，并使病毒的半数组织培养感染剂量（ＴＣＩＤ５０）下降五个数量级。表明噬菌体肽库技术完全能够应用于抗病毒研究，为研制抗病毒短肽制剂打基础。
- 王冰柯丽华江红田波李传昭
- 抗草鱼出血病病毒多肽的结构分析被引量：3
- 1998年
- 将草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ８７３）颗粒与随机噬菌体九肽库在体外作用，三轮筛选后，从３００个转化的单菌落中获得１６个与病毒高亲和力的噬菌体克隆。接着经过抗病毒试验获得６个能强烈抑制病毒复制的阳性噬菌体克隆，能使病毒ＴＣＩＤ５０下降５个数量级。通过对阳性噬菌体克隆随机插入区域的核苷酸序列分析，推导出多肽的氨基酸序列。发现６个能强烈抑制病毒复制的阳性克隆中多肽的氨基酸序列完全一致（ＮＨ２ＬｅｕＴｒｐＶａｌＧｌｙＧｌｙＧｌｙＡｒｇＡｓｎＡｌａ），该结果提示多肽的抗病毒能力与多肽特异性氨基酸组成及结构有关。因此，抑制ＧＣＨＶ８７３复制特异性多肽的氨基酸序列的确定及结构分析，不仅为人工合成抗草鱼出血病病毒的多肽奠定了基础，同时也为抗病毒多肽制剂的研制提供了依据。
- 王冰柯丽华田波
- 关键词：草鱼出血病病毒
- 一株新的草鱼出血病病毒分离物的特性被引量：77
- 1990年
- 从湖南邵阳地区患出血病的草鱼组织中分离到一株病毒,经部分提纯、负染后,电镜观察,揭示为双层衣壳、直径约71nm的球形颗粒。其核酸在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈现11条带。经核酸酶消化、吖啶橙染色及核酸的变性试验,证明为双链RNA。病毒在草鱼肾细胞株(CIK)单层细胞上,形成直径约2mm的空斑;对温度有一定稳定性;对乙醚、氯仿不敏感;经pH3、10处理后仍能保持相对稳定的滴价。此病毒不属业已建立的呼肠孤病毒科6个属中的任何一个属,而可能为呼肠孤病毒科中一新成员。
- 柯丽华方勤蔡宜权
- 关键词：草鱼出血病病毒基因组
- 草鱼出血病病毒对其它鱼的感染性研究被引量：9
- 1991年
- 用草鱼出血病病鱼分离出的草鱼出血病病毒(Grass carp hemorrhage virus,GCHV)感染其它常见鱼并用ELISA方法检查感染鱼组织提取液,结果表明:青鱼、鲢鱼、布氏鳌条对GCHV抗体呈阳性反应;鲤鱼、鳙鱼、鲫鱼、团头鲂、泥鳅则呈阴性反应。综合感染鱼发病症状及死亡特征,初步认为:青鱼对GCHV是易感的,GCHV能在鲢鱼、布氏蟹条体内增值,但毒力较低,鳙鱼、鲫鱼、团头鲂、鲤鱼、泥鳅能抗GCHV感染。
- 丁清泉余兰芬柯丽华蔡宜权
- 关键词：草鱼出血病草鱼出血病病毒ELISA检测感染性
- 酶标HBV DNA探针的研制与应用被引量：5
- 1991年
- 本实验采用一种非放射性物质——碱性磷酸酶标记乙肝病毒HBV DNA制备分子探针。碱性磷酸酶在苯醌作用下与单链DNA联结,形成DNA和酶的共价复合物,即酶标探针。此探针通过分子杂交与待测DNA结合,与酶的底物作用显色,几小时内可观察结果,其最低检测量约为10pg。用此探针检测乙肝病人血清中的HBV DNA,与^(32)P标记的探针比较,酶标探针可检测出^(32)P标记探针检出率的95.7％。结果表明,所合成的酶标探针具有准确、简便、快速、安全而经济的优点,具有应用前景。
- 涂知明柯丽华
- 关键词：乙型肝炎病毒HBVDNA
- 草鱼出血病病毒抗原亚单位的研制被引量：2
- 1997年
- 通过比较溶液的离子浓度对病毒形态结构的影响，发现GCHV在低盐溶液低温（-20℃）保存条件下，外壳蛋白会自动降解，但不十分完全。采用含1％NP40（Nonidetp40）的稀盐溶液处理感染病毒的细胞，经冻融及差异离心，电镜下观察到纯度较高的病毒双层衣壳、核心衣壳及散在的子粒。纯化的病毒亚单位用核酸酶消化后，与等量的福氏佐剂混合，免疫家兔制备抗体。该抗血清经中和试验测定，显示了较强的中和病毒的能力。纯化的病毒亚单位在7％聚丙烯酰胺凝胶电泳条件下，未见病毒电泳条带。同时采用地高辛标记的GCHVcDNA克隆探针，与病毒RNA及亚单位样品进行斑点杂交，检测病毒RNA灵敏度达到10pg．病毒亚单位样品均为阴性结果。该亚单位制剂具有纯度高、体积小的特点，将是一种安全性能好、使用方法简便、又便于保存和运输的亚单位疫苗。
- 方勤江红柯丽华
- 关键词：草鱼出血病病毒病毒疫苗
