王丹
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
- 供职机构：南方医科大学公共卫生与热带医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- pNTAP-PRAK真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
- 2010年
- 目的:构建pNTAP-PRAK真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系。方法:将人的PRAK亚克隆至串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-PRAK,转化该重组质粒至感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用PolyFect脂质体介导将其转染至HEK293细胞中,再通过G418筛选建立稳定表达TAP tag-PRAK融合蛋白的HEK293细胞系;利用Western blotting和细胞免疫荧光标记法检测融合蛋白TAP tag-PRAK的表达及细胞内定位情况。结果:重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在HEK293细胞中稳定表达,表达产物TAP tag-PRAK主要分布在核内。结论:成功构建pNTAP-PRAK真核表达载体并建立了其稳定表达的HEK293细胞系,TAP标签未对PRAK定位产生明显影响。
- 王达安龚小卫刘爱华梅柱中王丹明小燕王旭魏洁邓鹏姜勇
- 关键词：基因表达
- pNTAP-MK2真核表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立
- 2010年
- 目的构建pNTAP-MK2真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系。方法将MK2亚克隆至串联亲和纯化载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-MK2,转化该重组质粒至感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用脂质体PolyFect介导将其转染至HEK293细胞中,再通过G418筛选建立稳定表达TAPtag-MK2融合蛋白的HEK293细胞系;利用Western blotting和细胞免疫荧光标记法检测融合蛋白TAPtag-MK2的表达及细胞内定位情况。结果重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在HEK293细胞中稳定表达,表达产物TAPtag-MK2主要分布在核内。结论成功构建pNTAP-MK2真核表达载体并建立了其稳定表达的HEK293细胞系,TAP标签未对MK2定位产生明显影响。
- 王达安龚小卫刘爱华梅柱中王丹明小燕王旭魏洁邓鹏姜勇
- 关键词：真核表达载体分子克隆
- 在前牙修复中如何选择复合体材料及简化操作技术
- 2011年
- 复合体是牙齿修复工作中最常使用的材料，常被用于预防性窝沟封闭、微创修复、堆塑、后牙区直接和间接的复杂修复等。复合树脂在前牙区的常规应用获得了很好的效果，使临床医师能运用直接技术完成复杂的修复．达到显著的美观和临床效果。最近，随着产品的发展与分层堆塑技术的临床应用，具有完美乳光及荧光特性、提供更多颜色分布范围和色号选择的新复合体已经出现。但是临床医师普遍抱怨分层技术过于复杂，同时颜色的正确选择也很困难。对市售的原本设计在中长期使用上能获得更好效果的先进材料，更难作出正确的选择。事实上．很多医师在最初的使用热情一过．就放弃了分层技术，而选择了操作更简单或更易选色的材料。本文将探讨在日常工作中如何在美学和临床视角上达到高质量的治疗效果。然而．对结果的预见性尤为重要，因为其关系到治疗质量及医师和病人的经济利益。
- Devoto WSaracinelli MManauta J王丹邵龙泉（审）
- 关键词：前牙修复操作技术复合体临床医师
- Septin 8红色荧光蛋白融合载体的构建及表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建在哺乳动物细胞中表达的septin 8红色荧光蛋白融合表达载体(pmCherry-C2/septin 8),并观察其在细胞内的表达和定位情况。方法采用PCR的方法从人脑胶质细胞瘤cDNA文库中扩增获得septin 8基因编码区序列,将其克隆至红色荧光蛋白载体pmCherry-C2上,重组质粒经PCR、酶切以及序列分析正确无误后转染NIH3T3细胞,并利用Western blotting和细胞免疫化学技术分析重组蛋白在细胞内的表达和定位。结果重组pmCherry-C2/septin 8融合蛋白在NIH3T3细胞中得到高量表达且主要分布于细胞浆。结论成功构建了pmCherry-C2/septin 8融合表达载体,该载体能在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究septin 8细胞内生物学功能打下了良好的基础。
- 王丹梅柱中刘爱华明小燕王达安王旭姜勇
- 关键词：红色荧光蛋白基因表达
- 肌动蛋白和Tau蛋白荧光蛋白融合载体的构建、表达及其细胞内定位
- 2009年
- 背景:肌动蛋白和Tau蛋白分别是微丝和微管的重要组成成分,肌动蛋白和Tau蛋白的分布能否作为微丝和微管的观察指标。目的:构建肌动蛋白和Tau蛋白的红色和绿色荧光蛋白融合表达载体并转染真核细胞,观察其在细胞内的表达和定位情况。设计、时间及地点:单一样本观察实验,于2008-03/08在南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室共同完成。材料:克隆在pcDNA3载体上的肌动蛋白和Tau蛋白真核表达载体pcDNA3-actin和pcDNA3-Tau,以及红色荧光蛋白表达载体pmCherry-C2和绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C2、大肠杆菌株DH5α和小鼠NIH3T3细胞系由南方医科大学病理生理学教研室保存。方法:将克隆在pcDNA3上的肌动蛋白和Tau蛋白亚克隆到红色荧光蛋白载体pmCherry-C2和绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上,然后转染NIH3T3细胞,利用荧光显微镜观察重组载体的表达和细胞内定位。主要观察指标:NIH3T3细胞转染24h后,利用Leica荧光显微镜观察上述重组载体在细胞中的表达和定位情况。结果:重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,并在NIH3T3细胞中可获得高量表达。融合蛋白发出的红色和绿色荧光均表明,肌动蛋白在细胞质中呈短丝状弥散分布,Tau蛋白以细胞核为中心呈放射状排列。结论:成功构建了肌动蛋白和Tau蛋白的不同荧光蛋白融合表达载体,并在真核细胞中得到有效表达,这为研究细胞骨架在信号分子移位中的作用提供了一个重要的工具。
- 明小燕龚小卫王丹王达安王旭姜勇
- 关键词：肌动蛋白TAU蛋白荧光蛋白细胞内定位
- TM4SF1真核表达载体的构建及其对结直肠癌细胞株生物学功能的影响被引量：1
- 2014年
- 目的构建TM4SF1的真核表达载体并研究其对结直肠癌细胞株HCT116、DLD1迁移及侵袭功能的生物学特性影响。方法根据GenBank:BC034145.1中的TM4SF1的序列设计两条引物,用逆转录的方法获得开放阅读框(ORF区),并将其连接到质粒上,经鉴定后瞬时转染结直肠癌细胞株HCT116及DLD1,应用Western blot及细胞免疫化学方法检测其转染效果及表达情况,采用划痕及transwell实验观察其对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果成功构建PEZ-M29/TM4SF1真核表达载体,Western blot及细胞免疫化学实验结果显示TM4SF1表达上调可以促进结直肠癌细胞株的迁移及侵袭能力。结论成功构建TM4SF1真核表达载体,TM4SF1的上调表达可提高结直肠癌细胞株HCT116、DLD1的迁移及侵袭能力,提示TM4SF1与结直肠癌侵袭转移密切相关,为进一步阐明TM4SF1在结直肠癌转移中的作用及相关机制奠定基础。
- 王丹陈娜彭曼徐琼周军
- 关键词：迁移
- 结直肠癌中同源盒基因B9的表达及临床意义被引量：2
- 2014年
- 目的通过检测结直肠癌组织中同源盒基因B9(HOXB9)基因的表达模式,探讨HOXB9基因的表达与结直肠癌患者临床病理特征的相关联系。方法应用RT-PCR、Real-time PCR及Western blot方法分别检测HOXB9在不同转移潜能的结直肠癌细胞系、8例结直肠癌及相应癌旁组织中mRNA和蛋白表达水平的表达差异;采用免疫组化方法检测HOXB9在136例结直肠癌石蜡组织标本中的表达特点,分析其与结直肠癌临床病理特征的相关联系及意义。结果 HOXB9基因在具有较高转移潜能的结直肠癌细胞系SW620、Lovo及M5中表达明显上调;在8例结直肠癌组织中HOXB9基因在mRNA及蛋白的表达明显高于相应癌旁正常组织;免疫组化的检测结果则显示在结直肠癌组织中HOXB9蛋白表达的阳性率为83.1%(113/136),强阳性率约为58.8%(80/136),HOXB9蛋白在结直肠癌组织中的表达水平高于相应癌旁组织;统计学分析结果表明,HOXB9蛋白的高表达与结直肠癌临床分期、T分期、淋巴结转移及远处转移密切相关,而与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及分化程度无显著相关性。结论 HOXB9在结直肠癌组织中的表达明显上调,其上调表达与结直肠癌的临床进展关系密切,提示HOXB9在肿瘤发生和转移中可能承担着关键作用。
- 刘逸陈名华陈德鑫朱文奕王丹周军
- 关键词：结直肠癌
- ADIPOQ基因11377C/G位点多态性与身体活动对儿童代谢综合征的影响被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨ADIPOQ基因多态性位点11377C/G rs266729与身体活动的交互作用对儿童代谢综合征的影响。方法:采用病例对照研究的方法,病例组114例,对照组114例。应用直接测序法检测ADIPOQ 11377C/G的基因型,用叉生分析方法研究其与身体活动的交互作用对代谢综合征的影响。结果 :活动充分是代谢综合征的保护因素,OR值为0.14;身体活动不足与11377C/G CC基因型存在交互作用,可以增加儿童代谢综合的风险。结论:身体活动充分可以降低儿童患代谢综合征的风险。身体活动与11377C/G rs266729多态性对儿童代谢综合征存在交互作用。
- 王凯风叶萍王丹吴柳风刘伟佳陈清李建栋
- 关键词：代谢综合征基因多态性身体活动
- 检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7的环介导等温扩增和PCR法比较被引量：7
- 2012年
- 目的建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7快速简便检测方法,并与PCR进行比较。方法针对EHEC O157:H7保守的rfbE基因序列,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术并优化其反应条件,比较这两种检测方法的灵敏度、特异性和对实际样品的检测结果。结果成功建立了LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限低至10 cfu/ml,PCR检测限为102cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对39株近源菌进行检测,结果显示,LAMP法仅7株EHEC O157:H7得到阳性结果,非EHEC O157:H7菌株均为阴性,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP法特异性比PCR法高。对于32份猪肉样品的检测,LAMP和PCR与常规检测结果一致,3份样品检测阳性。结论 LAMP检测技术的特异性和灵敏度较PCR高,并且操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速准确检测EHEC O157:H7的有效手段。
- 姜容龙北国曾桂芬王丹范宏英吴娴波
- 关键词：肠出血性大肠埃希菌O157:H7环介导等温扩增技术PCR技术
- 成功运用氧化锆种植体及全瓷冠进行上颌中切牙美容修复的病例报告
- 2010年
- 陶瓷工艺应用于口腔医学和临床医学已有多年历史，现今氧化锆因其出色的机械性能成为最受欢迎的陶瓷材料之一．并已应用于以前仅能采用金属材料修复的病例中。氧化锆作为单冠及长桥的基底材料已应用多年．同时也被作为植入体用于髋关节置换以及指、趾、腕关节。近期有部分研究报道使用氧化锆种植体修复缺失牙。本文展示了1例使用表面粗化的氧化锆种植体进行美学修复的病例。一名28岁的男性患者要求修复缺失的上中切牙。两颗表面粗化的（CeraRoot）氧化锆种植体被用于上中切牙拔牙后的即刻修复．术后戴入即刻临时冠．三个月后最终全瓷修复体粘结完成。氧化锆种植体可作为种植修复材料很好的选择．尤其适用于美观要求较高的病例．但仍需要更多的相关研究用于评价不同表面结构的氧化锆种植体的远期临床效果。
- 王丹邵龙泉
- 关键词：病例报告美容修复氧化锆种植体上颌中切牙全瓷冠
