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稻瘟病菌致病突变体的REMI诱变与鉴定被引量：17: 1998年; 以水稻“爱知旭”（Ａｉｃｈｉａｓｈａｈｉ）为寄主，将带选择标记的质粒ｐＣＳＮ４３和ｐＢＦ１０１为外源ＤＮＡ，利用限制酶诱导整合（ＲＥＭＩ）这种新方法转化稻瘟病菌原生质体，从筛选到的数百个转化体中分离出３个与致病能力密切相关的突变体Ｒ２Ｈ６５、Ｒ２Ｈ６９和Ｒ２Ｂ１５６５。其中，Ｒ２Ｈ６５和Ｒ２Ｈ６９只产生畸形分生孢子，分生孢子的发育和附着胞的形成以及黑色素的合成均受到极大影响，致病性测试证明完全丧失致病能力；Ｒ２Ｂ１５６５的许多表型与野生型的相似，但致病能力却大大降低。; 刘树俊魏荣宣有江力山口勇; 关键词：稻瘟病菌

慈菇蛋白酶抑制剂通过花粉管途径对小麦的导入及转基因植株分析被引量：67: 1999年; 慈菇蛋白酶抑制剂（ArrowheadProteinaseInhbitor，API）是来源于慈菇（Sagittariatrifolia）储藏器官（根茎）的一种天然抗虫物质，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂类，能抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和激肽释放酶，对某些鳞翅目、双翅目以及鞘翅目等昆虫有毒杀作用。通过花粉管途径，将构建的含抗虫基因API－A、API－B和选择性标记基因NPT－Ⅱ的质粒pBLAH－A（B）导入3个冬小麦品种（JD-1、8866、866554），通过卡那霉素抗性的筛选和聚合酶链反应（PCR）技术分析表明，Kmr绿苗中有3株为PCR阳性株（866554有2株，JD-1有1株），阳性率为0．29％。用API基因的片段为探针，对Kmr绿苗分别进行基因组DNA的Southern杂交分析，在3株PCR阳性株中都检测出了API基因片段的存在，说明了外源目的基因已整合到小麦基因组中。对转化阳性植株899554-3的自交后代进行了PCR分析和Southern杂交分析，部分植株表现为PCR和Southern杂交阳性，这表明整合到基因组中的外源基因能稳定遗传给后代。用ELISA的方法检测与API基因融合的NPT－Ⅱ基因的表达含量，发现在PCR和Southern杂交分析为阳性反应的3植株中都显示出NPT－Ⅱ的高含量，为杀虫基因API在转基因小麦中的整合提供了进一步证据。; 牟红梅刘树俊周文娟文玉香张文俊魏荣瑄; 关键词：慈菇抗虫基因小麦遗传转化 API

利用限制性内切酶诱导整合(REMI)获得稻瘟病菌突变体被引量：12: 1998年; 限制性内切酶诱导整合（ＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎＥｎｚｙｍｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄＩｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ，简称ＲＥＭＩ，下同）已被成功用于创造随机插入突变和提高转化频率。用限制酶消化的线状质粒ｐＣＳＮ４３或ｐＢＦ１０１，并加一定量的同种限制酶，转化稻瘟病菌（Ｍ．ｇｒｉｓｅａ）的原生质体后，得到约４５０个转化子。对一些表型进行测试后，获得两个分生孢子形态突变体。与野生型相比较，突变体的分生孢子细而且长，呈棒形。ＲＥＭＩ非常有用，因其能提高转化频率，较容易地获得期望数目的转化子；限制性内切酶可随机切割寄主染色体，便于插入线状质粒，导致基因突变。可根据异常表型判定基因的功能，根据插入质粒克隆该基因。; 刘树俊有江力山口勇; 关键词：限制性内切酶稻瘟病菌

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刘树俊

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