单剑峰
- 作品数：10 被引量：24H指数：2
- 供职机构：杭州九源基因工程有限公司更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体及其制备方法
- 本发明公开了一种高活性的聚乙二醇单修饰重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG-rmhG-CSF)及其制备方法和医疗用途。将重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)游离的半胱氨酸(Cys)经聚乙二醇巯基反应试剂定...
- 黄岩山金荣徐飞虎刘晓妮单剑峰王昌梅
- 文献传递
- 层析法去除重组人血清白蛋白干扰素α2b融合蛋白的内毒素被引量：16
- 2008年
- 用柱层析方法在生产重组人血清白蛋白干扰素a2b融合蛋白过程中去除产品中的内毒素。所用柱层析组合为Blue-sepharose亲和柱层析、SOURCE 15 ISO疏水柱层析、Q Sepharose F.F.离子交换柱层析、Sephadex G25 Coarse凝胶过滤柱。采用鲎试剂法检测柱层析各阶段得到蛋白中的内毒素含量;并用RP-HPLC方法测定柱层析各阶段得到蛋白的纯度与浓度,求出每毫克蛋白的内毒素含量。结果为每步柱层析过程式均有去除内毒素的作用,最终所得蛋白的内毒素含量降为1 EU/mg,去除率达到99.9%。因而生产重组人血清白蛋白干扰素a2b融合蛋白所用分离纯化柱层析技术在纯化蛋白的同时能有效的去除产品中内毒素,所得产品内毒素的含量远低于药典对注射剂的内毒素含量要求。
- 徐向荣马国昌王昌梅单剑峰沈玲黄岩山周金宝
- 关键词：人血清白蛋白干扰素Α2B柱层析内毒素
- 响应曲面法优化rmHSA-GCSF的发酵工艺
- 2015年
- 采用Plackett-Burman设计法对影响巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子突变体(rmHSA-GCSF)的主要参数进行了摇瓶试验,选取到3种显著效应的因素:诱导pH、甲醇添加浓度和诱导时间。再利用响应曲面法(Response surface method)对这3种因素进行进一步研究,得到最佳培养条件:甲醇诱导浓度为2.45%,诱导pH为5.54,诱导时间为66.4 h。采用此优化参数,rm HSA-GCSF表达量的最大预测值达157.5 mg/L。此后,根据优化的培养条件,进行150 L发酵罐放大试验,rm HSA-GCSF表达量达到600 mg/L左右,成功实现rm HSA-GCSF的高效表达。
- 单剑峰刘晓妮戎亚雯张昕郭旺明王同映
- 关键词：PLACKETT-BURMAN设计巴斯德毕赤酵母RM响应曲面法
- 一种HSA-GCSF突变体及其制备方法
- 本发明涉及一种无糖基化的重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子突变体，通过对重组人血清白蛋白粒细胞集落刺激因子基因的潜在糖基化位点进行突变，剔除了重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子的潜在糖基化位点，然后转化到毕赤酵母或者...
- 单剑峰王昌梅金荣严春霞张昕戎亚雯李亚飞游修鼎
- 文献传递
- 聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体
- 本发明涉及一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG－rmhG－CSF)的制备和鉴定。通过点突变技术，将重组人粒细胞集落刺激因子(rhG－CSF)18位的半胱氨酸(cys)突变为丝氨酸(ser)，再通过噬...
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- 文献传递
- 聚乙二醇单修饰的重组人集落细胞刺激因子赖氨酸缺陷体
- 本发明公开了一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子赖氨酸缺陷体(PEG－rhG－CSF－Lys<Sup>D</Sup>)。通过噬菌体展示技术表达所有赖氨酸突变的重组人粒细胞集落刺激因子赖氨酸缺陷体(rhG－CSF－...
- 金荣刘晓妮徐飞虎单剑峰戎亚雯方井晋马国昌王同映黄岩山
- 文献传递
- 一种HSA-GCSF突变体及其制备方法
- 本发明涉及一种无糖基化的重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子突变体，通过对重组人血清白蛋白粒细胞集落刺激因子基因的潜在糖基化位点进行突变，剔除了重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子的潜在糖基化位点，然后转化到毕赤酵母或者...
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- 重组HSA-hG-CSF融合蛋白在毕赤酵母中的表达被引量：8
- 2006年
- 为了延长G-CSF半衰期，利用甲醇酵母表达重组人血清白蛋白融合的集落细胞刺激因子（rHSA-G-CSF）。用PCR方法从人胎肝cDNA文库扩增出HSA cDNA序列，hG—CSFcDNA序列从大肠表达载体中酶切获取。将HSA和hG—CSF两片段连接后，克隆到酵母分泌型表达载体pGENYK中，酶切线性化后原生质体转化导入酵母细胞进行整合。工程菌经发酵罐培养表达，层析法分离纯化融合蛋白。纯化的融合蛋白经Western印迹分析表明具有HSA和G—CSF的免疫原性，体外生物学活性分析表明，同等尔数的融合表达产物的活性为E．coli表达G—CSF单体的活性的50％以上。体内动物实验研究表明，经HSA融合的G．CSF的半衰期为G—CSF单体的15～20倍。甲醇酵母表达的融合HSA的G-CSF具有比G-CSF更长的半衰期，有良好的临床应用前景。
- 王昌梅王同映杨志愉单剑峰刘晓妮马国昌戎亚雯方井晋黄岩山周金宝
- 关键词：毕氏酵母
- 聚乙二醇单修饰的重组人集落细胞刺激因子赖氨酸缺陷体
- 本发明公开了一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子赖氨酸缺陷体(PEG-rhG-CSF-Lys<Sup>D</Sup>)。通过噬菌体展示技术表达所有赖氨酸突变的重组人粒细胞集落刺激因子赖氨酸缺陷体(rhG-CSF-...
- 金荣刘晓妮徐飞虎单剑峰戎亚雯方井晋马国昌王同映黄岩山
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- 一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体及其制备方法
- 本发明公开了一种高活性的聚乙二醇单修饰重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG－rmhG－CSF)及其制备方法和医疗用途。将重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG－CSF)游离的半胱氨酸(Cys)经聚乙二醇巯基反应试剂定...
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