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质粒克隆载体研究进展被引量：1: 1997年; 质粒克隆载体研究进展靳卫东宋增璇（中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室，天津３０００２０）关键词质粒克隆载体质粒是基因工程重要的载体之一。它是细胞内的共生型遗传因子，它能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞一些特殊表型。质...; 靳卫东宋增璇; 关键词：质粒克隆

bcr-abl融合基因及其检测被引量：5: 1998年; bcr-abl融合基因位于染色体t(9;22)(q34;q11),由位于9号染色体上的细胞原癌基因abl部分序列从其正常位置易位至22号染色体的BCR区而形成。在绝大多数病例中,断裂点集中在5.8 kb的M-BCR区,主要形成b2a2和b3a2二种形式的转录物及蛋白质,二者差异仅为75个碱基及25个氨基酸。bcr-abl融合基因及其表达的检测对CML有重要的诊断与预后价值。用Southern印迹杂交、间期或中期染色体原位杂交等方法检测DNA,发现Ph阴性或变异型Ph病人存在bcr-abl融合基因,检测到许多新的融合类型,并确认异基因BMT后白血病的复发是源于自身MRL。用优化的RT-PCR,定量RT-PCR或RNA原位杂交检测RNA,可精确定位罕见或混合的接合型,还发现正常人中bcr-abl基因有低量表达且有随年龄增长而增加的趋势。用Western印迹或酶联免疫反应检测,发现BCR-ABL蛋白与C-ABL蛋白之比在外周血与骨髓中相似且与Ph染色体重排率有线性关系,还发现如果P190继P210之后出现,则CML的预后很差。; 靳卫东宋增璇; 关键词：BCR-ABL 融合基因基因检测慢性髓细胞白血病

人及小鼠干细胞因子的cDNA克隆及其序列分析被引量：2: 1995年; 作者合成了一段与人和小鼠干细胞因子（ＳＣＦ）ｃＤＮＡ能特异性互补的寡核苷酸探针，经放射性同位素标记，与两株人骨髓基质细胞系（ＨＥＣＬ、ＨＦＣＬ）和一株小鼠骨髓基质细胞系（ＴＣ－１）的ＲＮＡ进行点杂交。结果表明这三株基质细胞都能表达ＳＣＦｍＲＮＡ。因此，作者利用逆转录－多聚酶链反应技术扩增编码ＳＣＦ的部分ｃＤＮＡ序列，并将其克隆入ｐＵＣ１８载体。ＤＮＡ序列分析结果显示作者所克隆的ＳＣＦｃＤＮＡ序列与文献报道的一致。; 柳柏林李彬靳卫东宋增璇; 关键词：干细胞因子逆转录多聚酶链反应基因克隆 CDNA

反义bcr／ab1　RNA真核表达载体的构建: 1995年; 利用ＤＮＡ重组技术，将分离到的ｂｃｒ／ａｂｌｃＤＮＡ片段克隆到质粒ｐＳＰ７２中。在这个中间克隆载体中，此ｃＤＮＡ片段两端的酶切点已被调整。利用此中间克隆载体和逆转录病毒载体ＢＡＧ，组装了反义ｂｃｒ／ａｂｌＲＮＡ的真核表达载体，此重组表达载体将应用在细胞水平研究反义ＲＮＡ对ｂｃｒ／ａｂｌ基因携带细胞的作用，探索基因治疗。; 靳卫东宋增璇柳柏林许静李彬马月霞田竞生; 关键词：基因治疗基因表达

反义bcr／ablRNA的体外转录和杂交被引量：2: 1994年; 为了转录出反义ｂｃｒ／ａｂｌＲＮＡ，我们用逆转录。聚合酶链反应技术将ｂｃｒ／ａｂｌ嵌合转录体接合区扩增，并反向插到ｐＧＥＭ－４Ｚ质粒ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶转录起始点下游作为体外转录的模板。限制酶切分析和ＤＮＡ序列分析结果都证实插入片段序列与Ｋ５６２ｍＲＮＡ接合区完全一致。利用体外转录技术，我们成功地转录出跨ｂｃｒ／ａｂｌ接合区反义ＲＮＡ。体外杂交实验的结果表明，该反义ＲＮＡ具有杂交捕获ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ接合区的功能，可应用于选择性抑制含ｂｃｒ／ａｂｌ基因的白血病细胞。; 靳卫东宋增璇赵西林陈德风柳柏林宋丹英李彬许静李克军蔡英林; 关键词：反义RNA 杂交转录

人及小鼠干细胞因子cDNA克隆的分离与鉴定: 1994年; 干细胞因子(SCF)是作用于早期多能造血干细胞的调控因子。不同的作者对这种因子有不同的命名,然而它们的生物学作用相同,都是c—kit编码蛋白的配体,它们的cDNA序列基本相同,因而证明是同一种物质。我们利用RT-PCR方法,从我室自己建立的三株基质细胞系中扩增出SCF活性部分的cDNA序列,并成功地克隆入载体,为进一步表达SCF并探索它的生物学新功能和作用机制提供了保证。; 柳柏林宋增璇靳卫东宋丹英李彬蔡英林李克军姜学英; 关键词：干细胞因子 CDNA克隆基质细胞系多能造血干细胞小鼠骨髓条件培养液

慢性粒细胞白血病bcr-abl基因反义核酸的初步研究: 1999年; 探讨用逆转录病毒表达载体携带反义核酸进入ＣＭＬ细胞并作用于ｂｃｒ－ａｂ１基因的方法。方法：反义序列用ＲＴ－ＰＣＲ法，取自Ｋ５６２细胞系，使之成功地构建了正反义ＲＮＡ的逆转录病毒表达载体。结果：与正义链相比，反义ｂｃｒ－ａｂ１序列显著抑制Ｋ５６２及ＣＭＬ细胞生长，其抑制程度与剂量呈正相关，其细胞形态学改变支持其进入凋亡进程。结论：此反义核酸是探索ＣＭＬ基因治疗的重要材料。; 靳卫东高宏伟马月霞马月霞张丽艳刁世勇许静张丽艳; 关键词：白血病 BCR-ABL基因 CML 反义核酸

bcr/abl基因b3-a2型接合区cDNA的分离和序列分析被引量：1: 1994年; 利用分子生物学方法,我们将K562细胞林bcr/abl mRNA 0.3kb的接合区cDNA片段用聚合酶链反应扩增并插入到质粒pGEM-4-Z载体中。经限制酶切分析和荧光标记M13引物法DNA序列测定,证实重组质粒pB3A2中有0.3kb的插入片段与K562 mRNA接合区序列完全一致。我们分离到的接合区DNA可用于bcr/abl基因的检测及其反义核酸抑制的研究。; 靳卫东宋增璇柳柏林宋丹英李彬李克军蔡英林赵西林; 关键词：BCR/ABL基因

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靳卫东