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应用多重PCR方法进行lncRNA功能研究: 随着越来越多具有功能lncRNA被发现,lncRNA新的作用机制也逐步被揭示出来。然而,大多数lncRNA对研究中通常检测的细胞生物学效应的影响不明显,使lncRNA功能研究受到了制约。我们希望通过检测表达受到lncRN...; 沈远付汉江朱娟娟刘珊珊钟一然郑晓飞; 关键词：多重PCR; 文献传递

应用多重PCR方法进行lncRNA功能研究: 随着越来越多具有功能lncRNA被发现,lncRNA新的作用机制也逐步被揭示出来。然而,大多数lncRNA对研究中通常检测的细胞生物学效应的影响不明显,使lncRNA功能研究受到了制约。我们希望通过检测表达受到lncRN...; 沈远付汉江朱娟娟刘珊珊钟一然郑晓飞; 关键词：多重PCR

利用CRISPR/Cas方法建立RNaseL基因稳定敲除细胞株被引量：1: 2015年; 目的利用CRISPR/Cas9技术建立人RNase L基因稳定敲除的细胞株。方法根据Gen Bank中RNase L基因序列,设计RNase L敲除的小指导RNA(sgRNA)序列,将其克隆到p Cas-Guide真核表达载体中,获得p Cas指导RNA(gRNA)载体;设计供体DNA的同源臂序列,通过搭桥PCR将左同源臂、潮霉素B抗性基因和右同源臂扩增成为一条片段作为同源重组的修复模板,并将其克隆到p Back Zero-T表达载体上,获得p Back Zero-T-RNase LK载体。将上述两个载体共转染HEK293细胞,用潮霉素B筛选,通过Western印迹和DNA测序等技术验证RNase L从基因组上敲除。结果与结论成功构建了载体p Cas-gRNA和p Back Zero-T-RNase LK,Western印迹和DNA测序结果表明,成功获得5株RNase L缺失的细胞株,为探讨RNase L的生物学功能和研究其分子机制奠定了基础。; 李瑞花付汉江钟一然沈远朱捷郑晓飞; 关键词：RNASE 同源重组转染

阿霉素诱导长链非编码RNA SNHG1细胞核驻留削弱hnRNPC同p53相互作用: 长链非编码RNA（lncRNA）是一类长度大于200个核苷酸的RNA，它们没有编码蛋白质的能力，具有多样性的基因表达调控功能，可以在表观遗传修饰、转录及转录后等不同层次对基因表达进行调控。lncRNA具有多样的核质分布，...; 沈远; 关键词：肠癌长链非编码RNA P53蛋白细胞核; 文献传递

DNA损伤反应相关长链非编码RNA筛选及功能研究: 长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一类在结构上与mRNA相似,但不编码蛋白质的RNA分子。lncRNA分子广泛参与多种生理病理过程,但其在DNA损伤修复过程中的作用尚不明确。为分析l...; 王瑞国沈远付汉江杜彩素郑晓飞; 关键词：DNA损伤; 文献传递

利用CRISPR/Cas系统构建在XRCC6内源基因插入Flag标签序列的HeLa细胞系被引量：2: 2016年; 目的:利用CRISPR/Cas系统在XRCC6基因5′端插入Flag标签序列,筛选XRCC6-Flag稳定表达的宫颈癌细胞(He La)株。方法:根据Gen Bank中XRCC6基因序列,设计XRCC6基因敲入的g RNA序列,构建入p Cas-Guide载体中,获得p Cas-XRCC6载体;设计XRCC6基因的同源臂序列,利用搭桥PCR方法将同源臂和Flag标签序列作为模板进行扩增,得到供体DNA片段,并将其克隆到p Back Zero-T表达载体上,获得p XRCC6-Donor载体;将上述2个载体共转染He La细胞,采用PCR、Western印迹等方法检测和筛选Flag标签序列插入XRCC6基因5′端的细胞株。结果:构建了p Cas-XRCC6和p XRCC6-Donor载体,筛选获得3株XRCC6-Flag稳定表达细胞株。结论:构建了XRCC6-Flag稳定细胞株,为研究XRCC6基因及其蛋白产物的生物学功能奠定了基础。; 李瑞花付汉江沈远钟一然朱捷郑晓飞

DNA损伤诱导的长链非编码RNA-UCA1促进HeLa细胞增殖被引量：8: 2015年; 尿路上皮癌抗原1(UCA1)是一种长链非编码RNA,在多种肿瘤内高表达.然而,其在宫颈癌细胞和组织中的表达报告颇不一致,且功能尚未确定.本文探索UCA1在宫颈癌He La细胞中的生物学功能.实时定量PCR(qRT-PCR)结果显示,UCA1、p21和p53 mRNA在阿霉素(doxorubicin,DOX)或γ射线照射的He La细胞中表达上调;相反,敲减p53表达则可抑制DOX诱导的UCA1上调.表明DNA损伤诱导的UCA1可能与p53有关.转染结合CCK8检测He La细胞增殖活力结果显示,与对照比较,过表达UCA1促进He La细胞增殖,干扰UCA1表达则减缓细胞增殖.此外,流式细胞术结果显示,过表达UCA1导致阿霉素诱导的凋亡率下降;siRNA抑制UCA1表达后引起细胞G2/M期比例上升,S期下降,且阿霉素诱导的细胞凋亡率上升.上述结果说明,DNA损伤诱导的UCA1可促进He La细胞增殖,减少细胞凋亡.然而,是否DNA损伤诱导的UCA1上调依赖p53尚需进一步实验证明.; 王瑞国沈远李清宋宜朱捷郑晓飞杜彩素付汉江; 关键词：长链非编码RNA 宫颈癌 DNA损伤

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沈远