孙一晟
- 作品数：26 被引量：31H指数：4
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- CV-A16对长爪沙鼠肌肉细胞的杀伤机理研究
- 2018年
- 目的研究柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)对沙鼠原代肌肉细胞的杀伤机理,为阐明CV-A16的致病机理及沙鼠模型的进一步应用提供依据。方法采用胰蛋白酶/胶原酶双酶法构建沙鼠原代肌肉细胞模型,用不同感染剂量CV-A16感染细胞24h,采用CCK-8法检测细胞存活率,Hoechst 33258染色法检测细胞染色质变化,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡比例,蛋白免疫印迹法检测Caspases家族蛋白、NF-κB通路相关蛋白及JNK激酶表达。结果感染复数(MOI)=0.50和1.00组细胞存活率分别为88.95%和64.05%,与阴性对照组(100.00%)比较,差异均有统计学意义(P<0.05),细胞存活率与MOI呈负相关(rs=-0.857,P=0.014);MOI=0.01、0.10和1.00组细胞凋亡比例分别为7.2%、21.8%和50.7%,细胞凋亡比例与MOI呈正相关(rs=1.000,P<0.001)。CV-A16感染后,Caspase-3和Caspase-8蛋白均被剪切激活,NF-κB通路相关蛋白IκBα、p65和p-p65表达均减少,JNK蛋白磷酸化水平增加。结论 CV-A16可能通过抑制NF-κB通路和激活JNK激酶诱导沙鼠原代肌肉细胞凋亡。
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- 关键词：柯萨奇病毒细胞凋亡
- 汉坦病毒核蛋白的重组表达及其免疫印迹法在肾综合征出血热血清抗体检测中的应用被引量：1
- 2017年
- 目的 应用基因工程技术，在昆虫细胞中表达汉坦病毒（HV）S基因，表达产物作为诊断抗原，用于检测血清中抗HV特异性抗体IgG。方法 PCR扩增HV-Z10株N蛋白（NP）编码基因，基因工程方法构建NP编码基因昆虫表达系统 rBAC-Z10S-TN。间接荧光法了解重组NP（rNP）表达及与特异性免疫反应情况，SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况。建立免疫印迹法检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清样品，并与常规间接免疫荧光法进行比较。结果 rBAC-Z10S-TN高效表达rNP，SDS-PAGE显示rNP的蛋白表达带，此抗原仅与HFRS患者血清起反应。经双盲试验，两法检测血清143份，HFRS阳性符合率为97.67%。结论 成功构建了HV-Z10株NP编码基因高效真核表达系统。所建立的免疫印迹法可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法。
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- 关键词：汉坦病毒N蛋白杆状病毒表达系统免疫印迹法
- 一种人肠道病毒株及其应用
- 本发明公开了一种人肠道病毒株及其应用，本发明提供了一种EV71病毒减毒株，可在沙鼠原代肌肉细胞上获得稳定较高的病毒滴度。病毒减毒株157‑11‑2具有较好的免疫保护效果，为今后疫苗的研发提供良好的候选毒株。
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- 文献传递
- 肠道病毒71型诱导沙鼠肌肉细胞凋亡及其机理研究被引量：2
- 2017年
- 目的研究肠道病毒71型(EV71)杀伤沙鼠原代肌肉细胞的作用机理,为EV71的感染机制研究提供依据。方法采用胰酶/胶原酶消化法分离培养沙鼠原代肌肉细胞,滴加EV71感染细胞,采用CCK-8法检测感染细胞存活率,Hoechst 33258染色法检测感染细胞核变化,Annexin V/PI双染法检测感染细胞的细胞膜变化,蛋白免疫印迹试验检测感染细胞的PARP-1、Caspase-3、Bcl-2家族蛋白等凋亡因子和NF-κB通路相关蛋白表达量的变化。结果构建体外沙鼠原代肌肉细胞模型,使其感染EV71后,肌肉细胞出现皱缩、变圆、漂浮等形态学变化,且感染复数(MOI)越大,病变程度越明显,细胞存活率越低(rs=-0.964,P=0.005);细胞内染色质发生浓缩,细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻,伴随凋亡小体出现,细胞凋亡与MOI呈正相关(rs=1.000,P<0.001);凋亡标志蛋白PARP-1与凋亡执行蛋白Caspase-3被剪切激活;抑凋亡蛋白Bcl-xl与Bcl-2的表达量随着MOI的增大而减少;p65蛋白表达水平降低,磷酸化水平升高,NF-κB通路被激活。结论 EV71病毒可以诱导沙鼠原代肌肉细胞发生凋亡。
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- 关键词：EV71细胞凋亡
- 一种柯萨奇病毒A10型cDNA感染性克隆的构建方法
- 本发明提供一种CVA10中国临床分离株感染性克隆及其构建方法，大大简化了CVA10病毒的反向遗传学操作步骤，为今后CVA10病毒及其他肠道病毒反向遗传学技术的广泛应用提供了更简便的平台，并设计了7对引物对病毒全基因组进行...
- 姚苹苹陈晨朱函坪孙一晟徐芳卢杭景
- CV-A16疫苗的免疫原性评价方法研究被引量：2
- 2018年
- 目的筛选可用于CV-A16疫苗免疫原性评价的最适实验动物及中和抗体检测毒株,为构建CV-A16疫苗免疫原性评价方法提供依据.方法采用CV-A16灭活疫苗免疫6种实验室常用动物BALB/c、ICR、NIH、KM鼠、豚鼠、SD大鼠以及对肠道病毒敏感的SCARB2-转基因小鼠和沙鼠,于一针和两针免疫后采血,分别用B基因型ZJ31/02、ZJ90/02、ZJ20/01毒株和A基因型原型株(G10)作为检测毒株进行CV-A16中和抗体应答水平研究.结果一针免疫后,全部组别的中和抗体应答水平均较低,ZJ31/02、ZJ90/02、ZJ20/01和G10检测的NTAb阳转率均值分别为51.3%(0~80%)、40.0%(0~70%)、12.5%(0~20%)和5.0%(0~20%);二针免疫后,抗体水平出现明显升高,阳转率均值分别为95.0%(80%~100%)、88.8%(70%~100%)、58.8%(0~100%)和65.0%(0~90%);GMTs均值分别为55.5、46.4、20.2和11.7.以ZJ31/02和ZJ90/02的检测结果最高,阳转率显著高于ZJ20/01(P<0.05).采用该两检测株检测时,KM鼠和SD大鼠的抗体应答最强,阳转率均可达90%,GMTs均高于100.结论CV-A16灭活疫苗二针免疫KM小鼠和SD大鼠可诱导较好的特异性中和抗体应答,可将ZJ31/02和ZJ90/02作为检测毒株,结合标准物质建立标准化CV-A16疫苗体内效力和免疫原性评价方法.
- 毛群颖胡亚林孙一晟高帆邹强卞莲莲范昌发梁争论
- 关键词：柯萨奇病毒A16型疫苗中和抗体
- 一种基于新冠病毒德尔塔株的RBD-Fc融合蛋白及其应用
- 本发明公开了一种基于新冠病毒德尔塔株的RBD‑Fc融合蛋白及其应用，该基于新冠病毒德尔塔株的RBD‑Fc融合蛋白制备的亚单位疫苗可诱导小鼠产生高滴度的特异性IgG抗体和中和抗体，高滴度抗体水平可持续7个月，同时还能诱导小...
- 孙一晟周展骆圆圆姚苹苹徐芳赵文彬朱函坪卢杭景
- 一种人肠道病毒株及其应用
- 本发明公开了一种人肠道病毒株及其应用，本发明提供了一种EV71病毒减毒株，可在沙鼠原代肌肉细胞上获得稳定较高的病毒滴度。病毒减毒株157‑11‑2具有较好的免疫保护效果，为今后疫苗的研发提供良好的候选毒株。
- 孙一晟朱函坪夏时畅姚苹苹徐芳杨章女朱智勇卢杭景周小龙
- 柯萨奇病毒A组16型对长爪沙鼠肌肉细胞的杀伤机理研究
- 目的 研究柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)对沙鼠原代肌肉细胞的杀伤机理,为阐明CV-A16病毒的致病机理及沙鼠模型的进一步应用打下基础.方法 胰蛋白酶/胶原酶双酶法构建沙鼠原代肌肉细胞模型,CCK-8法检测细胞存活率...
- 孙一晟姚苹苹杨章女徐芳卢杭景朱函坪
- 关键词：细胞凋亡
- 一种基于新冠病毒拉姆达变异株的RBD-Fc融合蛋白及其应用
- 本发明提供一种基于新冠病毒拉姆达变异株的RBD‑Fc融合蛋白，本发明首次通过Fc片段修饰基于新冠病毒拉姆达变异株序列的RBD，制备得到RBD‑Fc融合蛋白，该融合蛋白与现有的拉姆达RBD单体蛋白相比，其在体内的半衰期更长...
- 孙一晟骆圆圆周展赵文彬
