王景文
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：江苏大学附属人民医院更多>>
- 发文基金：镇江市科技支撑计划(社会发展)项目江苏省卫生科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人胶质瘤U251细胞定向诱导分化为脂肪细胞
- 2016年
- 目的:探讨人胶质瘤U251细胞的干细胞特性及定向诱导分化为脂肪细胞的潜能。方法:采用免疫荧光染色检测U251细胞中干细胞标志物巢蛋白,人类婆罗双树样基因4(sal-like 4,SALL4),神经细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM),胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达。采用成脂培养基诱导U251细胞,以CCK-8实验描记细胞生长曲线;油红-O染色及免疫印迹法检测脂肪细胞标志蛋白的表达。结果:胶质瘤细胞U251中巢蛋白,SALL4,NCAM,GFAP呈阳性表达;成脂诱导培养基定向诱导后,U-251细胞内大量橙红色脂滴形成;脂肪酸合酶、过氧化物酶体增殖物受体γ(PPARγ)、CCAAT增强子蛋白-β(CEBP-β)、脂联素表达增高。结论:人胶质瘤U251细胞具备干细胞表型,可定向诱导分化为脂肪细胞。
- 王景文杨勇张志坚陈波苏春香胡昌龙蔡慧敏李巧玉
- 关键词：胶质瘤细胞干细胞特性脂肪细胞诱导分化
- miR-136对胶质瘤U251细胞生物学功能的影响被引量：2
- 2018年
- 目的:初步探讨miR-136对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:选取胶质瘤U251细胞系,分别转染miR-136 mimic(模拟物组)和miR-136模拟物阴性对照(对照组),采用qRT-PCR法检测转染效率,观察2组细胞miR-136表达差异;显微镜下观察转染24 h后细胞密度,并拍照记录;CCK-8法检测转染后细胞增殖活性;Transwell和划痕实验分别检测转染后细胞侵袭及迁移能力;检索miRnada生物信息学数据库,预测并分析miR-136下游靶基因;qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中FZD4 mRNA和FZD4蛋白的表达。结果:与对照组相比,模拟物组细胞miR-136表达水平明显升高(P<0.05);转染24 h之后,模拟物组细胞密度低于对照组;CCK-8检测显示模拟物组细胞增殖活性较对照组明显降低(P<0.05);Transwell和划痕实验显示模拟物组细胞侵袭和迁移能力较对照组降低;miRnada数据库分析显示FZD4是miR-136的下游靶基因;与对照组相比,模拟物组FZD4 mRNA和FZD4蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05)。结论:miR-136可能通过靶向调控FZD4基因的表达抑制胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和转移。
- 钱尧邵根宝于强陈波王景文李鲁博周洲王品昊李巧玉
- 关键词：U251细胞增殖迁移
- LRIG1、EGFR、E-Cadherin及N-Cadherin在胶质瘤中表达及其临床意义被引量：9
- 2016年
- 目的研究富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)、表皮生长因子受体(EGFR)、ECadherin及N-Cadherin在不同病理级别胶质瘤中表达差异,探讨LRIG1在胶质瘤恶性进展中可能的作用机制。方法收集74例胶质瘤患者手术标本,包含12对原发及复发配对胶质瘤标本,采用qRT-PCR检测LRIG1、EGFR、E-Cadherin、N-Cadherin基因的表达,并采用免疫印迹检测LRIG1、EGFR、E-Cadherin、NCadherin、Vimentin蛋白表达情况。结果随着胶质瘤病理级别的升高,LRIG1、E-Cadherin基因及蛋白表达水平降低,EGFR、N-Cadherin基因及蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。WHOⅢ-Ⅳ组胶质瘤EGFR/LRIG1及N-Cadherin/E-Cadherin比值显著高于WHOⅠ-Ⅱ组(均P<0.05)。EGFR/LRIG1与NCadherin/E-Cadherin变化之间存在正相关(r=0.56,P<0.05)。对原发及复发配对胶质瘤标本的研究结果与上述一致。结论胶质瘤中EGFR/LRIG1表达失衡,可能通过诱导上皮间质转化(EMT)促进胶质瘤细胞的恶性进展。LRIG1可能成为胶质瘤治疗的新靶点。
- 王鹏杨勇王景文胡昌龙袁志诚陆培松湛利平李巧玉
- 关键词：LRIG1表皮生长因子受体上皮间质转化
- Gadd45g基因对垂体瘤AtT-20细胞的增殖、凋亡和自噬的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨生长阻滞及DNA损伤诱导基因45g(Gadd45g)过表达及靶向沉默对垂体瘤AtT-20细胞及小鼠原代星型胶质细胞的增殖、凋亡及自噬等影响。方法构建Gadd45g基因的CDS区序列克隆至真核表达质粒p3XFLAG-Gadd45g及其shRNA真核表达质粒pLKO.1-sh-Gadd45g,将p3XFLAG-Gadd45g转染至小鼠垂体瘤AtT-20细胞中。其shRNA真核表达质粒pLKO.1-purosh-Gadd45g进行慢病毒包装,病毒感染小鼠星形胶质细胞;Western blot检测FLAG-Gadd45g融合蛋白的表达及RT-PCR检测shRNA沉默效率,CCK-8检测细胞增殖活力,Western blot检测其对凋亡蛋白、自噬蛋白的影响。结果 Gadd45g及其特异性shRNA真核表达质粒构建成功。构建的p3XFLAGGadd45g质粒在垂体瘤AtT-20细胞中能够表达;Gadd45g shRNA具有沉默效率。在垂体瘤AtT-20细胞中过表达Gadd45g,可明显抑制细胞增殖,并能诱导Caspase-3表达,降低Beclin 1表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值(P<0.05)。与之相反,在原代培养的星形胶质细胞中,shRNA干扰Gadd45g表达,可促进细胞增殖,并降低Caspase-3表达,而增加Beclin 1表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值(P<0.05)。结论垂体瘤中Gadd45g的表达缺失可能使得垂体瘤AtT-20细胞凋亡受阻及自噬作用增强,从而促进垂体瘤的发生、发展。恢复垂体瘤细胞中Gadd45g的表达及抑制垂体瘤细胞自噬作用有望成为垂体瘤治疗的新方法。
- 胡昌龙杨勇陈波王景文张锋胡维葛璐龚爱华王安利李巧玉
- 关键词：垂体瘤
- LRIG1体外对U251细胞的放疗增敏作用被引量：1
- 2015年
- 目的研究亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)体外对U251细胞的放疗增敏作用及其机制。方法将pLenti-TO-LRIG1-V5及空质粒pLenti-TO-V5采用慢病毒法感染U251细胞,筛选出稳定感染细胞株后给予2Gy辐照。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测U251细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,γ-H2AX免疫荧光法检测双链DNA损伤情况,Western blot检测相关蛋白的表达。结果U251-LRIG1组细胞接受辐照后较U251-Vector组细胞增殖、侵袭、克隆形成能力降低,细胞凋亡增加,γ-H2AX荧光染色焦点数增多(P<0.05)。U251细胞感染LRIG1慢病毒后,EGFR、N-Cadherin、Vimentin、DNA-PKcs、Beclin-1和LC3II/I表达水平下降,E-Cadherin表达水平增高(P<0.05)。结论在U251细胞中过表达LRIG1可以通过下调EGFR逆转上皮间充质转化,抑制DNA-PKcs及细胞自噬等多种途径抑制U251细胞的恶性生物学行为,增加放疗敏感性。
- 杨勇王景文胡昌龙王鹏袁志诚陆培松湛利平李巧玉
- 关键词：放疗敏感性
