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吕俊: 作品数：10 被引量：8H指数：2; 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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氯沙坦对血管紧张素Ⅱ损伤RIN-m细胞胰岛素分泌功能的保护及机制探讨被引量：2: 2010年; 目的观察氯沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)损伤β细胞(RIN-m)功能的保护,并对其机制进行探讨。方法常规培养RIN-m细胞,分为空白对照组、100nmol/LAngⅡ组和氯沙坦预处理组,各组干预24h后使用放射免疫法检测基础(3.3mmol/L)和葡萄糖(16.7mmol/L)刺激下RIN-m细胞胰岛素分泌量;DCFH-DA染色流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;RT-PCR和Western blotting分别检测RIN-m细胞解偶联蛋白2(UCP2)mRNA和蛋白的表达。结果①各组基础胰岛分泌没有显著差异(P>0.05),在高糖刺激下,100nmol/LAngⅡ组胰岛素分泌量明显低于空白对照组(P<0.001),氯沙坦预处理组胰岛素分泌量与空白对照组无显著差异(P>0.05),但较AngⅡ组明显增加(P<0.001);②100nmol/LAngⅡ组细胞内ROS水平、UCP2mRNA和蛋白表达均较空白对照组明显增加(P<0.001),氯沙坦预处理组与空白对照组无显著差异(P>0.05),但较100nmol/LAngⅡ组显著降低(P<0.001)。结论AngⅡ损伤β细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)功能,氯沙坦预处理可以拮抗AngⅡ的作用,减少β细胞内ROS水平,下调UCP2表达,最终对β细胞起到保护作用。; 鲁辛吕俊张桦陈宏蔡德鸿; 关键词：1型受体 Β细胞胰岛素分泌解偶联蛋白2

VEGF165-PE38重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达: 2009年; 目的构建血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物（PE38）基因的真核融合表达载体，研究其在HEK293细胞中的表达情况。方法通过PCR获得实验需要的VEGF165基因片段，通过酶切pRB391质粒获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38基因，再通过适当的酶切及连接反应，构建VEGF165与PE38融合基因的真核表达载体pIRES2-VEGF165-PE38-EGFP，重组质粒经限制性内切酶及DNA序列测定证实构建成功后，用Lipofectamine2000脂质体转染HEK293细胞，然后用RT—PCR及ELISA法检测VEGF165-PE38融合蛋白在HEK293细胞的表达。结果酶切分析及DNA序列测定证实，VEGF165-PE38融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pIRES2-EGFP，RT—PCR及ELISA法检测证实重组基因可在HEK293细胞表达。结论VEGF165-PE38融合基因可在HEK293细胞中表达，为进-步研究其对肿瘤血管内皮细胞的靶向毒性及临床应用奠定基础。; 胡昌辰柯以铨王斌全周丽媛吕俊张发兵卢建侃蔡颖谦秦玲莎; 关键词：PE38 免疫毒素 HEK293细胞真核表达

Neurocan基因蛋白表达及其抗体制备与检测的实验研究被引量：1: 2009年; 目的制备Neurocan蛋白，用此蛋白免疫动物制备抗血清，并对抗血清进行检测，最终使待参与DNA疫苗构成的Neurocan蛋白所产生的抗体能与脑内创伤区的相应抑制性蛋白抗原结合，从而减轻抑制因子对神经生长的抑制作用，促进神经再生。方法合成Neurocan基因，构建原核表达质粒PET30a-Neurocan，转化大肠杆菌BL21，异丙基-β—D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达目的蛋白，并经SDS—PAGE、Western blot鉴定。Neurocan蛋白免疫兔制备免疫血清。ELISA法检测抗血清效价，以兔免疫前血清为阴性对照：Western blot检测抗血清特异性，以免疫血清为-抗，山羊抗兔-AP为二抗，NBT／BCIP显色。结果合成的Areurocart基因经酶切鉴定、PCR鉴定及测序鉴定，显示序列正确。原核表达Neurocan蛋白经过SDS-PAGE鉴定，条带大小约为55000，与计算出来的大小一致；经Westem blot鉴定，目的蛋白能与his抗体特异性结合，说明是Neurocan基因的表达产物。抗血清经ELISA法检测，抗血清效价达到1：100万；经Western blot检测，目的条带明显。结论Neurocan蛋白原核表达成功；通过Neurocan蛋白免疫兔可得到特异性抗体，此抗体能与Neurocan蛋白特异性结合，为DNA疫苗的进一步研制奠定了基础。; 杜谋选姜晓丹徐如祥陈镇洲吕俊; 关键词：原核表达抗血清

LINGO-1多克隆抗体对大鼠脊髓损伤模型干预的可行性分析被引量：2: 2009年; 目的探讨脊髓损伤（SCI）处局部给予LINGO-1多克隆抗体治疗的可行性。方法24只成年雌性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组、半横断对照IgG组及半横断LINGO-1多克隆抗体组，每组8只。假手术组仅行椎板切除术，另外两组均行T9脊髓半横断术，半横断LINGO-1多克隆抗体组大鼠半横断损伤后立刻通过微量渗透泵局部给予损伤处LINGO-1多克隆抗体，而半横断对照IgG组仅给予兔源性对照IgG。术后3d和28d取各组T8-10节段脊髓制作冰冻切片，应用免疫荧光染色方法观察分析LINGO-1多克隆抗体是否进入脊髓组织并与LINGO-1分子特异性结合。结果半横断LINGO-1多克隆抗体组大鼠SCI术后3d和28d均可检测出兔源性抗体；术后3d，半横断对照IgG组切片LINGO-1染色强度（1．704±0．174）明显强于半横断LINGO-1多克隆抗体组（0．568±0．052），LINGO-1多克隆抗体预处理后的半横断对照IgG组切片LINGO-1染色强度（0．329±0．055）明显弱于半横断对照IgG组（1．704±0．174）切片，比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论局部给予的LINGO-1多克隆抗体在较宽的时间窗里均可进入SCI区并特异性识别LINGO-1分子．证明被动免疫治疗SCI是可行的。; 吕俊徐如祥法志强姜晓丹鲁辛柯以铨蔡颖谦杜谋选邹雨汐秦玲莎; 关键词：中枢神经系统脊髓损伤

LINGO-1多克隆抗体的制备及其被动免疫治疗大鼠急性脊髓损伤的实验研究: 研究背景脊髓损伤/(spinal cord injury, SCI/)后神经组织自我修复功能极其有限,其最主要的原因是由于崩解的脊髓组织释放出大量的轴突生长抑制因子,形成不利于轴突再生的微环境。目前研究表明,...; 吕俊; 关键词：LINGO-1 原核表达多克隆抗体脊髓损伤被动免疫治疗轴突再生; 文献传递

人LINGO-1_(aa76-319)蛋白的原核表达及多克隆抗体制备: 2009年; 目的表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的人LINGO-1胞外段(hLINGO-1aa76-319)融合蛋白,并制备兔源性抗hLINGO-1aa76-319的多克隆抗体(pAb)。方法利用PCR从pCMV-SPORT6获得hLINGO-1aa76-319编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pET30a(+),构建重组表达质粒pET30a(+)-hLINGO-1aa76-319;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His-hLINGO-1aa76-319融合蛋白,经Ni-NTA螯合树脂纯化,纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗血清,Protein A Sepharose柱纯化获得多抗,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性。结果成功构建了pET30a(+)-hLINGO-1aa76-319原核表达载体,原核蛋白hLINGO-1aa76-319以包涵体形式在大肠杆菌高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的hLINGO-1aa76-319蛋白,蛋白浓度为4600mg/L,制备的抗hLINGO-1aa76-319多抗效价高达1:1.6×106,Western blotting鉴定其具有良好的特异性。结论获得高纯度hLINGO-1aa76-319蛋白并成功制备特异性pAb,为进一步研究LINGO-1的生物学功能提供实验基础。; 吕俊鲁辛徐如祥姜晓丹胡昌辰蔡颖谦杜谋选邹雨汐秦玲莎; 关键词：原核表达多克隆抗体中枢神经系统

血管紧张素Ⅱ对RIN-m细胞增殖和凋亡的影响及氯沙坦的保护作用: 2010年; 目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对β细胞(RIN-m)增殖和凋亡的影响及氯沙坦的保护作用。方法常规培养RIN-m细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度AngⅡ(0、0.1、1、10、100 nmol/L)在24、36、48 h对RIN-m细胞增殖的影响;随后分为空白对照组、100 nmol/L AngⅡ组和氯沙坦预处理组,各组干预48 h后,MTT比色法检测细胞增殖活性,透射电镜观察细胞的形态学改变以及AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果(1)AngⅡ浓度及时间依赖性显著抑制RIN-m细胞增殖(P<0.001),以100 nmol/LAngⅡ作用48 h最为明显;(2)各组干预48 h后,100 nmol/L AngⅡ组RIN-m细胞增殖明显低于空白对照组(P<0.001),氯沙坦预处理组细胞增殖与空白对照组差异无统计学意义,明显高于100 nmol/L AngⅡ组(P<0.001);(3)透射电镜观察RIN-m细胞,空白对照组和氯沙坦预处理组细胞形态大致正常,100 nmol/L AngⅡ组细胞发生典型凋亡样改变;(4)100 nmol/L AngⅡ组RIN-m细胞凋亡率高于空白对照组(P<0.001),氯沙坦预处理组凋亡率与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05),明显低于100 nmol/L AngⅡ组(P<0.001)。结论AngⅡ抑制β细胞增殖,诱导β细胞凋亡,氯沙坦预处理可以拮抗AngⅡ的效应,对β细胞起到保护作用。; 鲁辛吕俊张桦陈宏谢芳英蔡德鸿; 关键词：增殖凋亡 Β细胞氯沙坦

一种促进中枢系统神经再生及功能恢复的DNA疫苗: 本发明提供了一种促进中枢系统神经再生及功能恢复的DNA疫苗，该疫苗由抗原基因和真核表达载体构成；所述的抗原基因是由编码LINGO-1的LRR结构域的基因片段、编码TN-R的EGFL结构域的基因片段以及编码neurocan...; 徐如祥吕俊姜晓丹柯以铨张世忠段传志王清华; 文献传递

人Tenascin-R_(aa454-1069)蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1: 2009年; 目的表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的人Tenascin-R EGFL结构域(Tenascin-Raa454-1069)的融合蛋白,并制备相应的兔源性多克隆抗体(pAb)。方法利用PCR从PMD18-T-TNR获得Tena-scin-Raa454-1069编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pET30a(+),构建重组表达质粒pET30a(+)-Tenascin-Raa454-1069;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His-Tenascin-Raa454-1069融合蛋白,经Ni-NTA螯合树脂纯化,纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗血清,Protein A Sepharose柱纯化获得多抗,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性。结果成功构建了pET30a(+)-Tenascin-Raa454-1069原核表达载体,原核蛋白Tenascin-Raa454-1069以包涵体形式在大肠杆菌高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的融合蛋白,蛋白浓度为1 600 mg/L,制备的抗Tenascin-Raa454-1069多抗效价高达1∶1.6×106,Western blot鉴定其具有良好的特异性。结论获得高纯度Tenascin-Raa454-1069蛋白并成功制备特异性pAb,为进一步研究Tenascin-R的生物学功能提供实验基础。; 吕俊徐如祥姜晓丹胡昌辰柯以铨蔡颖谦杜谋选邹雨汐秦玲莎; 关键词：原核表达多克隆抗体中枢神经系统

血管紧张素Ⅱ对RIN—m细胞胰岛素分泌功能的影响及机制探讨被引量：2: 2010年; 目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对RIN-mβ细胞胰岛素分泌的影响，探讨AngⅡ损伤β细胞功能的机制。方法RIN—m细胞以不同浓度AngⅡ（0．1、1、10、100nmol／L）干预24h后，用放射免疫法检测各组基础（3．3mmol／L）和葡萄糖（16．7mmol／L）刺激下RIN—m细胞胰岛素分泌量；RT—PCR和Western印迹分别检测解耦联蛋白2（UCP2）mRNA及蛋白的表达水平；荧光素酶生物发光法检测细胞内ATP含量；流式细胞仪检测线粒体膜电位和细胞内Ca^2＋浓度。结果（1）在低糖刺激下，各AngⅡ处理组RIN-m细胞胰岛素分泌差异无统计学意义（F=0．644，P=0．634）；在高糖刺激下，除0．1nmol／L AngⅡ组外，其余各组胰岛素分泌均显著低于空白对照组（F=118．528，P=0．000）。（2）与空白对照组相比较，各AngⅡ处理组的UCP2 mRNA和蛋白表达显著增加（F=1370，P=0．000；F=675．175，P=0．000）。（3）与空白对照组相比较，除0．1nmoL／L AngⅡ组外，其余各组的RIN—m细胞线粒体膜电位、细胞内ATP含量和Ca^2＋浓度显著减少（F=4．035，P=0．008；F=3．353，P=0．013；F=5．867，P=0．001）。结论AngⅡ损伤胰岛β细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）功能，其机制可能是AngⅡ上调β细胞UCP2表达，进而降低线粒体膜电位、减少细胞内ATP含量及Ca^2＋浓度，最终损伤β细胞胰岛素分泌功能。; 鲁辛张桦吕俊陈宏蔡德鸿; 关键词：Β细胞解耦联蛋白2 线粒体胰岛素分泌

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