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35-37 kDa形式可溶性MHC I释放机制研究被引量：1: 2015年; 目的:探讨35-37 k Da形式的可溶性MHC I释放机制,为开展造血系统恶性肿瘤免疫干预治疗研究奠定理论基础。方法:以细胞表面标记、免疫沉淀、免疫印迹和增强化学发光法探讨EGTA和蔗糖对THP1细胞释放43和35-37 k Da可溶性MHC I的影响;以超速离心法纯化外排小体,并用免疫沉淀、免疫印迹和增强化学发光法检测43和35-37 k Da可溶性MHC I;用Quantity One软件对43和35-37 k Da可溶性MHC I进行相对定量分析。结果:EGTA同时显著抑制43和35-37 k Da可溶性MHC I产生;蔗糖同时显著促进43和35-37 k Da可溶性MHC I产生;43 k Da可溶性MHC I存在于外排小体上,而35-37 k Da可溶性MHC I在外排小体上检测不到。结论:35-37 k Da可溶性MHC I与外排小体都来源于细胞内多泡小体同质膜的溶合后释放,但35-37 k Da可溶性MHC I并不包含在外排小体的泡囊中,而是独立于外排小体释放。; 赵锦荣白海燕郭晏海刘永兰颜真; 关键词：金属蛋白酶

大学专业课中的科学精神教育被引量：2: 2013年; 科学精神是创新型人才必备的素质,培养大学生科学精神是素质教育的重要内容。大学专业课是学习科学知识和培养科学精神的主要领域,要充分发挥其培养和塑造大学生科学精神的作用,首先应树立培养大学生科学精神的教学理念;在课堂教学中融入科学精神的培养;通过深入科研实践体会科学精神的社会需求;通过亲身参与科研活动提高学生塑造科学精神的主动性,使科学精神融入学生的思想意识和行动中。; 郭晏海向安雷小英刘永兰李萌; 关键词：高等教育专业课教学素质教育

稳定表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原CTLA-4的293T细胞株的建立被引量：1: 2014年; 目的：构建稳定表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（cytotoxicTlymphocyteantigen-4，CTLA-4）的293T细胞株。方法首先从人外周血获取PBMC加以T细胞活化；PCR扩增CTLA-4转录本，连接pUCm-T质粒引入HindⅢ和EcoRⅠ双酶切位点后转入真核细胞表达质粒pcDNA3．1；重组质粒pcDNA3．1-CTLA-4经脂质体转染293T细胞，以抗生素G418筛选表达CTLA-4的293T细胞；定量PCR、免疫荧光分别检测293T细胞CTLA-4表达与细胞定位。结果血样来源T细胞经活化后表达CTLA-4转录本。HindⅢ和EcoRⅠ双酶切证实重组质粒内CTLA-4插入序列正确；RT-PCR及免疫荧光检测证实293T细胞能够稳定表达目的蛋白CTLA-4，并定位于细胞膜表面。结论成功构建的pcDNA3．1-CTLA-4重组真核表达载体，在293T细胞膜表面实现了稳定表达，为进行相关生物学理论与应用研究打下基础。; 茹晓荣刘永兰向安; 关键词：293T细胞基因克隆真核表达

乙肝治疗耐药基因突变的焦磷酸测序技术诊断被引量：3: 2011年; 目的:建立焦磷酸测序技术检测拉米夫定和阿德福韦酯治疗乙肝所致乙肝病毒基因耐药突变的定量检测方法,为临床乙肝耐药诊断和治疗提供依据。方法:针对乙肝病毒DNA聚合酶基因序列上4个常见基因突变位点的6种突变形式,分别克隆构建野生型和突变型质粒作为标准品,应用生物信息学手段设计目标基因通用PCR引物和各突变点的焦磷酸测序引物,建立焦磷酸测序的突变检测方法。对接受拉米夫定、阿德福韦酯治疗的慢性乙型肝炎患者血清标本进行检测。结果:构建了乙肝病毒四种常见耐药性突变的标准株和变异株克隆,建立了分别或同时检测拉米夫定、阿德福韦酯耐药突变的焦磷酸测序方法,对68例临床耐药或疑似耐药的患者血清标本进行检测,双脱氧测序验证,检出拉米夫定耐药突变32例,阿德福韦酯耐药突变5例,其中焦磷酸测序检出20例为混合突变,而双脱氧测序显示为6例。结论:成功建立了焦磷酸测序定量检测拉米夫定、阿德福韦酯耐药基因突变的方法,构建了乙肝病毒耐药基因突变的标准质粒,为临床动态监测乙肝病毒变异病毒株、指导合理用药奠定了基础。; 汪钦郭晏海李勇年刘永兰包晗赵锦荣梁平雷小英张菊颜真; 关键词：乙肝耐药基因焦磷酸测序阿德福韦酯

PIK3CA基因突变的MassARRAY分子量阵列分析: 2011年; 目的:利用MassARRAY分子量阵列分析系统检测胃癌组织PIK3CA基因突变。方法:从胃癌石蜡包埋组织中提取基因组,PCR反应扩增目的基因片段,MassARRAY分子量阵列分析系统检测PIK3CA基因突变;焦磷酸测序验证检测结果。结果:中国西部地区144例胃癌组织样本中PIK3CA_E542K(1624G>A)突变携带率为77.6%,PIK3CA_E545K(1633G>A)突变携带率为84%。MassARRAY分子量阵列分析系统检测结果与焦磷酸测序结果达到100%吻合。结论:建立了MassARRAY分子量阵列分析系统检测基因突变的方法,初步建立了中国西北地区汉族人群胃癌组织PIK3CA基因PIK3CA_E542K(1624G>A)和PIK3CA_E545K(1633G>A)位点突变频数。; 梁平赵锦荣惠延平孙建斌王伟汪钦包晗刘永兰金天博郭晏海张菊颜真; 关键词：胃癌基因基因分型基因突变

NDRG2基因启动子甲基化与肺腺癌细胞中mRNA表达相关性的实验研究被引量：2: 2010年; 目的:探讨肺腺癌细胞中NDRG2基因启动子甲基化状态及其与基因表达的关系。方法:甲基化焦磷酸测序技术检测启动子区域甲基化状态,荧光定量PCR技术检测不同药物浓度下培养细胞中NDRG2基因mRNA的表达水平,分析启动子区域甲基化与基因表达之间的关系。结果:在体外培养细胞中检测到NDRG2基因启动子区域呈现不同程度的甲基化,甲基化频率分别为肺癌A549细胞71.8%、GLC-82细胞86.1%、人脐静脉内皮ECV-304细胞36.8%、胃上皮GES-1细胞42.9%。NDRG2基因mRNA表达与其启动子甲基化程度成反比,甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作用于细胞后,A549和GLC-82细胞中NDRG2基因的mRNA转录明显上调,至72 h差异显著(P<0.05)。结论:肺腺癌细胞中NDRG2基因启动子CpG岛存在高甲基化,甲基化程度与该基因的表达具有负相关性,5-Aza-CdR能在一定程度上提高NDRG2的转录水平。; 李慎梁平刘永兰黄启超汪钦包晗赵锦荣雷小英郭晏海颜真; 关键词：NDRG2基因启动子甲基化焦磷酸测序 5-杂氮-2-脱氧胞苷

本科生基因工程教学改革初探被引量：5: 2012年; 基因工程是高等教育中生物技术专业的主干课程,其突出特点是技术性强。为了使学生易于理解和掌握该门课程,并具有较强的科研交流能力,在早期教学实践的基础上进行了部分教学改革,通过调整理论课和实验课设置,增设基础综合实验及双语教学,突出案例和基于问题的教学等,提高了教学效果。; 雷小英向安刘永兰汪钦梁平赵锦荣郭晏海张菊颜真; 关键词：基因工程教学改革教学方法

一种简易SNP检测方法的建立被引量：2: 2011年; 目的:建立一种快速、简单的SNP(Single Nucleotide Polymorphisms)检测方法。方法:设计带生物素标记的扩增引物对检测用具有单碱基差异的野生型和突变型靶序列分别进行扩增,然后通过紫外交联的方式将相应检测靶序列的探针固定在硝酸纤维素膜上,借助Taq酶完成膜上单引物延伸,从而对探针捕获的靶序列进行延伸固定在膜上,最后使用生物素-亲和素酶联显色(ABS-ELISA)反应肉眼观察结果。结果:阳性和阴性对照探针显示正常。野生型探针和突变型探针能够分别特异性结合靶序列,并通过生物素和亲和素显色系统放大为一种肉眼可判断结果的检测形式。结论:建立了一种基于硝酸纤维素膜载体上进行核酸扩增的SNP检测方法。; 包晗赵锦荣汪钦郭晏海刘永兰雷小英梁平孙建斌颜真; 关键词：硝酸纤维素膜核酸扩增 SNP 生物素

纳米磁性颗粒标记的免疫层析法定量检测人绒毛膜促性腺激素被引量：7: 2011年; 目的:应用纳米磁性颗粒标记的免疫层析法研制用于早孕检测的快速定量层析试纸条。方法:应用EDC/NHS法标记纳米磁珠、Biodot喷膜仪喷点NC膜、双抗体加心法建立免疫层析试纸条、对磁信号进行检测并与ELISA实验做对比,并对结果进行评价。结果:建立了HCG纳米磁性免疫层析试纸条,检测到底线为1miu/ml的HCG抗原,检测灵敏度达到了同类产品ELISA分析法的标准;用此方法与商品化免疫胶体金试纸条对临床样本进行检测,检测符合率达99%,与ELISA法比较符合率达100%,且检测时间控制在5min以内。结论:该方法简单快速,灵敏度高,不仅可以应用于HCG的检测,同时为体内极微量抗原抗体的快速检测建立了新模式。; 孙建斌雷小英包晗汪钦刘永兰郭晏海颜真杨静华; 关键词：磁性纳米颗粒免疫层析 HCG

肿瘤血管导向性干扰素IFN-α2a-NGR与5-氟尿嘧啶联合应用对A549细胞增殖的影响被引量：1: 2011年; 目的:观察重组蛋白肿瘤血管导向性干扰素IFN-α2a-NGR与化疗药物5-氟尿嘧啶联合使用在体外对人非小细胞肺癌细胞株A549的作用,为IFN-α2a-NGR的临床实验设计提供实验依据。方法:不同浓度的肿瘤血管导向性干扰素IFN-α2a-NGR、5-氟尿嘧啶单独及联合作用于细胞株A549,通过MTT法检测单药及联合用药对细胞增殖的影响,经AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡检测试剂盒染色、流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜观察药物作用的细胞形态。结果:IFN-α2a-NGR与5-氟尿嘧啶联合作用于A549细胞株时,其细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均较单独作用时高,具有统计学显著性差异(P<0.05);荧光显微镜观察可见药物作用后细胞形态改变。结论:肿瘤血管导向性干扰素IFN-α2a-NGR与5-氟尿嘧啶联合使用具有协同抑制肿瘤细胞增殖的作用。; 隋文君刘永兰雷小英黄启超郭晏海王伟张英起颜真; 关键词：干扰素 5-氟尿嘧啶细胞增殖

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刘永兰

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