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一种培养NK细胞的方法及应用: 本发明公开了一种培养NK细胞的方法及应用。本申请通过将hPSCs在3D培养装置中旋转培养自发形成EB，然后使用混合纤维素酯（MCE）进一步向NK细胞诱导分化，可收获高比例和更多的NK细胞。本申请的方法不依赖于96孔板、特...; 余佳马艳妮周涯张勇刚

P21基因参与早期诱导RUNX1b过表达抑制人类造血发生: 2019年; 目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1[CDKN1A(P21)]对造血发生过程的影响。方法对RUNX1b诱导过表达hES细胞系(RUNX1b/hESC)与小鼠主动脉-性腺-中肾区(AGM)基质细胞AGM-S3共培养4 d细胞,使用多西环素(DOX)(1μg/mL)与RepSox(0.33μmol/L)或不同浓度DOX(1、0.5、0.2、0.1μg/mL)诱导RUNX1b过表达时,以qRT-PCR技术检测P21与RUNX1b相对表达情况。利用基于转座子载体PiggyBac的PB-tet-on-OE真核诱导过表达系统,建立P21诱导过表达hES细胞系(CDKN1A/hESC)。分别在CDKN1A/hESC与AGM-S3共培养d0、d2、d4、d6添加DOX诱导P21过表达,培养8 d或14 d,通过流式细胞术(FACS)检测血细胞表面分子的变化情况,以判断诱导P21过表达对造血发生产生的影响。结果 qRT-PCR显示:P21表达量随着RUNX1b过表达上调,同时加入RepSox时表达基本处在正常水平,随着DOX浓度降低,RUNX1b与P21表达水平下降。在造血分化的早期,特别是共培养d0开始诱导P21过表达的共培养体系所产生的CD34^-CD43^+、CD34^-CD45^+与CD34^+CD45^+细胞群相较于对照分别降低了85%,94%和78%,当共培养d6后诱导P21过表达上述现象消失。结论 P21可能参与了由RUNX1b诱导过表达所引起的人类早期造血发生的抑制效应;早期诱导P21过表达明显抑制造血细胞产生。; 常晶滕嘉雯孙文翠曾加辉张勇刚潘旭周涯赖默温边国慧周琼秀刘嘉馨陈波马峰

人诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞促进成体造血发生研究被引量：1: 2019年; 目的探讨人诱导性多能干细胞(hiPSCs)在神经分化因子作用下生成的间充质干细胞(N-MSCs)对成体造血的影响。方法 1)与神经发育相关的MSCs的获得:hiPSCs在向前脑类器官培养过程中分离纯化出1个性质稳定的细胞系,命名为N-MSCs,通过形态学观察、流式检测和脂肪、成骨、软骨细胞分化实验对其进行鉴定。2)N-MSCs对成体造血的影响:人胚胎干细胞(hESCs)与鼠AGM-S3细胞共培养获得的CD34^+细胞分别与AGM-S3、N-MSCs(2×10~4个)共培养,单独悬浮培养为对照组(CD34^+组,1×10~4个),流式检测关于造血干/祖细胞(CD34^+CD45^+)和巨噬细胞(Mφ)表面标记的变化。3)N-MSCs对人脐带血来源的巨噬细胞(CB-Mφ)的影响:Mφ分别与脐带MSCs(UC-MSCs)、N-MSCs(2.5×10~5个)在transwell中共培养,Mφ单独培养为对照组(5×10~5个),再用IL-4对Mφ做刺激试验。用MGG染色、流式检测、qRT-PCR等方法分析Mφ形态学、M2型Mφ相关表面标记CD206和IL-10基因表达情况。结果 CD34^+组及其分别与AGM-S3、N-MSCs 2个共培养组培养10 d时收获的CD34^+CD45^+细胞数量(×10~3个)分别为:0.44±0.045 vs 0.63±0.170 vs 2.93±0.190(P<0.01);Mφ数量(×10~4个)分别为1.70±0.046 vs 1.49±0.057 vs 2.46±0.086(P<0.05)。Mφ与UC-MSCs共培养组及与N-MSCs共培养组CB-Mφ的CD206占比(%)为56.1±1.15 vs 60.0±1.76(P<0.05)、IL-10的相对表达量为6.8±0.748 vs 8.10±0.804(P<0.01)。结论 N-MSCs能促进成体造血和CB-Mφ向M2型Mφ的转变。; 张秀秀王蓓蕊陈谊金薛原周涯边国慧赖默温周琼秀张勇刚马峰; 关键词：间充质干细胞人脐带血

人胚胎干细胞高效诱导产生巨噬细胞方法的建立被引量：5: 2015年; 目的利用人胚胎干细胞(h ESCs)建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,并与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较。方法通过将h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)来源的基质细胞共培养产生CD34+CD45+造血干祖细胞,在多种细胞因子的诱导下悬浮培养14 d,利用May-Grünwald Giemsa染色、流式表面抗原及功能检测等方法对我们培养的巨噬细胞和人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较鉴定。结果该方法可产生大量高纯度的巨噬细胞,成功的建立了体外高效诱导的巨噬细胞分化体系,并且该体系获得的巨噬细胞与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞具有相似的表型和功能。结论建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,为进一步研究人类巨噬细胞的早期发育和建立相关疾病模型提供了可靠的方法。; 郁金凤孙文翠路旭琳边国慧潘旭毛斌黄淑赖默温周涯邹庆李晴曾宪波李玉佳陈利民周家喜马峰; 关键词：巨噬细胞诱导分化

拟胚体培养体系中造血表面标志的变化及其向红细胞分化潜能的研究被引量：1: 2015年; 目的探讨拟胚体(EB)造血相关表面标志物的变化及其向红细胞定向诱导分化的潜能。方法利用悬浮培养体系使人胚胎干细胞(h ESCs)形成三维囊状结构(EB),通过添加细胞因子BMP-4、SCF和FL使EB向造血前体细胞分化,通过流式细胞术(FACs)检测细胞发育各个阶段内皮及血细胞表面分子的变化情况以判断细胞的不同发育阶段。采用胰酶消化处理的方式将EB消化为单个细胞并向红细胞诱导分化,在诱导的d7、d14、d21取样,流式检测分析红细胞的成熟程度。结果在EB培养体系中,d6即可检测到造血前体细胞表面标志物CD34和CD31,且在EB培养的d6-d21,CD34+CD31+细胞的比例逐渐升高,到d15达到顶峰(8.86%)。在红细胞定向分化过程中,红细胞的纯度达73.22%,免疫荧光染色显示:ε亚基的阳性率为88%(424/482),γ亚基的阳性率为94%(326/347),而β亚基的阳性率为0%(0/167)。结论建立了1种EB悬浮培养体系和体外诱导红细胞的方法;EB的造血相关表面标志物的表达呈现时序性变化,且由EB分化而来的红细胞具有早期胚胎红细胞的发育特点。; 路旭琳郁金凤孙文翠毛斌邹庆潘旭赖默温周涯李晴曾宪波黄淑周琼秀周家喜马峰; 关键词：红细胞

基于一种多孔材料的诱导NK细胞的方法: 本发明公开了基于一种多孔材料的诱导NK细胞的方法。本发明提供的诱导NK细胞的方法，基于含网筛培养槽及多孔明胶海绵的装置及培养基，高效诱导iPSCs‑NK，解决当前iPSC‑NK的分化培养技术依赖动物来源的饲养层细胞，分化...; 张勇刚余佳唐诗丽马艳妮薛原周涯

丙型肝炎病毒载量与疾病进程相关性分析: 苑宇哲季阳汪学纯杨秀华周涯边国慧李世林

血液制品原料混合血浆中微生物组筛查及病原体鉴定被引量：1: 2012年; 血液和血液制品常作为药物来拯救生命,但除了血液常规筛查的4种病原体HIV、HBV、HCV和梅毒外,在合格血浆里,仍可能有大量的病原体威胁血液安全,并可能通过输血传播疾病。然而,目前我国采供血系统和血液制品生产厂家并没有开展这些未检测病原体的调查。因此,本研究通过随机引物扩增的方法,测序获得血液制品多人份混合原料血浆中的微生物组,并通过GenBank同源性比对鉴定出微生物组中的病原体类型,从而评估我国血液制品原料混合血浆的安全现状。将来自贵州地区的12ml血液制品原料混合血浆(8000人份混合),通过0.45μm和0.22μm的滤膜过滤,然后40000r/min,超速离心90min。; 何苗周涯李武平; 关键词：混合血浆血液制品输血传播疾病血液安全超速离心

人胚胎干细胞向嗜酸性粒细胞高效定向诱导分化模型的建立被引量：1: 2015年; 目的建立从人胚胎干细胞向成熟嗜酸性粒细胞定向诱导分化的高效体外培养模型。方法采用人胚胎干细胞与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)基质细胞共培养的方法,进行早期造血干细胞诱导分化,将诱导分化的造血干细胞进行悬浮培养,在含有血清的培养基中,分阶段添加不同细胞因子组合进行成熟嗜酸性粒细胞的定向分化和增殖。结果获得从CD34+CD45+细胞扩增了约651倍,且纯度高达95%以上,CD88+Siglec-8+EPO+的成熟嗜酸性粒细胞。结论本研究建立了1种人胚胎干细胞高效定向分化为成熟嗜酸性粒细胞的模型,为进一步深入研究嗜酸性粒细胞的早期发育调控和相关疾病的发生机制奠定了基础。; 潘旭杨文钰孙文翠毛斌郁金凤路旭琳黄淑赖默温周涯邹庆李晴曾宪波周家喜马峰; 关键词：人胚胎干细胞嗜酸性粒细胞定向诱导分化

可诱导GATA-1和GATA-2基因过表达hES细胞系的建立及其在人类早期造血发生中的功能探索: 目的:　　人类多能干细胞（包括人胚胎干细胞human embryonic stem cells，hESCs和诱导性多能干细胞human induced pluripotent stem cells，hiPSCs）作为全能...; 周涯; 关键词：造血干细胞

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周涯

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