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马氏珠母贝磺基转移酶PmCHST9基因的分子特征与表达分析被引量：18: 2015年; 糖胺聚糖在抗病毒、消炎和抗氧化等免疫反应发挥重要作用。磺基转移酶(sulfotransferase)是糖胺聚糖生物合成的关键酶,Carbohydrate sulfotransferase 9(CHST9)可以将磺酸基从3'-磷酸腺苷酰-5'磷酸硫酸盐(PAPS)转移到半乳糖残基非还原末端的4位碳上。为研究CHST9在马氏珠母贝免疫调节中的作用,本研究克隆得到马氏珠母贝CHST9(Pinctada martensii CHST9,Pm CHST9)c DNA全长序列并检测其在不同组织中的表达模式。利用RACE技术,得出Pm CHST9序列全长1 388 bp,其中5'UTR为122 bp,3'UTR为192 bp,开放阅读框(ORF)为1 074 bp,编码357个氨基酸;Pm CHST9氨基酸序列分子量为42 889.2 Da,等电点为9.28,脂溶性系数为81.32,总平均亲水性为-0.493;氨基酸序列分析得出Pm CHST9具有典型的磺基转移酶-2结构域和一个跨膜结构域;多序列比对结果显示Pm CHST9与其它物种的CHST9同源性较低;荧光定量PCR检测结果表明Pm CHST9在鳃中表达量最高,其次是足和肝胰腺。综上所述,Pm CHST9可能参与马氏珠母贝的免疫调节作用,为进一步阐述Pm CHST9在马氏珠母贝中的免疫机制提供基础资料。; 郝瑞娟郑哲王庆恒王庆恒焦钰邓岳文; 关键词：马氏珠母贝分子特征

一种罗非鱼腹鳍细胞系的构建方法: 本发明属于细胞生物学技术领域，公开了一种罗非鱼腹鳍细胞系的构建方法，所述罗非鱼腹鳍细胞系的构建方法包括：进行细胞培养基的配置；进行罗非鱼腹鳍细胞块的预处理；进行罗非鱼腹鳍细胞的原代培养；进行罗非鱼腹鳍细胞的传代培养。本发...; 黄瑜简纪常郑哲宋海霞宋长江蔡佳王蓓汤菊芬; 文献传递

马氏珠母贝磺基转移酶基因的克隆及功能被引量：3: 2017年; 硫酸角质素具有丰富的携带大量负电荷的磺酸基团,参与生物矿化的成核过程。磺基转移酶催化磺酸基团的转移,对硫酸角质素的生物合成起决定性作用。本研究利用RACE技术克隆马氏珠母贝磺基转移酶PmCHST1a全长,并通过RNA干扰技术检测PmCHST1a对硫酸角质素合成及贝壳珍珠层形成的影响。结果显示,PmCHST1a基因全长1385 bp,编码366个氨基酸;含有磺基转移酶结构域,具有跨膜结构和信号肽,定位于高尔基体上。组织差异表达分析发现,PmCHST1a在中央膜显著高表达。注射PmCHST1a的RNAi探针后,PmCHST1a在中央膜的表达量显著下调,并且外套膜外液中硫酸角质素的浓度显著降低;SEM检测发现珍珠层结构紊乱。综上所述,PmCHST1a可能通过影响外套膜外液中硫酸角质素的合成,参与珍珠层的形成。本研究为进一步探讨磺基转移酶及其参与合成的糖胺聚糖硫酸角质素在马氏珠母贝生物矿化中的作用提供依据。; 王庆恒郝瑞娟郑哲邓岳文杜晓东; 关键词：马氏珠母贝硫酸角质素 RNAI

海洋酸化对马氏珠母贝珍珠层形成的影响被引量：5: 2015年; 分析了酸化环境对马氏珠母贝珍珠层形成的影响。在温度为28℃,盐度为31的条件下,分别在p H 8.2(对照组,CG)、p H 7.7(实验一组,E1)和p H 7.4(实验二组,E2)的海水中养殖马氏珠母贝,观察贝壳珍珠层结晶形貌的变化,并检测珍珠层形成相关的矿化基因(pif177、nacrein及pearlin)在外套膜中央区(mantle center,MC)的表达。结果表明:(1)通过扫描电镜观察贝壳,比较对照组与实验组贝壳晶体形貌变化,发现E1组贝壳珍珠层低倍镜下,生长阶梯明显,高倍镜下超微结构规则,六边形棱角不明显,但边界清晰;而E2组出现板块边界不明显,生长排列不规则等现象,说明了海水酸化影响了马氏珠母贝的钙沉积,引起珍珠层形貌特征的变化;(2)实验设定条件下,pif177、nacrein及pearlin基因表达量整体上呈现随p H降低而降低的变化趋势。其中,E1组与CG组间均无显著性差异(P>0.05),E2组均较CG组显著下调(P<0.05)。; 董冰冰黄荣莲王庆恒郑哲焦钰邓岳文杜晓东; 关键词：海洋酸化马氏珠母贝珍珠层基因表达矿化

马氏珠母贝外套膜不同区域基因组DNA甲基化MSAP分析被引量：5: 2016年; 通过甲基化敏感多态性扩增(methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP)技术,检测马氏珠母贝(Pinctada martensii)外套膜的边缘膜区(mantle edge,Me)、套膜区(mantle pallial,Mp)和中央膜区(mantle central,Mc)的基因组DNA甲基化修饰水平;回收具特异性的清晰甲基化修饰片段进行测序、比对分析并筛选基因;利用荧光定量PCR对筛选基因进行定量分析。结果显示:(1)利用15对引物进行扩增实验,平均每个个体外套膜3个区域能够产生(1163.25±124.34)条清晰可辨的条带,其中Me、Mp和Mc分别得到(401.00±40.37)条、(380.63±52.39)条和(381.63±53.57)条扩增条带,各组织甲基化总条数差异不显著(P>0.05);Me、Mp和Mc的基因组甲基化水平分别为(17.07±2.19)%、(15.48±2.34)%和(19.61±2.88)%,Mc和Mp具有显著性差异(P<0.05);组织间的基因组甲基化水平由高到低排列依次是Mc>Me>Mp。(2)对特异性片段进行回收、测序后,经在线及本地Blast比对,得到8条存在甲基化修饰的基因序列,其中3条有同源序列,基因注释为40S核糖体蛋白SA(40S ribosomal protein SA)、iHog(interference hedgehog)、锌指蛋白(zinc finger protein castor)。iHog仅在中央膜上具有全甲基化修饰,且E值较低,为筛选的目的基因。(3)荧光定量结果表明iHog在Me、Mp和Mc中均有表达,以Me表达量最高,Mc表达量最低,差异显著(P<0.05)。我们推测iHog的DNA序列的甲基化修饰抑制了该基因在Mc组织中的表达。综上研究结果表明,马氏珠母贝外套膜3个区域的甲基化修饰水平不一,且DNA甲基化在基因表达调控中具有作用,这对深入研究珍珠贝生物矿化和免疫反应机制具有一定的参考意义。; 罗少杰邓岳文郑哲焦钰王庆恒; 关键词：马氏珠母贝外套膜 DNA甲基化

一种与马氏珠母贝生长性状相关的SNP分子标记及其应用: 本发明公开了一种与马氏珠母贝生长性状相关的TubB‑4BSNP分子标记及其应用，属于分子标记辅助育种技术领域；该位点对应于马氏珠母贝微管蛋白TubB‑4B基因位点，此处碱基为G或C。本发明SNP标记与马氏珠母贝生长性状(...; 李俊辉杨创业邓岳文杨晶淼郑哲王庆恒; 文献传递

一种马氏珠母贝育珠贝休养方法: 本发明公开了一种马氏珠母贝育珠贝休养方法，属于水产养殖技术领域；通过将完成植核手术的育珠贝移到休养水池养殖，育珠贝养殖密度为100‑120个/m<Sup>3</Sup>，吊养水深为1.0‑1.2米，保持微波充气，从手术后...; 郑哲王庆恒杨创业廖永山梁飞龙邓岳文焦钰

一种马氏珠母贝生长性状相关的KSPI基因SNP分子标记及其应用: 本发明公开了一种马氏珠母贝生长性状相关的KSPI基因SNP分子标记及应用，属于分子标记辅助育种技术领域；该位点对应于马氏珠母贝Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(Pinctada fucata martensii Kazal...; 杨创业郝瑞娟邓岳文杜晓东郑哲王庆恒; 文献传递

马氏珠母贝Ago2基因克隆与表达分析: 2020年; 为探讨由Argonaute 2(Ago2)介导的LncRNA-miRNA调控系统在贝类生物矿化(Biomineralization)的调控机制,本研究利用RACE技术克隆获得马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)Ago2(PmAgo2)基因cDNA全长序列并检测其表达。结果表明,PmAgo2全长3465 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)2679 bp,编码892个氨基酸残基,5’UTR为113 bp,3’UTR为673 bp;预测其分子量为101.06139 kD,理论等电点为9.48;多序列比对的结果表明,PmAgo2与脊椎动物和其他无脊椎的Ago2具有较高的保守性,与美洲牡蛎(Crassostrea virginica)的相似度高达88%;qRT-PCR结果显示,PmAgo2在马氏珠母贝各个组织均有表达,外套膜边缘膜区的表达量最高。利用脊椎动物Ago2抗体,通过Western blotting检测其在外套膜组织中的表达,发现Ago2蛋白的分子量在100 kD左右,与理论的分子量相一致。本研究结果为后期深入研究由Ago2介导的LncRNA-miRNA非编码RNA调控系统奠定基础。; 谢冰怡熊新威郑哲焦钰邓岳文邓岳文; 关键词：马氏珠母贝基因克隆

马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)Pm-HSP70基因的克隆及其对温度胁迫的响应: 2019年; 本实验利用RACE技术克隆获得了马氏珠母贝HSP70 (Pm-HSP70)基因,并对其基因和氨基酸序列结构特征进行了生物信息学分析,同时采用荧光定量PCR技术分析了该基因在不同组织的表达模式及不同温度下的时序表达模式。序列分析表明,Pm-HSP70 cDNA序列全长为2 215 bp,其中开放式阅读框1 899 bp,5'UTR 107 bp,3'UTR 209 bp,编码632个氨基酸,理论蛋白分子量为69.44 kD,理论等电点为5.61。该蛋白具有HSP70家族典型的结构域HSP70,以及ATP结合位点、细胞质特征性保守序列和3个HSP70家族标签。多序列比对结果表明Pm-HSP70与菲律宾蛤仔HSP70同源性最高,为80%;系统进化分析发现,Pm-HSP70与菲律宾蛤仔等贝类HSP70聚为一支。组织表达定量分析结果显示,Pm-HSP70在马氏珠母贝多个组织中均有表达,在肝胰腺中表达量最高,其次是性腺;对不同温度下鳃组织中Pm-HSP70的时序表达分析发现,在处理后各时间点高温组(32℃)基因表达水平最高,且均显著高于对照组(22℃)和低温组(17℃)。以上结果表明Pm-HSP70可能参与马氏珠母贝的高温胁迫响应。该研究为进一步探索Pm-HSP70在马氏珠母贝温度适应性中的作用提供了基础资料。; 刘雅王庆恒郑哲郑哲李利二焦钰; 关键词：马氏珠母贝温度适应基因克隆

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