李波
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 供职机构：徐州医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- PI3K/AKT/mTOR在华支睾吸虫感染小鼠肝纤维化模型中的表达及意义被引量：5
- 2016年
- 目的探讨脂酰肌3激酶-蛋白激酶B-雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)在华支睾吸虫感染小鼠致肝纤维化作用。方法 6周龄雌性C3H/HeN小鼠随机分为正常对照组和华支睾吸虫感染组,感染组每只小鼠经口灌胃45个华支睾吸虫囊蚴,对照组每只小鼠经口灌入等量的生理盐水,感染28d后取出小鼠肝脏组织,Masson染色,观察病理变化;免疫组织化学染色检测肝脏组织中α-SMA和p-mTOR蛋白的定位与表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠肝脏组织中α-SMA、COL1和TGF-βmRNA表达水平;Western blot法检测小鼠肝脏组织中TGF-β、α-SMA、pPI3K、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平。结果成功建立小鼠肝纤维化模型。与对照组相比,感染组小鼠肝脏的胶原沉积显著增加,α-SMA及p-mTOR阳性细胞数量显著增多(t=-8.374,P<0.01;t=-9.545,P<0.01),α-SMA、COL1、TGF-βmRNA(t=-3.553,P<0.01;t=-3.448,P<0.01;t=-3.052,P<0.01)以及α-SMA、TGF-β、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR的蛋白表达水平显著升高(t=-7.076,P<0.01;t=-5.054,P<0.01;t=-6.941,P<0.01;t=-8.123,P<0.01;t=-7.445,P<0.01)。结论 PI3K/AKT/mTOR在华支睾吸虫感染小鼠肝脏高度表达,因此推测该信号通路在华支睾吸虫感染致肝纤维化中发挥重要作用。
- 李波王海玉沈莉萍方凡程晓丹张蓓蓓张波颜超汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫小鼠肝纤维化
- 华支睾吸虫感染FVB小鼠的试验研究被引量：4
- 2016年
- 为了观察华支睾吸虫感染FVB小鼠肝脏组织病理变化,将12只健康雌性FVB小鼠随机分成2组,分别为正常组与感染组,每组6只。感染组小鼠经口灌饲45个华支睾吸虫囊蚴。于感染后25d用NaOH消化法检测粪便虫卵阳性率,感染后第112天收集肝脏组织,进行HE染色及Masson染色观察肝脏病理变化情况;收集外周血,ELISA检测血清中华支睾吸虫特异性IgG抗体。虫卵检查结果显示,感染组小鼠在感染后25d检查到虫卵,肉眼观察小鼠肝小叶边缘有白色结节样病变,肝脏表面有白色透明水泡。感染组小鼠血清中华支睾吸虫特异性IgG水平显著高于正常组(P<0.01)。HE染色观察小鼠肝脏组织,见到虫体,炎症细胞浸润严重,纤维化明显并伴有点状坏死。肝细胞肿胀,肝窦狭窄,胆管扩张增生显著,胆管上皮细胞水肿、坏死,部分胆管上皮细胞胞浆均质红染。Masson染色显示肝脏组织尤其是虫体周围出现大面积纤维化。试验结果表明,华支睾吸虫感染FVB小鼠肝脏病变严重,因此可利用该品系小鼠建立华支睾吸虫感染模型,为深入研究华支睾吸虫的致病机制奠定基础。
- 张蓓蓓张波沈莉萍李波颜超汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫肝脏病理变化
- 华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆、表达及免疫原性分析被引量：3
- 2015年
- 目的：克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白（ Clonorchis sinensisfatty acid binding protein，CsFABP），并对其免疫原性进行分析。方法根据编码CsFABP的已知基因序列设计合成一对引物，应用RT－PCR技术扩增编码CsFABP的基因片段。将扩增的CsFABP的基因片段克隆到原核质粒pET30a（＋）中，转化入大肠埃希菌（ E． coli） DH5α中，经含卡那霉素琼脂平板筛选，小量抽提质粒，经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒转化入E．coli BL21中，经异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达，表达产物经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS－PAGE）、考马斯亮蓝染色、Western blot分析鉴定。结果经酶切、菌液PCR以及测序确认，成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，并在E．coli BL21中高效表达。 Western blot试验证实表达的Cs-FABP能被特异的兔抗华支睾吸虫免疫血清识别。结论本研究成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，获得的CsFABP表达蛋白质具有一定的反应原性。
- 张波张蓓蓓李波华慧李向阳刘转转颜超付琳琳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白原核表达免疫原性
- 小鼠肝内胆管上皮细胞的分离与鉴定被引量：1
- 2015年
- 为建立一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞(MIBECs)分离培养方法,用Ⅳ型胶原酶进行门静脉灌注,取出肝内胆管,用DNaseⅠ、pronase E和Ⅳ型胶原酶分类消化,小鼠肝内胆管组织细小、均匀的细胞团培养于含100mL/L胎牛血清(FBS)和10ng/mL表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素转铁蛋白硒(ITS)的DMEM/F12培养基中。细胞贴壁后,利用细胞角蛋白19免疫荧光法鉴定目的细胞。在培养的过程中,用CCK8测定细胞的生长曲线。结果显示,成功分离出MIBECs,细胞纯度约95%。细胞培养3d^7d内呈对数生长状态。以上结果表明本分离培养方法是一种简单可靠的小鼠肝内胆管上皮细胞分离纯化培养技术。
- 王艳红张波李波张蓓蓓于倩颜超华慧汤仁仙郑葵阳
- 关键词：小鼠肝内胆管上皮细胞
