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舒剑波
作品数:
1
被引量:5
H指数:1
供职机构:
天津医科大学代谢病医院内分泌研究所
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
郭刚
天津医科大学代谢病医院内分泌研...
张瑞
天津医科大学代谢病医院内分泌研...
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天津医科大学代谢病医院内分泌研...
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2008
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大鼠bFGF基因荧光定量PCR检测方法的建立
被引量:5
2008年
目的建立用荧光定量PCR方法检测大鼠bFGF基因mRNA水平。方法以Trizol一步法提取新鲜骨组织总RNA,以Oligo(dt)18为引物逆转录产生cDNA并进行扩增,以T-A克隆法将纯化的目的片断与PGEM—T Easy载体连接成重组质粒并转化E.coli DH5α。采用碱裂解法提取重组质粒,经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA准确含量,并以靶基因和内参GAPDH mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果由PGEM-T Easy—bFGF所构建的标准曲线线性关系良好(反应体系中含1×10^2~1×10^7拷贝大鼠bFGF基因分子时,扩增反应α值与拷贝数的对数成线性关系)、灵敏度高、特异性强、准确可靠。批内和批间重复性测定的变异系数分别为1.03%~4、59%以及2.24%~6.46%。结论成功建立了用实时荧光定量PCR检测大鼠bFGF基因表达量的方法。
舒剑波
张瑞
董茵
郭刚
关键词:
碱性成纤维生长因子
SYBR
实时荧光定量PCR
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