刘伯华
- 作品数：10 被引量：33H指数：3
- 供职机构：北京世纪元亨动物防疫技术有限公司更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 一株犬细小病毒毒株CPV-YH及其应用
- 本发明提供一株犬细小病毒毒株CPV‑YH，属于微生物技术领域。所述犬细小病毒毒株CPV‑YH的保藏号为CGMCC NO.12990。本发明还提供所述的犬细小病毒毒株CPV‑YH在制备犬细小病毒疫苗方面的用途，以及在制备犬...
- 孙明邓小雨张丽马永缨刘巧荣卢会英刘伯华杨欣艳陈西钊
- 文献传递
- 犬细小病毒CPV-YH毒株的分离鉴定及其基因组变异分析被引量：7
- 2017年
- 为分析当前犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)基因组遗传变异情况,本研究从细小病毒阳性患犬粪便中分离到一株病毒,经过病毒的形态学观察、血凝试验、动物回归试验以及分子生物学鉴定,分离的病毒确实为犬细小病毒,并命名为CPV-YH。病毒分离结果显示,病料接种A-72细胞能产生典型的细胞病变,病毒能凝集猪红细胞,在电子显微镜下呈圆形或六边形,无囊膜,直径约为20nm。动物回归试验复制出了犬细小病毒病典型症状:出血性肠炎、肝水肿、肺淤血。全基因组序列测定与分析显示,其基因组全长为4 921nt,与2011年兰州分离的CPV-LZ2分离株基因组相似性最高,为99%;VP2氨基酸进化树显示,CPV-YH分离株与2013-BJ-P27(中国)分离株和UY306(乌拉圭)分离株在同一个小的分支上。与GenBank上收录的CPV代表株的VP2基因比对,核苷酸和氨基酸相似性分别是98%~99.4%和97.1%~99.5%。以上试验结果表明,成功分离一株CPV变异株,这些数据将为CPV的流行情况和防控提供基础。
- 孙明邓小雨刘巧荣马永缨张丽卢会英刘伯华杨欣艳陈西钊
- 关键词：犬细小病毒
- 一株欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒株及其应用
- 本发明“一株欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒株及其应用”，属于微生物技术领域。所述欧洲型PRRSV HLJB1‑M毒株的保藏号为CGMCC No.12989。基于所述毒株，本发明还提供一种用于预防和/或治疗猪繁殖与呼吸综合征...
- 孙明陈西钊张丽刘巧荣乔明明邓小雨马永缨卢会英刘伯华
- 文献传递
- 宠物犬布氏杆菌的PCR检测及部分序列分析被引量：3
- 2016年
- 对北京关忠动物医院送检的2例疑似感染布氏杆菌宠物犬的7份分泌物进行了布氏杆菌普通PCR、快速实时荧光PCR检测和Multi-PCR鉴定,并对部分基因序列测序分析,旨在对宠物犬感染犬布氏杆菌作出确诊,为宠物犬感染布氏杆菌诊断与防控提供资料。结果显示,布氏杆菌快速实时荧光检测试剂盒对两例犬的7份分泌物检测结果均为布氏杆菌阳性;Multi-PCR检测结果显示,感染犬布氏杆菌属于犬种布氏杆菌,且为非典型犬布氏杆菌;序列分析进一步验证了患犬感染样品扩增的序列均为布氏杆菌序列：BSCP31表面蛋白序列与已经发布的序列相比相似性在99%~100%;OMP25序列与中国内蒙古分离的犬布氏杆菌xue1分离株和韩国Brucella canis HSK A52141分离株亲缘关系最为亲近,核苷酸相似性均为99.9%;16SrRNA序列显示,进口斗牛犬和泰迪犬感染菌株均属于布氏杆菌序列。以上试验结果表明两例宠物犬均为犬布氏杆菌感染,这些数据将为布氏杆菌病的筛查和防控提供一定的基础。
- 孙明刘巧荣宋文静乔明明顾强张谦刘伯华杨雪松陈西钊
- 关键词：布氏杆菌宠物犬PCR检测
- 猪圆环病毒2型CAP蛋白在杆状病毒系统中的表达和鉴定被引量：2
- 2016年
- 为更好地检测和防控猪圆环病毒2型(PCV2),利用bac PAK杆状病毒系统高效表达了PCV2 CAP蛋白。应用PCR扩增PCV2 ORF2基因,并将其克隆到载体pbac PAK9中,获得重组载体pbac PAK9-ORF2。用脂质体介导法将其与线性化杆状病毒bac PAK6共转染于Sf21细胞中,经蚀斑纯化获得纯的重组杆状病毒,并于优化表达条件后获得CAP蛋白。SDS-PAGE分析表明,CAP蛋白分子质量约为28 ku,表达量约为33 mg/L;间接ELISA试验表明,CAP蛋白与PCV2阳性血清产生特异性免疫反应,具有良好的反应原性。上述结果表明,本研究用杆状病毒系统高效表达了PCV2 CAP蛋白,为PCV2的分子诊断及亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 冯向辉孙明刘伯华张丽乔明明申屠芬琴李智丽陈西钊
- 关键词：猪圆环病毒2型重组杆状病毒CAP蛋白
- 大熊猫源犬瘟热病毒基因组遗传特征分析被引量：13
- 2015年
- 【目的】对首次暴发的大熊猫源性犬瘟热病毒(panda derived-canine distemper virus,P-CDV)全基因组进行克隆测序,以了解大熊猫源CDV的全基因组遗传变异情况,进一步追踪感染源,为大熊猫犬瘟热防控提供理论依据。【方法】根据Gen Bank公布的CDV全基因组序列设计17对特异性引物,利用RT-PCR技术,从感染犬瘟热病毒的大熊猫肺渗出液中分片段扩增CDV全基因序列,并克隆到p MD19-T载体中;经测序、拼接,获得第一个P-CDV全长c DNA序列;利用DNAman生物学分析软件分别对全基因组序列、H蛋白基因序列、F蛋白基因序列、P蛋白基因序列、M蛋白基因序列等进行遗传变异分析,构建系统进化树。【结果】经序列测序和拼接,大熊猫源犬瘟热病毒全基因组长15 690 nt,Gen Bank登录号为KP677502,主要编码6种蛋白,分别是N蛋白、P蛋白、M蛋白、F蛋白、H蛋白和L蛋白,在各个基因及间隔区中未发现碱基插入和缺失。遗传进化分析显示,P-CDV全基因组与20株代表性CDV全基因组序列同源性为91.5%—98.7%,P-CDV与强毒株MKY-KM08(HM852904)、PS、HLJ1-06(JX681125)、Hebei(KC427278)以及AC96I-H358(AB753776)在一个大的分支上,与PS株(JN896331)亲缘关系最近,同源性为98.7%,与标准野毒株Strain A75-17(AF164967)同源性为95.7%,与疫苗株CDV3(EU726268)亲缘关系较远,同源性为91.5%。H蛋白氨基酸序列分析和系统进化树表明,大熊猫源犬瘟热病毒属于强毒株,基因型为Asia-I型。P-CDV各蛋白基因与20株代表性的毒株相比有9处氨基酸发生了变异,与Gen Bank上现有的CDV序列相比,其中3处是独有的,分别是:F蛋白基因的208位由N(Asn,天冬酰胺,强毒株多为N)或K(Lys,赖氨酸,弱毒株多为K)变成了S(Ser,丝氨酸),第215位由S变成了A(Ala,丙氨酸),P蛋白基因的58位由Q(Gln,谷氨酰胺)变成K(Lys,赖氨酸)。【结论】成功克隆了大熊猫源犬瘟热病毒的全基因,并完成了序列分析,发现了在F、P基因�
- 金艺鹏刘巧荣孙明乔雁超乔明明刘伯华林德贵陈西钊
- 关键词：犬瘟热病毒大熊猫全基因组测序
- 牛副流感病毒3型毒株的分离鉴定及基因组遗传变异分析被引量：1
- 2016年
- 从新疆地区某牛场出现发热、咳嗽等症状的多例病牛的肺组织中分离得到3株牛副流感病毒3型,分别命名为XJ03、XJ022、XJ023,对其中两株病毒XJ03和XJ023的基因组进行序列测定,测序结果显示,XJ03和XJ023毒株基因组全长分别为15474 bp(Gen Bank登录号为KU198929)和15475 bp,其核苷酸同源性为99.89%。同代表性的牛副流感病毒基因组比对发现,与我国的山东毒株SD0835同源性最高为99.3%,均属C型BPIV。在C型毒株中,与南韩12Q061分离株(C型)同源性最低为97.5%。F、N、HN、L、P、M蛋白基因氨基酸序列分析显示,与SD0835毒株相应序列对比,同源性分别为99.63%、92.15%、99.48%、99.28%、98.50%和100%,部分氨基酸发生了新的变异。试验结果将为今后更好地开展BPIV3防控奠定基础。
- 孙明李岩刘巧荣张鲁安乔明明李静邓小雨冯向辉刘伯华陈西钊
- 关键词：基因组分析
- 一株欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒株及其应用
- 本发明“一株欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒株及其应用”，属于微生物技术领域。所述欧洲型PRRSV HLJB1‑M毒株的保藏号为CGMCC No.12989。基于所述毒株，本发明还提供一种用于预防和/或治疗猪繁殖与呼吸综合征...
- 孙明陈西钊张丽刘巧荣乔明明邓小雨马永缨卢会英刘伯华
- 犬副流感病毒的分离鉴定及部分基因序列分析被引量：7
- 2016年
- 目的分离并鉴定犬副流感病毒（canine parainfluenza virus,CPIV）,并对该病毒N、HN和F基因进行序列分析,研究其遗传变异情况;为CPIV诊断、治疗以及预防奠定分子生物学基础。方法用Vero细胞接种感染CPIV阳性犬肺组织,盲传3代,观察病变情况,收集72 h培养液进行PCR鉴定、血凝特性以及形态学观察。同时,用3对特异性引物,扩增N、HN和F全基因,进行序列测定和分析,并制作系统进化树。结果从犬肺中成功分离出一株犬副流感病毒,并命名为QF20100726。该病毒能凝集豚鼠、猪、鸡和人O型血,电镜观察病毒呈圆形、长丝状等形态多样、大小不等的颗粒状;序列分析表明,与人源、犬源等10株有代表性的副流感病毒基因相比,N基因核苷酸同源性为95.7%~99.8%,氨基酸同源性为97.4%~99.6%,其中有两处氨基酸发生新的变异,分别是第257位由V变成了A,第301位由A变成了T;HN基因核苷酸同源性为95.5~99.8%,氨基酸同源性为96.3~99.6%,F基因核苷酸同源性为94.7%~99.6%,氨基酸同源性为95.6%~99.3%。有两处发生特异变异,分别是56位由T变成了S,89位由T变成了M。结论成功分离犬副流感病毒QF20100726分离株,其血凝特性及超微形态特征均符合CPIV特性,N、HN和F全基因生物进化树显示,该分离株与犬副流感病毒分离株08-1990（登录号：KC237063）亲缘关系最近;N基因氨基酸在第257位（由V变成了A）和第301位（由A变成了T）,F基因氨基酸在第56位（由T变成了S）和89位（由T变成了M）发生了特异性变异。这些数据将为CPIV的防控奠定基础。
- 孙明刘巧荣秦亚嫚邓小雨杨欣艳刘伯华陈西钊
- 关键词：病毒分离
- 一株犬细小病毒毒株CPV‑YH及其应用
- 本发明提供一株犬细小病毒毒株CPV‑YH，属于微生物技术领域。所述犬细小病毒毒株CPV‑YH的保藏号为CGMCC NO.12990。本发明还提供所述的犬细小病毒毒株CPV‑YH在制备犬细小病毒疫苗方面的用途，以及在制备犬...
- 孙明邓小雨张丽马永缨刘巧荣卢会英刘伯华杨欣艳陈西钊
