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一种细胞培养基过滤装置: 本实用新型涉及一种细胞培养基过滤装置，属于细胞培养技术领域；所述的细胞培养基过滤装置包括粗滤筒和精滤筒，粗滤筒下端可拆卸连接精滤筒，粗滤筒内设有筒状体，筒状体内设有粗滤装置，粗滤装置包括上表膜层、下表膜层、夹心层、固定线...; 卜宾唐青海阚云超姚伦广李羽王瑾李晓楠李丹丹焦铸锦; 文献传递

猪ELF4基因的克隆、蛋白表达及其多克隆抗体制备被引量：3: 2017年; 本研究旨在克隆猪转录因子ELF4基因,体外表达ELF4蛋白并制备抗该蛋白的多克隆抗体。采用RTPCR扩增猪ELF4基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸序列特征,将其克隆至原核表达载体pET28a,构建重组表达载体pET28a-pELF4,转化Rosetta(DE3)菌株,在不同温度、IPTG浓度、诱导时间等条件下进行诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白表达,重组pELF4蛋白(rpELF4)经纯化免疫鸡制备抗pELF4抗体。结果表明,pELF4开放阅读框为1 989bp(GenBank No.:KU097322),编码662个氨基酸,该基因与已经测定的人、牛、小鼠的ELF4的核苷酸相似性依次为89.4%、90.7%和81.1%,与牛等大动物的亲缘关系相对较近,与人和小鼠亲缘关系相对较远;结果显示,成功表达了重组蛋白pELF4,rpELF4分子量为95ku,该蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,在37℃条件下,以终浓度为0.8mmol·L-1IPTG诱导8h包涵体表达量达到最高。第4次免疫后第13天,鸡抗rpELF4抗体滴度达到1︰256 000倍以上。本试验利用原核表达系统成功制备了重组pELF4蛋白,并制备了免疫活性和特异性良好的鸡抗pELF4多克隆抗体,为该蛋白生物学功能及相关疾病研究提供了基础材料。; 王瑾唐青海谷雅静李晓楠李羽王雪雨姚伦广阚云超; 关键词：原核表达免疫

1株猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其生物学特性研究被引量：4: 2017年; 采集1例疑似感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)仔猪的粪便,运用RT-PCR方法和血清学方法对病料进行TGEV检测,并应用猪睾丸细胞(ST)进行病毒分离培养,分别采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)和RT-PCR方法检测病毒在ST细胞中的增殖动态,应用RT-PCR方法扩增分离TGEV S1基因,经序列测定后,采用DNAStar 7.0和Mega 5.0软件对TGEV进行生物信息学分析。结果表明,病料接种到ST细胞培养后,出现明显细胞病变效应(CPE);RT-PCR检测结果显示,TGEV核酸阳性;血清学鉴定TGEV抗原阳性。将分离毒株命名为TGEV-NY。感染12 h后,IPMA检测结果阳性,且可从细胞培养上清中检出TGEV核酸。序列测定分析表明,分离毒株S1基因开放阅读框(ORF)为2 220 bp,编码740个氨基酸。进化分析显示,分离毒株与我国2006年分离的SC-Y毒株亲缘关系最近,分离毒株属于基因Ⅰ群。; 李晓楠唐青海李羽王瑾姚伦广阚云超杨海; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒

一种猪ELF4蛋白卵黄抗体的制备方法: 一种猪ELF4蛋白卵黄抗体的制备方法，首选扩增得到ELF4基因片段，与pET28a载体连接，获得重组表达菌株Rosetta(DE3)/pET28a‑pELF4；用诱导物IPTG诱导该重组表达菌株，获得融合蛋白；向纯化的融...; 唐青海阚云超姚伦广王瑾唐存多谷雅静李晓楠李羽焦铸锦李丹丹刘宗才

猪细胞周期蛋白依赖性激酶2多克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2015年; 为研究猪细胞周期蛋白依赖性激酶2(pCDK2)的生物学功能,本试验构建重组原核表达载体pET28apCdk2,转化大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,用IPTG诱导重组蛋白(rpCDK2)表达并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定,蛋白经纯化及与弗氏佐剂乳化后免疫家兔制备多克隆抗体。分别用Western blotting和免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性。结果显示,成功表达了rpCDK2蛋白,该蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,可溶性rpCDK2蛋白分子质量约为38ku,包涵体rpCDK2蛋白在38~43ku间有3种不同分子质量形式;IPMA检测结果显示,所制备的pCDK2蛋白多克隆抗体与猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)免疫染色呈特异性反应,且Western blotting分析显示,多克隆抗体与这两种细胞的总蛋白反应出现4条特异性条带(分子质量在34~50ku之间),可能跟pCDK2的多种磷酸化形式有关。本试验利用原核表达系统成功制备了rpCDK2蛋白,并制备了免疫活性和特异性良好的pCDK2蛋白多克隆抗体,为该蛋白生物学功能及相关疾病研究提供了基础材料。; 李晓蓉唐青海卜宾毛倩倩李羽唐存多姚伦广焦铸锦阚云超; 关键词：多克隆抗体

一种猪ELF4蛋白卵黄抗体的制备方法: 一种猪ELF4蛋白卵黄抗体的制备方法，首选扩增得到ELF4基因片段，与pET28a载体连接，获得重组表达菌株Rosetta(DE3)/pET28a‑pELF4；用诱导物IPTG诱导该重组表达菌株，获得融合蛋白；向纯化的融...; 唐青海阚云超姚伦广王瑾唐存多谷雅静李晓楠李羽焦铸锦李丹丹刘宗才; 文献传递

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李羽