申屠芬琴
- 作品数：19 被引量：29H指数：3
- 供职机构：北京世纪元亨动物防疫技术有限公司更多>>
- 发文基金：公益性行业科研专项“十一五”国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>
- 猪肾脏、肺脏、脂肪和毛发中莱克多巴胺残留的HPLC检测方法及其残留消除的研究
- 莱克多巴胺(Ractopamine，RAC)属于苯酚胺类β-肾上腺激动剂，具有增强脂肪分解代谢，促进蛋白质合成，显著增加酮体瘦肉率，提高饲料转化率的作用。目前美国、加拿大等国家均允许RAC作为饲料添加剂使用，但是在欧盟和...
- 申屠芬琴
- 关键词：莱克多巴胺猪肾脏药物残留检测
- 文献传递
- 一种小反刍兽疫疫苗株和野毒株差异性合成肽及其应用
- 本发明“一种小反刍兽疫疫苗株和野毒株差异性合成肽及其应用”涉及小反刍兽疫病毒多肽合成物领域。所述小反刍Nigeria 75/1疫苗株合成肽，其包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的肽段I。所述小反刍野毒株合成肽，其...
- 陈西钊孙明刘巧荣田新生申屠芬琴孔汉金
- 文献传递
- 一种快速检测犬细小病毒抗体血凝抑制效价的胶体金试纸条、试剂盒及检测方法
- 本发明公开了一种快速检测犬细小病毒抗体血凝抑制效价的胶体金试纸条、试剂盒及检测方法。本发明涉及CPV治疗性单克隆抗体制备而成的试纸条，定量检测时将犬血清从1:10开始倍比稀释，与16个抗原单位的CPV标准抗原中和后，再滴...
- 孙明陈西钊申屠芬琴马永缨杨欣艳
- 猪组织中莱克多巴胺的高效液相色谱法测定和残留消除规律的研究
- 本文对猪组织(肝脏、肾脏、肌肉、脂肪)中莱克多巴胺的高效液相色谱检测方法和残留消除规律进行了研究。采用丙酮提取猪组织中的莱克多巴胺,用乙酸乙酯进行液液分配和固相小柱萃取净化,乙腈-水-冰乙酸-戊烷磺酸钠为流动相,反相高效...
- 强致懿申屠芬琴沈建忠
- 文献传递
- 牛γ-干扰素在大肠杆菌中的表达及抗原性鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的在大肠杆菌中高效表达牛γ-干扰素(bovine interferon-γ,BovIFN-γ),并对其生物活性进行初步鉴定。方法依据GenBank上基因序列人工合成BovIFN-γ基因,PCR方法扩增该基因,将其插入PET-28a载体构建原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21中,在IPTG诱导下表达BovIFN-γ,并进行Western blot鉴定。Ni-NTA亲和层析法和电洗脱方法纯化表达的重组蛋白,用Western blot和商品化的BovIFN-γ检测试剂盒进行重组蛋白的抗原性检测。结果成功构建了BovIFN-γ原核表达载体PET-28a-BIFN-γ,并在大肠杆菌中高效表达,表达蛋白约占菌体总蛋白的32%,表达产物主要以可溶性形式存在于菌体裂解液上清中;重组蛋白可与BovIFN-γ单克隆抗体反应,Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白抗原活性比电洗脱方法纯化的抗原活性高。结论在大肠杆菌中成功表达了可溶性的BovIFN-γ蛋白,可与BovIFN-γ单抗发生反应,纯化的重组蛋白具有良好的反应原性。
- 刘巧荣孙明乔明明杨璐申屠芬琴马永缨曹振田克恭陈西钊
- 关键词：原核表达抗原性大肠杆菌
- 小反刍兽疫病毒重组N蛋白抗原制备及间接ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2017年
- 将编码小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的基因全长克隆到pBacPAK9载体中,并在昆虫细胞中进行表达。对表达产物进行SDS-PAGE分析,并用PPRV阳性血清进行了Western blot鉴定。用Ni-IDA亲和柱对组氨酸融合表达的N蛋白进行了纯化,并对纯化产物进行了理化性质和抗原活性分析。最后以表达的N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法,临床检测137份山羊血清并与IDvet公司的商品化PPRV抗体检测试剂盒进行比较。结果表明,制备的PPRV N蛋白抗原在溶液中以单体形式存在,具有非常好的抗原活性。用该蛋白建立的间接ELISA检测方法与IDvet试剂盒符合率为956%。本研究为小反刍兽疫病毒重组N蛋白抗原制备相关质量标准的建立奠定了基础,同时建立的ELISA抗体检测方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断。
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- 关键词：小反刍兽疫病毒N蛋白ELISA
- 猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达被引量：5
- 2012年
- 目的分段表达伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗体评估试剂盒研究。方法分析gB抗原表位,设计4对特异性引物,从PRV新疆分离株中扩增gB基因的4个片段,分别命名为gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,克隆到pGEM-T-easy载体并测序。再将4个gB基因片段融合到pGEX-6P-1原核表达载体中,表达并纯化。Western Blotting进行重组蛋白的抗原性检测。以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法,检测猪血清临床样品。结果构建的4种表达质粒均可在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE分析,表达分子量分别为75.05、53.86、49.96和49.72×103Da,其中gB-3、gB-4和gB-5表达量较高,表达产物主要存在于包涵体中。Western Bloting鉴定显示,4种融合蛋白均可被猪伪狂犬阳性血清特异识别。以gB-3、gB-4和gB-5建立的ELISA方法与IDEXX公司的gB-ELISA试剂盒符合率分别为40.9%、81.8%和81.8%。结论本研究成功表达了PRV的gB-1、gB-3、gB-4和gB-5重组蛋白,gB-3、gB-4和gB-5表达量较高;其中以gB-4和gB-5建立的间接ELISA方法与IDEXX公司的符合率较高。
- 包新奇黄绍华刘巧荣孙明杨璐申屠芬琴康立平陈西钊
- 关键词：PRVGBELISA
- 用于检测小反刍兽疫病毒H 蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条
- 本发明“一株可分泌PPRV‑H mAb的杂交瘤细胞株PPRV‐H4C<Sub>12</Sub>、其分泌的PPRV‑H mAb及包含该PPRV‑H mAb的胶体金免疫层析试纸条”，属于动物疫病检测领域。所述杂交瘤细胞株PP...
- 陈西钊孙明田克恭吴培星迟立超冯向辉孔汉金申屠芬琴张丽
- 用于检测小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条
- 本发明“一株可分泌PPRV‑H mAb的杂交瘤细胞株PPRV‐H4C<Sub>12</Sub>、其分泌的PPRV‑H mAb及包含该PPRV‑H mAb的胶体金免疫层析试纸条”，属于动物疫病检测领域。所述杂交瘤细胞株PP...
- 陈西钊孙明田克恭吴培星迟立超冯向辉孔汉金申屠芬琴张丽
- 文献传递
- 牛γ干扰素在CHO细胞中的表达和鉴定
- 2013年
- 为获得高活性的牛γ干扰素(BoIFN-γ),依据GenBank中已发表的BoIFN-γ基因序列(M29867)进行人工合成,应用PCR方法扩增该基因,将其插入pIRESneo构建真核表达质粒,转染到CHO细胞中,用SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白的表达,并用牛γ干扰素检测试剂盒鉴定其反应原性。结果:成功的构建了pIRES-BoIFN-γ真核表达载体,实现了其在CHO细胞上的表达。表达产物经γ-干扰素检测试剂盒检测具有良好的反应原性,为研究BoIFN-γ结构与生物学功能以及建立牛结核BoIFN-γ检测法奠定了基础。
- 冯向辉李文合孙明刘巧荣乔明明申屠芬琴杨璐陈西钊
- 关键词：CHO细胞
