马杰
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胸苷激酶1原核表达载体的构建表达及鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的构建p ET-28a-TK1融合基因表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达。方法提取人肝癌细胞(Hep G2)总RNA,应用RT-PCR、PCR技术扩增出TK1目的片段,将其与带有His标签的p ET-28a连接构建重组基因并测序鉴定;用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白在BL21大肠杆菌中表达;最后通过SDS-PAGE及Western Blot鉴定。结果以Hep G2细胞的c DNA为模板,扩增出663bp的目的片段,将其克隆到p ET-28a原核表达载体,经酶切及DNA测序鉴定质粒构建正确;IPTG诱导后实现可溶性表达,经Western Blot鉴定为TK1融合蛋白。结论成功构建了TK1重组表达质粒,并在原核细胞中获得高效表达,为进一步开发TK1诊断试剂奠定基础。
- 庞丽君王珊珊吴云欧阳雅博马杰
- 关键词：TK1克隆原核表达
- 高尔基体蛋白的基因克隆及原核表达
- 2015年
- 目的构建重组高尔基体蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达,为进一步研发肝癌诊断试剂奠定基础。方法通过RT-PCR获得GP73目的片段,将其克隆入表达载体p ET-28a,经酶切及测序鉴定后,在BL21菌株中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Western Blot鉴定。结果扩增的片段大小与预期一致;p ET-28a-GP73重组质粒通过酶切鉴定与DNA测序证实序列正确;诱导的蛋白用SDS-PAGE电泳和Western Blot检测,与预期相符可见一特异性条带。结论成功获得GP73目的基因并构建了p ET-28aGP73原核表达载体,实现了该融合蛋白的可溶性表达。
- 庞丽君乔录新王珊珊马杰
- 关键词：GP73克隆原核表达肝癌
