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刘袁
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东南大学吴健雄学院
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相关领域:
生物学
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合作作者
顾宁
东南大学生物科学与医学工程学院
许阳
东南大学吴健雄学院
曹萌
东南大学生物科学与医学工程学院
常维维
东南大学生物科学与医学工程学院
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绿色荧光蛋白探针标记的MIM-I-BAR基因构建和表达(英文)
2015年
为制备可视化的转移消失蛋白(MIM)的I-BAR结构域重组体,克隆了顺联绿色荧光蛋白(GFP)探针编码序列的MIM-I-BAR基因.在6xHis标签原核表达质粒上成功构建了DNA序列.同时,实现了未标记荧光探针基因的MIM-I-BAR质粒的构建以作实验对照.成功转染至BL21(DE3)大肠杆菌细胞后,GFP偶联的MIM-I-BAR(MIM-I-BAR-GFP)蛋白表现出很强的可视荧光,该表达产物可方便的通过目测、荧光显微镜、免疫印迹和紫外可见分光光度计等多种手段进行检测.此外,在考察不同条件下的蛋白表达效率过程中发现,带有GFP探针的MIM-I-BAR重组蛋白在温度为10℃时产率最高,而并非37℃.这一特征与非荧光标记的MIM-I-BAR明显不同.研究证实该最佳表达温度条件适用于重组蛋白产品中量制备.所开发的带有荧光探针的MIM-I-BAR蛋白产品及其制备工艺在科学研究、生物医学应用以及药物开发过程中均有较高的应用价值.
曹萌
常维维
许阳
方琳静
刘袁
顾宁
关键词:
INVERSE
绿色荧光蛋白
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