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宋宁宁: 作品数：15 被引量：20H指数：2; 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省青年科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

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结核分枝杆菌rv3295基因的原核表达及单克隆抗体的制备被引量：1: 2015年; 以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白。通过亲和层析纯化,以该重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合筛选制备抗该重组蛋白的单克隆抗体;采用Western-blot验证单克隆抗体的特异性;通过亚型鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型。结果显示,Rv3295蛋白以可溶形式表达,蛋白质的分子质量大小为25ku。获得1株抗该重组蛋白的单克隆抗体1F7,其亚型为IgG1/κ;Western-blot结果显示,该抗体具有较好的特异性。本研究制备的Rv3295蛋白的单克隆抗体对于研究Rv3295蛋白的功能及其与DNA之间的互作奠定了基础。; 崔莹莹宋宁宁党光辉曹俊李华芳于申业刘思国; 关键词：结核分枝杆菌原核表达单克隆抗体

黑龙江某规模化牛场副结核分枝杆菌的分离与鉴定被引量：6: 2020年; 为检测黑龙江某规模化牛场副结核病的感染情况,本研究采集了35头副结核分枝杆菌(MAP)抗体阳性牛(有腹泻表现)的直肠刮取物,采用IS900-PCR鉴定样品中的MAP,将该PCR扩增为阳性的样品通过细菌分离培养、菌落形态学观察、多重PCR鉴定MAP的亚型,通过IS1311基因序列同源性比对并对分离菌进行遗传进化分析,同时对其进行多态性分型鉴定,进一步确定分离株的亚型。结果显示,35份直肠刮取物样本中,31份经IS900-PCR扩增阳性,分离培养得到的3株分离菌菌落形态与分枝杆菌相似,多重PCR的鉴定谱型均与MAP K-10参考株一致,其在遗传进化上与多株MAP具有高度的亲缘性,经IS1311多态性分型鉴定3株分离菌均为牛型MAP,分别命名为MAP-HLJB160、MAP-HLJB175、MAP-HLJB177。本研究为黑龙江地区副结核病的预防和流行病学调查提供数据支撑。; 蔡珠明党光辉臧鑫鑫邵明珠唐阳阳崔子寅宋宁宁刘思国; 关键词：副结核分枝杆菌亚型鉴定

结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0324调控rv3597c的初步研究被引量：2: 2021年; 结核分枝杆菌(MTB)利用其转录调控系统快速适应环境变化,而其Ars R家族的转录调控蛋白Rv0324则在转录调控系统中发挥着重要的作用。为研究Rv0324的调控机制,本研究以卡介苗(BCG)(Tokyo-172)基因组为模板,PCR扩增得到rv0324基因,构建p ET22b-rv0324重组表达载体,转化至E.coli BL21后经诱导表达获得蛋白Rv0324;同时以BCG(Tokyo-172)基因组为模板扩增获得rv3597c启动子(p/o rv3597c)。通过体外凝胶迁移实验(EMSA)和体内染色质免疫沉淀(Ch IP)实验对Rv0324与p/o rv3597c的相互作用进行检测,结果显示Rv0324可与p/o rv3597c结合,且Rv0324结合于p/o rv3597c的大沟;通过EMSA对影响Rv0324和p/o rv3597c结合的小分子进行筛选,结果显示二者的结合均能够被Trp、Fe^(3+)、Cu^(2+)、V_(B1)、V_(C)和贝达喹啉小分子抑制。在利用tr Rosetta软件对Rv0324蛋白结构分析的基础上,通过Rv0324和小分子的对接实验进一步分析它们间可能的互作模式,结果显示主要是位于Rv0324环区结构域的Asp203和Asp204氨基酸残基参与了与小分子的互作。综上所述,本研究首次证实MTB Rv0324通过直接调控rv3597c的表达,参与调控MTB的氧耗和代谢水平的变化,同时发现了影响Rv0324和rv3597c互作的小分子及其作用模式,为临床治疗的药物筛选提供了一定的参考依据。; 唐祎依崔莹莹吕明月王慧党光辉崔子寅刘思国宋宁宁; 关键词：结核分枝杆菌

一种新型的结核分枝杆菌胞外核酸酶及其用途: 本发明公开了一种新型的结核分枝杆菌胞外核酸酶及其用途。本发明证实了Rv0888是结核分枝杆菌的一个胞外核酸酶。基于序列分析，Rv0888核酸酶与已知的胞外核酸酶没有同源性，表明Rv0888是一个新型的胞外核酸酶。Rv08...; 刘思国陈利苹宋宁宁; 文献传递

副结核分枝杆菌MAP1068胞外蛋白酶的特性研究被引量：1: 2019年; 为研究副结核分枝杆菌(MAP)1068蛋白的特性,本研究以MAP参考株K10基因组为模板,PCR扩增其map1068基因,构建p ET28a-map1068重组载体,将其转化BL21后诱导表达并纯化MAP1068蛋白。利用纯化的重组蛋白免疫(100μg/只/0.1 m L)小鼠制备多克隆抗体,应用该抗体对MAP1068蛋白进行亚细胞定位。以酪蛋白为底物测定MAP1068蛋白的酶活性。结果显示,MAP1068蛋白以包涵体形式表达;经变性、复性、亲和层析纯化后获得目的蛋白;将该蛋白免疫小鼠后其血清抗体效价可达1∶204 800;该蛋白主要定位于MAP细胞壁,可降解酪蛋白,为胞外蛋白酶。本实验为进一步研究MAP的致病机制奠定了基础。; 王忠星党光辉党光辉臧鑫鑫崔莹莹崔莹莹宋宁宁宋宁宁陈利苹; 关键词：副结核分枝杆菌酶活性

结核分枝杆菌TetR家族蛋白Rv3295新调控靶点及辅助因子的初步研究被引量：2: 2020年; 为了验证rv3229c是否为结核分枝杆菌(MTB)的转录调控蛋白Rv3295的调控靶点,并研究哪些小分子对rv3229c与Rv3295蛋白的结合有影响,本研究通过PCR扩增MTB rv3295基因后构建了重组表达载体pET-22b-rv3295,经诱导后得到重组蛋白Rv3295。凝胶迁移试验(EMSA)和染色质免疫沉淀(ChIP)试验结果显示,Rv3295与rv3229c(desA3)启动子在体外与体内均能够结合。DNA大沟小沟结合试验表明,Rv3295与rv3229c DNA的大沟结合。通过EMSA小分子筛选,结果显示,小分子(VB1、VB3、VB6、VC)和金属离子(Fe3+和Zn2+)在体外均可降低Rv3295与rv3229c启动子区域的结合,而氨基酸及其它小分子对该结合无影响。分子对接试验表明Rv3295的Glu 67和Glu 105氨基酸残基在该蛋白质与小分子及金属离子的相互作用中起重要作用。以上试验结果表明rv3229c为TetR家族蛋白Rv3295新的调控靶点。本研究首次揭示了MTB中的Rv3295调控蛋白可直接调控rv3229c(desA3)的表达,进而参与油酸合成的调控。; 吕明月崔莹莹唐祎依党光辉崔子寅刘思国宋宁宁; 关键词：结核分枝杆菌转录调控

结核分枝杆菌新型分泌性核酸酶(Rv0888)的特性研究: 引言许多种细菌能产生胞外核酸酶,胞外核酸酶在细菌毒力、生物被膜的形成、利用胞外DNA作为营养和降解胞外诱捕网(NETs)的DNA中起着重要作用。结核分枝杆菌(M. tuberculosis)是引起结核病的主要病原菌,为革...; 党光辉曹俊崔莹莹宋宁宁陈利苹庞海刘思国; 文献传递

牛副结核分枝杆菌的分离及鉴定被引量：9: 2018年; 为进一步确定新疆某奶牛场疑似感染副结核病的病原菌,本研究采集了37头疑似患病奶牛的直肠刮取物,应用卵黄琼脂培养基对其进行分枝杆菌的分离培养,经菌落形态观察、抗酸染色以及多重PCR等方法对分离菌进行病原学鉴定,并利用副结核分枝杆菌亚型鉴定引物进行PCR扩增及测序分析。结果显示,分离培养的7株分离菌均为抗酸染色阳性的分枝杆菌;经多重PCR鉴定,其中3株谱型与副结核分枝杆菌k10参考株一致;进一步通过基因分型的PCR扩增及测序分析,确定这3株分离菌均为牛副结核分枝杆菌。本研究为进一步开展该菌病原学和流行病学研究提供了必要的研究资料。; 刘虹秀程玉笛党光辉李田田李鹤崔子寅宋宁宁陈利苹刘思国; 关键词：副结核分枝杆菌多重PCR 亚型鉴定

一种新型的结核分枝杆菌胞外核酸酶及其用途: 本发明公开了一种新型的结核分枝杆菌胞外核酸酶及其用途。本发明证实了Rv0888是结核分枝杆菌的一个胞外核酸酶。基于序列分析，Rv0888核酸酶与已知的胞外核酸酶没有同源性，表明Rv0888是一个新型的胞外核酸酶。Rv08...; 刘思国陈利苹宋宁宁

一种抗天然牛γ-干扰素的单克隆抗体，分泌该抗体的杂交瘤细胞株及应用: 本发明公开了一种抗天然牛γ‑干扰素的单克隆抗体，分泌该抗体的杂交瘤细胞株及应用。本发明的一株能够稳定分泌抗天然牛γ‑干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为3D7，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏...; 陈利苹刘思国朱海波于申业宋宁宁; 文献传递

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