孙庆歌
- 作品数：22 被引量：27H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 六种动物源性人兽共患病病毒基因芯片检测方法的研究
- 近年来人兽共患病在世界各地疫情有所回升,新出现的人兽共患病不断爆发和曾经发生的人兽共患病再度肆虐,使国际社会面临着共同威胁和挑战,已成为各国政府和有关国际组织高度关注的重大公共卫生安全问题。如新出现的SARS冠状病毒、禽...
- 孙庆歌
- 关键词：基因芯片杂交多重PCR人兽共患病
- 文献传递
- 针对多种强致病性病毒的基因芯片检测方法的建立
- 甲病毒属中的东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、基孔肯亚病毒，黄病毒属中的森林脑炎病毒、乙型脑炎病毒、黄热病毒、登革病毒等，以及其他一些病毒如汉坦病毒、新疆出血热病毒等、可引起严重的人类疾病，目前己被联合国卫生组织列为生物战...
- 康晓平杨银辉刘洪李永强孙庆歌祝庆余
- 关键词：基因芯片技术免疫荧光病原体检测
- 文献传递
- 5种人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的初步建立被引量：10
- 2009年
- 为建立可同时检测裂谷热病毒(RVFV)、戊型肝炎病毒(HEV)、狂犬病毒(RV)、水泡性口炎病毒(VSV)及口蹄疫病毒(FMDV)5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR快速检测方法,本研究根据GenBank登录的上述5种病毒的全基因组序列,设计了5对多重PCR引物,通过优化反应条件,建立检测以上5种病毒的多重RT-PCR方法。通过对同一种属的其他病毒及相关病毒的检测,确定方法的特异性;通过对体外转录合成的RNA进行定量检测的方法,确定方法的敏感度。实验结果表明:在同一RT-PCR反应体系中可同时检测以上5种病毒,扩增片段长度分别为499bp、137bp、274bp、224bp、389bp;而对新城疫病毒(NDV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛流行热病毒(BEFV)和乙型脑炎病毒(JBEV)的检测均为阴性;5种病毒RNA的最低检测拷贝数分别为2.91×104、3.14×103、1.25×103、6.65×103和2.38×104。利用该方法对11份RV已知阳性样本和7份HEV已知阳性样本检测结果均呈阳性。本研究建立了一种快速、可同时检测5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR检测方法,该方法具有良好的特异性和较高的敏感性。
- 孙庆歌杨银辉张维军王群康晓平李永强白宇童铁钢杨涛步志高吴东来
- 关键词：戊型肝炎病毒狂犬病毒水泡性口炎病毒口蹄疫病毒多重RT-PCR
- 针对多种强致病性病毒的基因芯片检测方法的建立
- 2008年
- 为了制备灵敏的可检测多种烈性病毒性病原体的基因芯片,本研究设计了针对21种烈性病毒性病原体的基因芯片检测探针,每种5条,长50 bp.并以甲病毒属的基孔肯亚病毒和黄病毒属的黄热病毒细胞培养物为检测模型,摸索了合适的病毒基因处理与扩增方法.将提取的病毒RNA先用DNaseⅠ处理,以去除掉其中的DNA分子,然后利用病毒属特异性引物进行反转录,以引导病毒基因组的合成,从而尽可能地减少宿主细胞基因成分的干扰.进行随机PCR扩增后将扩增产物与基因芯片进行杂交,分别出现了4条基孔肯亚病毒探针信号和5条黄热病毒的探针信号,说明所设计的检测探针具有较好的特异性,可用于这2种病毒的特异性检测.这种病毒基因样品的处理和扩增方法也为此基因芯片的临床应用奠定了基础.
- 康晓平杨银辉刘洪李永强孙庆歌祝庆余
- 关键词：病毒探针设计芯片检测
- 重组马γ-干扰素抗病毒活性测定及单克隆抗体抑制活性鉴定被引量：2
- 2008年
- 为了测定大肠杆菌和杆状病毒表达的重组马γ-干扰素是否具有抗病毒活性,利用这两种干扰素处理马胎肾细胞(EFK-78),然后接种表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组水泡性口炎病毒(VSV*GFP),观察干扰素对病毒表达GFP的抑制,测出其抗病毒活性单位分别为1×103AU/mL、1×105AU/mL。评价了制备的九株抗重组马γ-干扰素单克隆抗体是否可抑制重组马γ-干扰素抗病毒活性,证实其中一株可中和重组马γ-干扰素的抗病毒活性。结果表明:杆状病毒表达的马γ-干扰素具有较高的抗病毒活性,其活性可被一株制备的抗重组马γ-干扰素单克隆抗体抑制;首次获得原核表达的具有抗病毒活性的马γ-干扰素。
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- 关键词：单克隆抗体
- 医学RNA病毒属水平基因芯片筛查技术的研究
- 本研究目的是建立能够在属水平对医学RNA病毒进行快速筛查的基因芯片技术，在出现新(突)发传染病疫情或公共卫生事件时，能利用该芯片，快速将病毒性病原体筛查到属水平，为进一步进行病原体的分离培养、鉴定及传染病疫情的防控提供有...
- 杨银辉康晓平李永强刘洪孙庆歌林方祝庆余
- 关键词：RNA病毒免疫学检验基因芯片
- 文献传递
- 基因芯片技术检测重要人兽共患病病毒方法的建立被引量：2
- 2009年
- 为了建立能对25种重要人兽共患病病毒进行筛查及鉴定用的基因芯片技术,本实验首先设计针对每种病毒的寡核苷酸探针并进行探针特异性的生物信息学验证.然后探索病毒核酸随机扩增方法,优化杂交动力学条件,建立本芯片标准的数据处理分析方法.最后用细胞培养的病毒和模拟临床标本验证芯片的敏感性与特异性.结果表明,锚定随机PCR扩增法适合于本芯片病毒核酸的扩增;芯片杂交前用0.25%NaBH4进行封闭,最优杂交条件为51℃,2h及50%甲酰胺浓度;芯片具有较好的敏感性及检测特异性.初步结果表明,本实验所建立的基因芯片技术可应用于对25种重要人兽共患病病毒进行筛查及鉴定.
- 李永强康晓平孙庆歌刘洪常国辉祝庆余杨银辉
- 关键词：基因芯片技术特异性
- 一种检测人畜共患病病毒的基因芯片及其应用
- 本发明公开了一种检测人畜共患病病毒的基因芯片及其应用。本发明提供的基因芯片包括病毒检测探针，其特征在于：所述病毒检测探针由以下的探针组成：核苷酸序列分别是表2中序列1-150的病毒检测探针和核苷酸序列分别是序列1-150...
- 杨银辉李永强康晓平刘洪孙庆歌户义李靖祝庆余
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白在重组牛痘病毒中的表达与鉴定被引量：2
- 2010年
- 为重组表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白,本研究将RT-PCR获得的PRRSV CH-1a株M蛋白基因,克隆于pMD18-T载体中,经测序鉴定正确后,亚克隆至牛痘病毒重组转移质粒pSC11中,构建了转移重组质粒pSC11-PRRSV-M。将pSC11-PRRSV-M在脂质体的介导下转染WR株牛痘病毒感染的TK-143细胞,在含有X-gal的琼脂培养基上通过蓝斑筛选含有PRRSV M基因的重组病毒rWR-PRRSV-M。Western blot与IFA检测表明,重组病毒成功表达了PRRSV M蛋白,而且所表达的蛋白保持了良好的免疫原性。动物实验表明,rWR-PRRSV-M所表达的PRRSV M蛋白在免疫小鼠体内诱生了抗PRRSV的抗体。rWR-PRRSV-M的构建,为进一步探讨PRRSV M蛋白免疫原性提供了基础数据,也为PRRS重组活载体疫苗的研究奠定了基础。
- 张维军田野林燕王群徐青元孙庆歌刘霓红杨涛田志军步志高童光志李文京吴东来
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白
- 检测黄病毒属病毒的基因芯片探针及基因芯片检测方法
- 本发明提供一组检测黄病毒属病毒的基因芯片探针及一种通用的检测方法。包括森林脑炎病毒(Tick borne encephalitis)探针、登革病毒(Dengue virus)探针和乙型脑炎病毒(Japanese ence...
- 康晓平杨银辉李永强刘洪孙庆歌祝庆余
- 文献传递
