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高永峰: 作品数：26 被引量：84H指数：5; 供职机构：西南科技大学生命科学与工程学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金博士科研启动基金四川省青年科技基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程文化科学更多>>

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基于微信平台的翻转课堂教学模式在分子生物学课程教学中的应用探讨被引量：4: 2020年; 为了探讨基于微信平台的翻转课堂在《分子生物学》课程中应用的可行性,以生物技术专业学生作为研究对象,并以“乳糖操纵子”单元为例,对实施新的教学模式的效果进行了研究评价。结果显示,基于微信平台的翻转课堂极大地调动了学生的学习主动性,提高了学习效果,提升了课堂氛围。; 刘继恺高永峰曹颖; 关键词：分子生物学

烟草NtMTPC4启动子的克隆与缺失分析被引量：1: 2017年; 组织特异性启动子是基因工程研究及实际应用中的重要工具。为了研究烟草NtMTPC4启动子的表达特性,采用实时荧光定量PCR方法分析烟草金属耐受蛋白C4(MTPC4)基因NtMTPC4在烟草不同组织中的表达模式,并利用PCR技术克隆得到NtMTPC4的上游启动子NtMTPC4-P。根据调控元件的分布对NtMTPC4-P进行不同程度的缺失,获得了NtMTPC4-P1、NtMTPC4-P2和NtMTPC4-P3缺失体;构建全长NtMTPC4-P和不同缺失体的植物表达载体,并通过花序浸染法转化拟南芥,对获得的转基因拟南芥进行GUS组织化学染色分析。结果表明,NtMTPC4基因的表达具有组织特异性,其在花中的表达量最高。NtMTPC4-P全长2 287 bp,含有CAAT-box、TATA-box、GTGANTG10和POLLEN1LELAT52等顺式作用元件和调控元件。GUS组织化学染色结果表明,全长启动子NtMTPC4-P和不同缺失体都能特异性地驱动GUS基因在转基因拟南芥花粉中的表达。本研究结果为通过基因工程技术在花粉中特异表达目的基因提供了新的调控元件。; 刘继恺张林高永峰吴婵娟唐运来; 关键词：烟草克隆

胡杨PeNAC121基因启动子的分离鉴定和胁迫应答模式分析被引量：1: 2022年; 为了探究NAC转录因子家族成员在胡杨(Populus euphratica)逆境胁迫中的响应和调控机制,利用PCR技术从胡杨中克隆了PeNAC121基因的启动子序列,并采用生物信息学工具对该启动子的结构特征进行了分析,最后利用该启动子驱动GUS报告基因在三倍体毛白杨(Populus tomentosa)中表达,并对获得的转基因植株采用不同胁迫处理后进行了GUS染色和酶活性定量分析。结果表明,克隆获得的PeNAC121基因的启动子长度为1997 bp(起始密码子ATG上游),启动序列中除了含有大量的光响应元件,还含有多个与非生物逆境胁迫和激素响应相关的元件,如低温响应元件LTR、干旱响应元件MBS、防卫和胁迫响应元件TC-rich repeats、脱落酸(ABA)响应元件、以及赤霉素(GA)响应元件等。基因的组织表达模式检测结果显示,PeNAC121基因主要在茎中表达,在根和叶中的表达较少。GUS组织化学染色和酶活性检测结果表明,胡杨PeNAC121启动子显著受到NaCl、甘露醇、ABA和4℃低温的诱导表达。由上述结果推测PeNAC121基因与胡杨的逆境胁迫应答密切相关,表明该基因的启动子是一个能够应答多种逆境胁迫的诱导型启动子。本研究为阐明PeNAC121基因在胡杨逆境响应和调控中的作用机制提供理论参考。; 谢望李天静李鑫窈杨丰铭姚银安高永峰; 关键词：逆境响应诱导型启动子

异源表达胡杨PeCPD基因提高烟草对盐、高氮和干旱胁迫的抗性被引量：10: 2017年; 油菜素类固醇(Brassinosteroids,BRs)在调节植物生长发育和提高植物对非生物胁迫的抗性中起着重要作用,CPD(Constitutive Photomorphogenesis and Dwarfism)基因编码一种甾醇类23a羟化酶,在BR的生物合成中发挥着重要作用.本研究克隆胡杨Pe CPD基因的c DNA序列,并利用农杆菌介导法,将Pe CPD基因植物过表达载体p BI121-35S::Pe CPD转化野生型烟草,筛选得到Pe CPD基因过表达的转基因烟草植株,并利用Na Cl、高氮和甘露醇分别对转基因和野生型烟草进行胁迫处理,检测转基因烟草的耐受性和相关的生理生化指标.结果表明:(1)在正常条件下,转基因烟草的鲜重是野生型烟草的1.47倍;(2)在Na Cl、高氮以及甘露醇的胁迫处理下,转基因烟草植株的根长、叶片叶绿素和类胡萝卜素的含量均显著高于野生型植株,抗氧化酶SOD和POD活性以及渗透调节物质脯氨酸、可溶性蛋白和可溶性糖的含量也同样表现为转基因烟草显著高于野生型,而野生型植株的丙二醛(MDA)含量显著高于转基因植株.因此在烟草中异源过表达胡杨Pe CPD基因不但能够增加烟草的生物量,而且能够提高烟草对盐、高氮和干旱胁迫的抵抗能力.; 陈永富王阳冯倩唐海吴英青高永峰; 关键词：烟草盐胁迫干旱

一个逆境诱导启动子SlWRKY31P的克隆及应用: 本发明公开了一个逆境诱导启动子SlWRKY31P的克隆及其应用，属于生物技术和植物基因工程领域，其核苷酸序列包括如下(a)或(b)或(c)的序列：(a)具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；或(b)与a)限定的核苷...; 高永峰姚银安刘继恺欧庸彬陈永富唐海; 文献传递

番茄SlWRKY31基因启动子的克隆与逆境应答模式分析被引量：11: 2018年; 该研究以野生型番茄(Solanum lycopersicum)为材料,采用PCR技术克隆得到了番茄SlWRKY31基因起始密码子ATG上游启动子序列,并利用该启动子驱动GUS基因在野生型番茄中表达,对获得的转基因番茄采用不同胁迫处理后进行GUS染色和定量分析。结果表明:(1)序列分析显示,该启动子全长1 849bp,含有多个与非生物胁迫和激素响应相关的顺式作用元件,主要包括热胁迫响应元件HSE、干旱诱导响应元件MBS、防卫和胁迫响应元件TC-rich repeats、创伤诱导响应元件WUN-motif、脱落酸(ABA)响应元件ABRE和水杨酸(SA)响应元件TCA-element。(2)实时荧光定量PCR结果显示,SlWRKY31基因呈组成型表达模式,且在叶和果实中表达量较高,茎中较低;在NaCl、甘露醇、SA、ABA和42℃高温的胁迫处理下,其表达量显著升高。(3)构建SlWRKY31启动子和GUS基因融合的植物表达载体,并通过农杆菌介导法将其转化野生型番茄,对获得的转基因番茄进行GUS组织化学染色分析结果显示,SlWRKY31基因在番茄的各个组织(根、茎、叶、花、果实和种子)中均有表达,表明SlWRKY31启动子是组成型表达启动子。(4)对转基因番茄在不同胁迫处理后的GUS染色和定量分析显示,SlWRKY31启动子显著受到NaCl、甘露醇、SA、ABA和42℃高温的诱导表达,说明该启动子是一个可以响应多种逆境胁迫的诱导型启动子。; 高永峰杨丰铭李琴中张国燕王丹姚银安刘继恺; 关键词：番茄逆境胁迫

烟草NtNRAMP3.1 基因克隆、表达及Cd转运特性分析被引量：1: 2022年; 【目的】探究烟草(Nicotiana tabacum L.)自然抗性相关巨噬细胞蛋白(Natural resistance associated macrophage proteins,NRAMPs)在金属跨膜转运所起的作用。【方法】克隆NtNRAMP3.1基因,并对其序列和表达模式进行分析,同时通过酵母异源表达对其编码蛋白的Cd转运特性进行研究。【结果】烟草NtNRAMP3.1基因全长1542 bp,编码513个氨基酸残基的蛋白质。氨基酸序列比对和进化树分析发现,NtNRAMP3.1具有11个跨膜结构域,含有NRAMP家族特有的CTM结构域,与拟南芥AtNRAMP3和AtNRAMP4的亲缘关系最近,属于NRAMP家族的第一亚组。表达模式分析表明,NtNRAMP3.1在叶中的表达量高于根,但是其对不同重金属胁迫表现出不同的应答模式。酵母实验发现,异源表达NtNRAMP3.1基因显著提高了酵母细胞中Cd的积累量,增加了酵母对Cd的敏感性。【结论】NtNRAMP3.1基因的表达具有组织特异性,且受到多种重金属胁迫的调控,其编码的蛋白是Cd向内流入的转运蛋白。本研究结果为进一步分析NtNRAMP3.1基因在植物金属离子吸收转运中的功能提供了一定的理论依据。; 陈邦兰龙涛高永峰黄仁华刘继恺; 关键词：烟草 NRAMP 酵母

异源过表达胡杨PeBZR1基因提高烟草对盐胁迫的耐受性被引量：2: 2020年; 为了明确胡杨Pe BZR1基因对盐胁迫的响应,本研究克隆胡杨PeBZR1基因的cDNA序列,利用农杆菌介导法,将过表达载体pBI121-35S::PeBZR1转化野生型烟草,并通过筛选获得过表达T2代的转基因植株。对转基因植株和野生型植株进行以下处理:对照(Control)、100 mmol/L NaCl处理以及200 mmol/L NaCl处理。结果如下:在正常生长条件下,转基因烟草植株的长势更好,其根长和叶总面积较野生型分别增加了28.74%、17.06%;在100 mmol/L Na Cl的处理条件下,转基因烟草的根长和叶总面积较野生型相比没有显著性的差异,但转基因叶片细胞损伤程度、叶片内的H2O2和O2-的积累水平均低于野生型;在200 mmol/L NaCl条件下,转基因烟草根长和叶总面积较野生型相比分别平均增加了15.41%、65.30%,且转基因叶片细胞损伤程度、叶片内的H2O2和O2-的积累水平均显著低于野生型,并表现出较强的耐盐能力。以上结果表明,异源过表达PeBZR1基因可以促进转基因植株在正常条件下的生长,并提高转基因植株对高盐的耐受性。; 张国燕陈子豪李文君刘思琴冯倩姚银安高永峰; 关键词：转基因烟草过表达盐胁迫

一种来源于番茄的干旱和/或高盐诱导启动子SlWRKY8P及其应用: 本发明公开了一种来源于番茄的干旱和/或高盐诱导启动子SlWRKY8P及其应用，属于生物技术和植物基因工程领域，所述启动子SlWRKY8P的核苷酸序列为(a)或(b)或(c)所示；其中(a)具有SEQ ID NO:1所示的...; 高永峰刘继恺姚银安刘燕

烟草氧化胁迫相关基因NtOSA1的克隆表达及亚细胞定位分析被引量：3: 2016年; 植物类蛋白激酶Abc1家族(activity of bc1complex)在植物生长发育及响应非生物胁迫中起着重要的作用。该研究通过将拟南芥AtOSA1蛋白氨基酸序列与烟草转录组数据进行比对,利用巢式PCR技术克隆得到1个烟草氧化胁迫相关Abc1家族基因NtOSA1,NtOSA1与拟南芥AtOSA1基因具有72.89%的一致性。NtOSA1基因开放阅读框长度为2 283bp,编码760个氨基酸,含有典型的ABC1结构域、一个激酶结构域、叶绿体定位信号肽和两个跨膜结构域。采用实时荧光定量PCR技术,对NtOSA1基因在烟草不同组织以及氧化胁迫、盐胁迫等处理下的表达分析表明:NtOSA1基因的表达具有组织特异性,主要在叶片中表达;NtOSA1基因在H2O2和NaCl处理后表达量上升,均在处理后6h达到最大值,分别为处理前的1.95和2.69倍。亚细胞定位结果表明,NtOSA1蛋白定位在细胞叶绿体上,与预测结果一致。研究表明,NtOSA1基因参与了烟草抗氧化胁迫和盐胁迫的响应。; 刘继恺高永峰吴婵娟张林陈彩霞; 关键词：烟草基因克隆亚细胞定位

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