龚奕 作品数:4 被引量:11 H指数:2 供职机构: 重庆市肿瘤研究所 更多>> 发文基金: 重庆市卫生局医学科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
沉默DNAJB11基因对肝癌SMMC7721细胞增殖、周期与凋亡的影响 被引量:1 2017年 目的:研究沉默DNAJ同源B亚家族成员11(DNAJ homolog subfamily B member 11,DNAJB 11)基因表达对人肝细胞癌SMMC7721细胞增殖、周期与凋亡的影响。方法:构建携带有针对DNAJB 11基因的DNAJB11-shRNA重组慢病毒载体pCDH-Puro/DNAJB11-shRNA,并制备重组慢病毒。将具有高效感染力的重组病毒感染SMMC7721细胞。CCK-8法检测被感染后SMMC7721细胞的增殖情况;分别采用实时荧光定量PCR法与蛋白质印迹法检测被感染后,SMMC7721细胞中DNAJB11、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和促凋亡基因caspase-3 mRNA及其蛋白的表达;FCM法检测沉默DNAJB 11基因表达后对SMMC7721细胞的周期和凋亡的影响。结果:成功构建插入DNAJB11-shRNA的重组慢病毒载体pCDH-Puro/DNAJB11-shRNA。CCK-8法检测结果显示,感染携带有DNAJB11-shRNA重组慢病毒后,SMMC7721细胞的增殖被抑制(P<0.05);实时荧光定量PCR法与蛋白质印迹法检测结果证实,DNAJB11-shRNA能有效沉默SMMC7721细胞中DNAJB11 mRNA及其蛋白的表达(P值均<0.05);DNAJB 11基因沉默后,能明显上调caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平,并下调PCNA mRNA及蛋白的表达水平(P值均<0.05)。FCM检测结果表明,沉默DNAJB 11基因的表达可将SMMC7721细胞阻滞于细胞周期的G1期,并能促进其凋亡,差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论:沉默DNAJB 11基因表达可抑制SMMC7721细胞的增殖并促进其凋亡,这可能与下调SMMC7721细胞中增殖相关蛋白PCNA的表达,上调凋亡相关蛋白caspase-3的表达有关。 项颖 李启英 石洋 张曼 黄德鸿 南映瑜 杨涛 肖春燕 王莉 张文军 龚奕 曾建挺 张艳林关键词:细胞增殖 肝癌干细胞的培养、鉴定及CIK对其生长、增殖的影响 被引量:2 2015年 目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)对肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)生长、增殖的影响。方法:用含多种细胞因子(LIF、EGF、b FGF及B27)的无血清培养液(serum-free medium,SFM)诱导SMMC7721人肝癌细胞产生LCSCs,并行LCSCs表面标志CD133、CD90的流式仪(flow cytometry,FCM)检测鉴定与裸鼠致瘤能力观测。以IFN-γ、CD3单克隆抗体(human CD3 monoclonal antibody,h CD3m Ab)与IL-2等诱导肝癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)的悬浮细胞生成CIK。用Transwell培养小室将LCSCs与不同密度的CIK在同一培养体系内以该小室膜分隔培养24、48、72 h,采用CCK-8试剂盒检测CIK对LCSCs生长、增殖的影响。以RT-PCR与Western blot分别检测与CIK共培养的LCSCs的增殖细胞核抗原(proliferating cell unclear antigen,PCNA)基因及其编码蛋白的表达变化。结果:FCM检测显示,LCSCs高表达干细胞表面标志分子CD133、CD90。CCK-8法检测表明,与对照比较,与相同密度的CIK共培养的LCSCs,其生长、增殖减慢,48 h开始变得更加明显(P<0.01)。RT-PCR、Western blot检测显示,CIK能明显下调LCSCs的PCNA基因及其编码蛋白的表达。结论:成功诱导培养并鉴定到LCSCs。肝癌患者的CIK可明显抑制LCSCs的生长、增殖与下调其PCNA基因及其编码蛋白的表达。 杨涛 王宏宇 石洋 李启英 黄德鸿 肖春燕 龚奕 王刚 项颖关键词:肝癌干细胞 增殖 18例HIV感染相关淋巴瘤的临床特点分析 被引量:2 2017年 目的分析18例HIV感染相关淋巴瘤临床特点。方法通过回顾性分析重庆市肿瘤医院2010-2016年收治的HIV感染相关淋巴瘤临床资料,对患者一般情况、淋巴瘤国际预后指数(IPI)评分、CD4^+T淋巴细胞绝对值、血清乳酸脱氢酶(LDH)浓度、B症状、Ann Arbor分期、病变累及部位及病理类型等进行统计分析。结果 18例HIV感染相关淋巴瘤均为确诊为HIV感染的男性患者,平均年龄(48.6±13.97)岁。首发的临床症状主要为体表淋巴结肿大13例(72.22%)。病理诊断包括弥漫大B细胞淋巴瘤9例(50.00%),Burkitt淋巴瘤6例(33.33%),淋巴结边缘区淋巴瘤1例(5.56%),经典型霍奇金淋巴瘤1例(5.56%),霍奇金淋巴瘤1例(5.56%)。患者多表现为隐匿性起病,且诊断时分期较晚,Ⅲ~Ⅳ期患者占绝大多数,为14例(77.8%)。患者入院后根据病情需要接受了EPOCH方案、R-EPOCH方案、CHOP方案、CHOPE方案或ABVD方案等多种联合化疗方案+抗HIV治疗2程后,其中2例完全缓解,12例达部分缓解,3例为病情进展。主要不良反应为转氨酶升高和骨髓抑制。结论 HIV感染相关淋巴瘤总体预后不良,早期诊断和多学科联合积极规范化治疗是改善HIV感染相关淋巴瘤总体生存和生活质量的关键措施。 龚奕 陈锐 李光新 李启英 南映瑜 项颖关键词:HIV感染 淋巴瘤 获得性免疫缺陷综合征 人原发性肝癌相关抗原的蛋白质组学初步研究 被引量:6 2017年 目的检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的相关抗原,并予以验证。方法分别提取15例HCC组织及其癌旁组织总蛋白。Western blot分别检测各总蛋白与其HCC患者自体血清的杂交情况。双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术将15例混合总蛋白中的各蛋白进行分离与染色。图像分析法比对染色胶上HCC组织及其癌旁组织蛋白的表达差异,基质辅助激光解吸/电离飞行时间二级质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization-time-of-flight with two mass analyzers for tandem mass spectrometry,MALDI-TOF MS/MS)技术及生物信息学网络数据库分别对表达差异蛋白予以分析鉴定与检索匹配,免疫组织化学与Western blot分别检测该差异蛋白在人HCC组织及其癌旁组织中的变化情况。结果 2-DE染色胶图像分析比对结果显示,HCC及其癌旁组织蛋白表达差异斑点共90个,MALDI-TOF MS/MS与数据库对其中19个蛋白斑点分析鉴定与检索匹配发现15个蛋白表达上调,4个蛋白表达下调。免疫组织化学与Western blot检测结果显示,与对照比较,上调蛋白中的Dna J同源B亚家族成员11(dna J homolog subfamily B member 11,DNAJB11)在HCC组织中的表达明显增强,下调蛋白中的蛋白酶体亚基α3(proteasome subunit alpha type 3,PSMA3)在HCC组织中的表达则相反。结论人原发性肝癌相关抗原DNAJB11在HCC组织中的表达上调,PSMA3在HCC组织中的表达下调。 王江红 李启英 石洋 黄德鸿 南映瑜 杨涛 肖春燕 王莉 张文军 龚奕 项颖关键词:蛋白组学 相关抗原