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广东地区鱼源大肠埃希菌ESBLs和PMQR流行分布调查被引量：7: 2012年; 从广东地区食用鱼肠道分离鉴定了218株大肠埃希菌,用琼脂稀释法测定218株大肠埃希菌对17种抗菌药物的敏感性,并用PCR方法调查ESBLs和PMQR基因的流行分布情况.对10株β-内酰胺酶(包括ESBLs)和/或PMQR阳性菌株进行了接合转移试验,探讨ESBLs和PMQR基因的传播机制.敏感性测定结果显示:218株大肠埃希菌对17种抗菌药物的耐药率为0.5%～72.5%.在112株氨苄西林耐药菌株中,检测出2种ESBLs基因,分别为blaCTX-M-79和blaCTX-M-14,2株菌中还检测到β-内酰胺酶基因blaLEN-4和blaLEN-17.在80株环丙沙星耐药菌株中,检测到59株为PMQR阳性,分别为qnrB(33株),qnrD(5株),qnrS(21株),aac(6')-Ib-cr(6株).接合转移试验结果表明,ESBLs和/或PMQR基因可同时存在于一个质粒上进行转移.; 汤电张小华付晓平王丽华郭玉芳李健纪雪薇蒋红霞; 关键词：耐药性 ESBLS PMQR

耐环丙沙星患病动物源沙门菌的多重耐药分子特征被引量：1: 2012年; 采用13株耐环丙沙星食品动物源沙门菌进行喹诺酮类作用靶位基因及质粒介导耐药基因的扩增测序、有机溶剂耐受试验、HeLa细胞侵袭试验,探讨其多重耐药的分子特征。结果显示,菌株均携带质粒介导的喹诺酮耐药基因,7株对环丙沙星敏感性降低或低水平耐药(最小抑菌浓度0.125～4μg/mL),靶位基因无突变或gyrA单位点突变及外排泵活性增强;5株对环丙沙星高水平耐药(最小抑菌浓度32～128μg/mL),均在gyrA和parC发生双位点突变及外排泵活性增强,其中4株携带β内酰胺酶blaCTX-M基因。对环丙沙星高水平耐药的沙门菌的侵袭力显著高于敏感菌株。表明患病食品动物源沙门菌中,无论外排能力增强与否,gyrA单位点突变或质粒介导的喹诺酮耐药基因阳性,仅导致沙门菌对环丙沙星的低水平耐药;而外排泵机制联同染色体靶位基因突变可导致菌株对环丙沙星的高水平耐药,往往同时携带blaCTX-M基因;临床分离沙门菌随着对环丙沙星耐药程度的增加侵袭力增强。; 张小华李健任艳娜汪天露孙永学蒋红霞; 关键词：沙门菌

鸡毒支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：19: 2011年; 【目的】建立基于鸡毒支原体种特异性粘附蛋白编码基因pvpA的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据GenBank公布的不同国家和地区鸡毒支原体pvpA基因序列,在高度保守区域设计一对引物。以临床分离鸡毒支原体RC1为模板扩增pvpA基因,将其连接到PMD19-T载体,转化至大肠杆菌DH5α中,经PCR和酶切鉴定并测序验证后得到阳性重组质粒rPvpA90。以rPvpA90为模板建立SYBR Green I荧光定量的标准曲线和溶点曲线,并进行特异性,灵敏性,重复性及临床样本检测试验,评价该方法的可行性。【结果】所建立的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶点曲线特异,相关系数为0.990。最低检测限为72拷贝/20μL,其敏感性比常规PCR至少高100倍;无论是对不同病原DNA单模板还是几种病原DNA混合模板进行扩增,该方法都呈现很好的特异性;重复性试验中,批内和批间变异系数均小于2%,表明该方法重现性好;临床样本的检测结果表明所建立的荧光定量PCR检测方法的检测率明显高于常规PCR方法。【结论】本研究初步建立了基于种特异性基因pvpA的鸡毒支原体荧光定量PCR方法,为养禽场诊断和监测鸡毒支原体病原提供一种新的特异、灵敏的方法。; 周云雷魏飞龙李健张小华蒋红霞; 关键词：种特异性鸡毒支原体实时荧光PCR SYBR

大肠杆菌acrR插入序列对acrAB表达水平及多重耐药性的影响被引量：3: 2013年; 为研究大肠杆菌(E.coli)分离株ED28的acrR基因中777bp插入片段对外排泵AcrAB表达水平及多重耐药性的影响,本研究将野生型acrR通过互补实验导入ED28中得到C-ED28。通过药物的最低抑菌浓度(MIC)测定、有机溶剂耐受性试验和实时定量PCR(qPCR)等方法检测菌株中AcrAB外排泵的活性。通过PCR方法检测ED28和C-ED28喹诺酮耐药决定区(QRDR)的氨基酸突变及携带的质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因。结果显示,临床分离菌株ED28对12种抗生素呈多重耐药表型,而互补菌株C-ED28恢复了对多种药物的敏感性。当能量抑制剂(CCCP)存在时,喹诺酮类和β-内酰胺类药物对ED28的MIC普遍降低,而对C-ED28的MIC保持不变。ED28对染料溴化乙锭(EB)的MIC为512μg/mL,对正己烷和环己烷耐受;而C-ED28对染料EB的敏感性增强,MIC为16μg/mL,对正己烷耐受,对环己烷不耐受。qPCR结果显示,基因acrA和acrB在C-ED28中的表达水平低于亲本菌株ED28,而基因marA在C-ED28中的表达水平高于ED28。靶位突变检测和耐药基因检测结果显示,ED28存在gyrA(Ser83Leu和Asp87Asn)和parC(Ser80Ile)双突变,携带aac(6')-Ib-cr、blaCTX-M-27和blaTEM-13个质粒编码耐药基因;而C-ED28仅存在gyrA(Asp87Asn)一个突变位点,并丢失aac(6')-Ib-cr、blaTEM-1两个基因。; 任艳娜李健甄盼盼付小平刘志杰任金程刘雅红曾振灵蒋红霞; 关键词：耐药性外排泵

食品动物源沙门菌oqxAB基因的检测及水平传播机制研究被引量：6: 2011年; 为了调查食品动物源沙门菌Salmonella oqxAB耐药基因的流行情况和水平传播机制,采用二倍琼脂稀释法测定临床分离的31株沙门菌对常用抗菌药物的敏感性,PCR方法特异扩增耐药基因oqxAB,并对扩增产物克隆测序.通过接合转移试验验证oqxAB基因的水平传播.试验结果表明,31株沙门菌对氨苄霉素的耐药率最高,达64.5%,对氨基糖苷类、氯霉素类、四环素类、氟喹诺酮类的耐药率介于42%～55%之间,对头孢菌素类的耐药率最低,约为20%.31株沙门菌中共检测到12株含有oqxAB基因,检出率为39%.以J53AziR为受体菌进行oqxAB基因阳性菌的质粒接合转移试验,结果得到5株oqxAB基因接合子.接合子的药敏结果显示,除了氟喹诺酮类药物的最低抑菌浓度(MIC)升高外,对链霉素、四环素及氯霉素的耐药性也有不同程度的增加,说明介导链霉素、四环素及氯霉素的耐药基因可能与oqxAB基因随质粒一起转移.; 刘继宋立魏飞龙汤电张静远张小华李健蒋红霞; 关键词：沙门菌最低抑菌浓度质粒

以重组PvpA蛋白作为抗原的鸡毒支原体抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：8: 2011年; 为建立鸡毒支原体(MG)种特异性检测的间接ELISA检测方法,本研究以原核表达的PvpA蛋白作为包被抗原,初步建立了检测MG抗体的间接ELISA检测方法。特异性试验结果表明,重组PvpA蛋白与鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、滑液支原体、大肠杆菌"O"抗原、禽沙门氏菌"O"抗原阳性血清均不发生交叉反应。该方法的批内变异系数小于8%,批间变异系数小于11%,表明具有较好的重复性。采用该检测方法与进口试剂盒对不同省份送检的鸡血清进行检测比较,两者阳性和阴性符合率均达到90%以上。本研究建立的间接ELISA检测方法为MG抗体检测试剂盒的研制奠定了基础。; 周云雷李健魏飞龙张小华蒋红霞; 关键词：鸡毒支原体原核表达间接ELISA

空间位阻对丁胺侧链取代截短侧耳素衍生物鸡毒支原体抑制活性的影响被引量：1: 2012年; 为给截短侧耳素类动物专用抗生素的研发提供试验依据,本试验合成了4种含丁胺侧链的截短侧耳素衍生物,研究了取代基的空间位阻对4种截短侧耳素衍生物鸡毒支原体抑制活性的影响。试验结果表明,化合物1、2的最小抑菌浓度均为0.0125μg/mL,化合物3的最小抑菌浓度为0.25μg/mL,化合物4的最小抑菌浓度为0.5μg/mL。; 王波李健汤有志蒋红霞; 关键词：空间位阻鸡毒支原体

喹诺酮类耐药决定区、外排泵负调控基因对大肠杆菌氟喹诺酮高水平耐药分子机制的影响被引量：6: 2012年; 为了探讨耐喹诺酮类决定区(QRDR)、外排泵负调控基因(acrR、marR和soxR)突变对临床分离株氟喹诺酮(FQs)高水平耐药的影响,本研究对临床分离的18株FQs耐药大肠杆菌(E.coli),采用PCR方法检测QRDR、acrR、marR和soxR的突变情况;通过RT-PCR的方法检测外排泵及膜孔蛋白相关基因的表达水平。结果显示,QRDR的突变主要集中在常规突变GyrA(Ser83Leu和Asp87Asn)和ParC(Ser80Ile),同时也检测出稀有突变ParC Glu84Gly、Glu84Lys、Glu84Val和Glu84Ala,ParE Ser458Ala等。ED28在acrR基因存在777bp插入序列;12株菌(包括ATCC25922)在MarR存在Gly103Ser和Tyr137His双突变,其中EP26和EG42存在插入片段;ED40在SoxR存在Thr38Ser、Gly74Arg氨基酸替换。在多突变药菌株中,AcrAB的表达水平明显升高,OmpC和OmpF表达量降低、甚至缺失。; 任艳娜甄盼盼李健郭玉芳王丽华任君玉张文慧蒋红霞; 关键词：MARR 耐药氟喹诺酮

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李健

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