齐永
- 作品数：16 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项江苏省社会发展科技计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 埃可病毒6型表面特异性抗原的表达及其多克隆抗体的制备
- 目的 在原核细胞中表达埃可病毒6型的表面蛋白VP1,制备其多克隆抗体.方法 筛选VP1抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX-4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2-vp1和p...
- 李素梅齐永徐亭亭潘英李素芹李佳萌陈晨王新国徐艺菲李越希
- 关键词：VP1蛋白包涵体多克隆抗体
- 文献传递
- HSV2 gD2亚单位疫苗配伍不同佐剂的动物免疫研究
- 目的确定HSV2候选亚单位疫苗gD蛋白(gD2)的最佳配伍佐剂、最佳免疫剂量以及免疫程序。方法使用不同佐剂(Alum、Poly I:C及Alum&Poly I:C)配伍不同剂量的gD2蛋白(2μg、5μg、10μg),制...
- 杨彬彬徐亭亭齐永潘英李素芹陈红霞李佳萌尹琼邵银秀郭峻罗霄孙瑜李越希
- 关键词：GD亚单位疫苗
- 重组人组织因子的表达纯化及复性研究
- 2016年
- 利用基因工程技术表达重组人组织因子(Human tissue factor,h TF),并进行纯化及复性研究。构建插入目的基因的p ET28a(+)-h TF重组质粒,转化到大肠杆菌中,获得重组菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)诱导其表达,菌体经超声裂解、离心收集包涵体,用8 mol/L尿素溶解包涵体、Ni-NTA纯化,采用透析复性和柱上复性两种方式获得复性的重组人HTF。柱上复性和透析复性均获得具有生物活性的重组人h TF,但柱上复性的复性率为72%,明显高于透析复性的复性率16%。成功构建高表达人重组h TF的工程菌,通过柱上复性获得高纯度具有生物活性的重组人h TF蛋白,为h TF的研究奠定了基础。
- 徐艺菲李佳萌齐永陈红霞潘英李素芹李素梅陈晨王新国张玉彬李越希
- 关键词：纯化复性
- 类弹性蛋白ELP在重组蛋白表达与纯化中的应用研究
- 目的：类弹性蛋白ELP是一些人工合成的由五种氨基酸重复排列组成的五肽重复序列单元(VPGXG).ELP具有温度诱导的可逆相变特性,当温度升高至相变温度时ELP就能发生聚集,当温度降低至相变温度以下时,ELP在低温环境中又...
- 林煜齐永李素芹陈红霞沈万鹏饶继先李晓玲孙瑜邓艺李越希
- 关键词：可逆相变表达纯化
- HSV2亚单位疫苗gC2免疫方案的动物实验研究
- 单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus,HSV）是危害人类健康的常见病毒,其感染发病率高,复发感染率高,并且形成终身潜伏感染。目前国内外没有疫苗。HSV有1型和2型两种,HSV2感染主要引发生殖器感染,可...
- 徐亭亭杨彬彬齐永潘英李素芹陈红霞李佳萌郭峻罗霄尹琼邵银秀孙瑜李越希
- 关键词：单纯疱疹亚单位疫苗疗效评价
- 文献传递
- 肺炎衣原体外膜蛋白Omp85的重组表达及其复性条件研究被引量：2
- 2015年
- 肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,CPn)可致人急性呼吸道疾病,是引起社区获得性肺炎(Community acquired pneumonia,CAP)的主要病原体之一。Omp85蛋白是CPn上一个重要的、与其粘附和入侵宿主相关的表面蛋白,也是肺炎衣原体肺炎病的候选诊断分子和候选亚单位疫苗,因此成功表达与纯化复性的重组Omp85蛋白对揭示CPn致病机制,研发肺炎衣原体肺炎诊断试剂及疫苗具有重要的意义。该研究通过生物信息学方法分析并选取Omp85表位富集区,优化并化学合成其核苷酸序列,构建重组载体并转化大肠杆菌,使用SDS-PAGE方法筛选高表达工程菌并分析其表达形式,结果发现目的蛋白主要以包涵体形式表达。使用镍柱亲和层析复性、葡聚糖凝胶层析复性、稀释复性和透析复性4种方法对目的蛋白进行复性,均获得复性蛋白,葡聚糖凝胶层析复性方法对Omp85的复性效果优于其它3种。该研究为进一步揭示CPn致病机制以及研发肺炎衣原体肺炎的诊断试剂和疫苗奠定了基础。
- 张素芬齐永潘英李素芹李佳萌李素梅徐亭亭王旻李越希
- 关键词：肺炎衣原体蛋白表达蛋白复性
- 埃可病毒6型表面特异性抗原VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备
- 2016年
- 目的原核表达埃可病毒6型表面特异性蛋白VP1,并制备其多克隆抗体。方法筛选VP1蛋白氨基酸序列中抗原性强的片段,优化基因序列,分别构建重组表达质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1。将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行15%SDS-PAGE鉴定。将融合蛋白VP1-GST及VP1-His分别用Glutathione resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的VP1-His融合蛋白作为免疫原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1构建正确。VP1-GST和VP1-His融合蛋白的相对分子质量分别为38 000和19 000,两种融合蛋白分别以可溶性蛋白和包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的60%和30%,纯化后的纯度均>90%。兔抗VP1血清效价为1∶320 000,可与融合蛋白VP1-GST和VP1-His发生特异性结合。结论成功原核表达了融合蛋白VP1-His和VP1-GST,且VP1-His具有良好的免疫原性,其制备的多克隆抗体的特异性较好,为埃可病毒快速检测技术的建立奠定了基础。
- 李素梅齐永潘英李素芹李佳萌徐亭亭陈晨王新国徐艺菲李越希
- 关键词：VP1蛋白原核细胞多克隆抗体
- 腺病毒抗原表位嵌合蛋白的原核表达及其免疫原性被引量：1
- 2017年
- 目的设计含有人腺病毒(human adenovirus,HAd V)3、7、11、14及55型抗原表位的嵌合蛋白,利用大肠埃希菌进行原核表达,并检测其抗原性及免疫原性。方法对5种型别HAd V的六邻体蛋白氨基酸序列进行分析,筛选出其中具有强抗原性的片段,片段之间用2个甘氨酸和1个丝氨酸进行连接,形成1个多抗原片段串联的嵌合蛋白。优化嵌合蛋白的基因序列并化学合成全长基因,克隆至原核表达载体p ET28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),筛选高表达嵌合蛋白的工程菌。用High Affinity Ni-NTA resin纯化该嵌合蛋白,并将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,间接ELISA法检测嵌合蛋白的抗原性及免疫原性。结果成功构建了高表达嵌合蛋白的工程菌,表达的嵌合蛋白相对分子质量约55 000,表达量达95%;破菌上清中嵌合蛋白的纯度较高,纯化后纯度在90%以上。嵌合蛋白免疫小鼠4次后,小鼠抗血清效价达1∶320 000。制备的腺病毒抗原表位嵌合蛋白能有效检测血清中腺病毒3、7、11、14及55型抗体,且能有效刺激机体产生针对各型别腺病毒抗原表位的抗体。结论表达制备的包含5种型别HAd V抗原表位的嵌合蛋白具有较好的抗原性及免疫原性,为进一步研制腺病毒疫苗、单克隆抗体及诊断试剂奠定了基础。
- 王新国齐永潘英李素芹李佳萌陈红霞李素梅陈晨徐艺菲张玉彬李越希
- 关键词：人腺病毒抗原表位嵌合蛋白抗原性免疫原性
- HSV2亚单位疫苗gC2免疫方案的动物实验研究
- 单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)是危害人类健康的常见病毒,其感染发病率高,复发感染率高,并且形成终身潜伏感染。目前国内外没有疫苗。HSV有1型和2型两种,HSV2感染主要引发生殖器感染,可...
- 徐亭亭杨彬彬齐永潘英李素芹陈红霞李佳萌郭峻罗霄尹琼邵银秀孙瑜李越希
- 单纯疱疹病毒2型表面糖蛋白D亚单位疫苗免疫佐剂的筛选及免疫方案优化被引量：1
- 2018年
- 目的筛选单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)表面糖蛋白(glycoprotein)D2(g D2)亚单位疫苗的免疫佐剂,对免疫剂量、免疫次数等免疫方案进行优化。方法使用Alum佐剂、Poly I:C佐剂及Alum+Poly I:C混合佐剂,分别配伍不同剂量(2、5、10μg)的gD2蛋白,共制成9种注射制剂,经后腿肌肉注射免疫9组雌性BALB/c小鼠,分别于初次免疫后第28和42天各加强免疫1次,于初次免疫后28 d及第2、3次免疫后14 d,经眼眶静脉窦取血,分离血清,ELISA法检测特异性抗g D2抗体效价;脱颈椎处死小鼠,分离研磨脾脏后,获得脾细胞,加入gD2抗原刺激培养71 h后,收集细胞上清,应用CBA试剂盒测定细胞因子(IL-2、IFNγ、TNF-α)浓度;确定最佳免疫方案。结果初次免疫后28 d,各组总抗体效价偏低,混合佐剂(Alum+Poly I:C)配伍10μg抗原组小鼠血清抗体效价最高,但动物个体差异大。第2次免疫后14 d,各组小鼠血清抗体效价较第1次免疫显著增高;佐剂及抗原剂量对抗体效价影响显著,其中Poly I:C佐剂配伍10μg抗原组小鼠抗体效价及细胞因子分泌水平综合最高。末次免疫后14 d,小鼠血清中抗体效价较第2次免疫再次升高,动物个体间效价差异缩小,混合佐剂组效价最高;各组细胞因子分泌水平较第2次免疫略有增高,混合佐剂配伍2μg抗原组分泌高水平的IL-2、IFNγ、TNF-α。结论小鼠免疫模型中,使用Alum+Poly I:C混合佐剂较使用任一单独佐剂可产生最佳免疫效果,最佳免疫组为混合佐剂配伍2μg抗原组,最佳免疫次数为3次,第1和2次免疫间隔28 d,第2和第3次免疫间隔14 d,最佳免疫剂量为2μg/只小鼠。
- 徐亭亭齐永潘英李素芹陈红霞李佳萌杨彬彬尹琼邵银秀郭峻罗霄李越希
- 关键词：疱疹病毒2型亚单位疫苗佐剂体液免疫
