侯艳军
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：内蒙古医科大学附属医院更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金内蒙古自治区科技厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- CDC25 B与14-3-3相互作用的研究被引量：1
- 2016年
- 有研究表明在肿瘤发生发展的过程中，癌细胞的有丝分裂失控是肿瘤发生的主要原因。因此，对细胞分裂调控机制的研究成为目前研究的热点。其中细胞分裂周期25 B （ cell division cycle 25 B， CDC25B）和14-3-3是与细胞分裂有着密切关系的调控子。目前研究已经发现PKA／CDC25B／MPF （ CDC2-cyclinB1）和PKA／CDC25B／14-3-3／MPF是调控细胞有丝分裂的两条重要信号转导途径。蛋白激酶A （ pro-tein kinase A， PKA）是一种环磷酸腺苷（ cyclic adenosine monophosphate， cAMP）依赖性蛋白激酶，可以通过磷酸化下游的靶蛋白，抑制靶蛋白正常发挥作用，从而发挥调节作用。实验研究发现， PKA可以通过磷酸化CDC25B某些位点的丝氨酸残基，使CDC25B处于磷酸化状态，不能使成熟促进因子（ maturation pro-moting factor， MPF）的催化亚基细胞分裂周期2蛋白（cell division cycle 2， CDC2）第15位酪氨酸脱磷酸，因而不能激活MPF，使细胞分裂发生阻滞，不能发生G2／M的转化。14-3-3可以通过CDC25B／14-3-3／MPF途径调节有丝分裂，14-3-3通过结合已经发生磷酸化的CDC25 B的氨基酸（丝氨酸或者苏氨酸）残基，阻止CDC25B进入细胞核，从而引起细胞分裂的阻滞畅这样也就提示可以将14-3-3作为靶位点进行靶向治疗，治疗肿瘤疾病。
- 侯艳军孟峻
- 关键词：CDC25BMPF肿瘤
- 小鼠14-3-3ε蛋白基因的克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2015年
- 目的构建小鼠14-3-3ε真核表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA-14-3-3ε,并观察其在真核细胞中的表达。方法通过反转录-聚合酶链反应从小鼠肝组织中获得编码14-3-3ε的cDNA,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1-ZEO(+)中,经酶切和测序鉴定正确后,应用脂质体转染HEK293细胞,并通过蛋白免疫印迹检测细胞内14-3-3ε的表达。结果构建了真核表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA-14-3-3ε,将其转染HEK293细胞48h后,蛋白免疫印迹检测到细胞内14-3-3ε的表达。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA-14-3-3ε,为研究14-3-3ε在小鼠卵母细胞和小鼠-细胞受精卵G2/M转换中作用的研究奠定了基础。
- 孟峻侯艳军唐韬张永梅刘珊刘洋呼格吉乐
- 关键词：HEK293细胞真核表达载体
- 14-3-3ε蛋白在小鼠卵母细胞减数分裂恢复过程中对Cdc25B定位的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨14-3-3ε蛋白在小鼠卵母细胞减数分裂恢复过程中对Cdc25B定位的影响,为阐明14-3-3ε蛋白对小鼠卵母细胞发育的调控机制奠定基础。方法:采用超排卵方法获得3周龄昆明系雌性小白鼠生发泡(GV)期卵母细胞分为未注射组、control siRNA注射组和14-3-3εsiRNA注射组。构建pmax-FP-Red-HA-14-3-3ε表达载体。间接免疫荧光技术检测14-3-3ε蛋白和Cdc25B在小鼠卵母细胞中的定位;直接免疫荧光技术观测14-3-3ε蛋白和Cdc25B蛋白在小鼠卵母细胞中的亚细胞定位;利用显微注射方法将14-3-3εsiRNA注射入GV期卵母细胞中,相差显微镜下观测卵母细胞的形态表现,计算卵母细胞的生发泡破裂(GVBD)发生率;Western blotting法检测卵母细胞中14-3-3ε蛋白的表达和Cdc2-pTyr15蛋白的相对表达水平;放射自显影检测卵母细胞中成熟促进因子(MPF)的活性。结果:间接和直接免疫荧光实验,野生型Cdc25B能与14-3-3ε蛋白共定位于细胞质;在GVBD前期,Cdc25B由胞浆穿梭进入细胞核。当Cdc25B蛋白的第321位丝氨酸突变为丙氨酸时,14-3-3ε蛋白的表达水平降低,Cdc25B的胞浆定位被取消。未注射组、control siRNA注射组卵母细胞在显微注射24h后均未发生GVBD,GVBD发生率组间比较差异无统计学意义(P>0.05);14-3-3εsiRNA注射组在显微注射后22和24h卵母细胞的GVBD发生率均高于未注射组和control siRNA注射组(P<0.01),显微注射后24h卵母细胞到达第2次减数分裂中期(MII)的比例高于未注射组和control siRNA注射组(P<0.01)。结论:在小鼠卵母细胞减数分裂恢复过程中,Cdc25B的Ser321位点可能是14-3-3ε蛋白调控Cdc25B细胞内定位的具体作用位点。
- 孟峻侯艳军刘珊樊淑珍韩艳秋
- 关键词：CDC25B卵母细胞亚细胞定位
- 细胞分裂周期25磷酸化酶家族与肿瘤的研究进展被引量：2
- 2016年
- 近年来,恶性肿瘤的发病率呈现上升趋势,肿瘤问题是全世界范围的棘手问题,也是目前主要病死原因之一,已成为严重危害人类生命健康、制约社会经济发展的一大类疾病。因此对肿瘤的研究十分关注。细胞分裂周期25（CDC25）是调控细胞周期重要的调节子,CDC25家族中任何一个异构体异常都会导致细胞分裂异常,甚至造成细胞无限增殖.
- 侯艳军孟峻
- 关键词：细胞分裂肿瘤细胞
- 14-3-3ε和Cdc25B在小鼠卵母细胞生发泡期阻滞中的作用被引量：4
- 2016年
- 目的:研究14-3-3ε和Cdc25B对小鼠卵母细胞生发泡(GV)期阻滞作用的影响,为阐明蛋白激酶A/Cdc25B/14-3-3ε通路在小鼠卵母细胞GV期阻滞中发育调控机制奠定基础。方法:在体外将表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA14-3-3ε、pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-WT、pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-S321A和pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-S321D转录成mRNA。超排卵方法获得小鼠GV期卵母细胞,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、14-3-3εmRNA单独注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-WT(野生型)mRNA共注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321D(模拟磷酸化型)mRNA共注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321A(突变型)mRNA共注射组,收集各组母卵细胞后采用Western blotting法检测外源性14-3-3ε和Cdc25B蛋白表达及Cdc2-Tyr15的磷酸化状态;相差显微镜观察卵母细胞的形态学变化并计数生发泡破裂(GVBD)率。结果:未注射组、TE缓冲液注射组、14-3-3εmRNA单独注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-WT(野生型)mRNA共注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321D(模拟磷酸化型)mRNA共注射组在显微注射后20h均未发生GVBD(P>0.05);14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321A(突变型)mRNA共注射组在显微注射后1、2和3h卵母细胞的GVBD率分别为(5.00±0.68)%、(62.00±3.56)%和(100.00±0.00)%,显微注射后20h到达第2次减数分裂中期(MII)的比例为(79.00±2.80)%,与未注射组和TE缓冲液注射组比较,GVBD率和到达MII的比例均显著升高(P<0.01)。结论:14-3-3ε通过Cdc25B的321位丝氨酸磷酸化和脱磷酸化调控卵母细胞由GV期向GVBD的过渡。
- 孟峻侯艳军张永梅呼格吉乐韩艳秋
- 关键词：CDC25B卵母细胞显微注射
- 小鼠卵母细胞中14-3-3蛋白亚型的表达被引量：2
- 2015年
- 目的对小鼠卵母细胞生发泡期(GV)、生发泡破裂期(GVBD)的14-3-3蛋白亚型表达进行鉴定。方法RT-PCR法检测GV、GVBD期卵母细胞中14-3-3蛋白7个亚型的mRNA水平,蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测其蛋白表达水平。结果检测了7个14-3-3亚型(β,γ,ε,σ,ζ,τ和η)mRNA的表达水平,结果显示,在GV期只有14-3-3β和14-3-3ε两个亚型表达,并且14-3-3εmRNA水平显著高于14-3-3β(P<0.01)。在蛋白水平上,在小鼠卵母细胞GV期和GVBD期均检测到14-3-3ε亚型蛋白表达,未检测到14-3-3β蛋白表达。结论 14-3-3蛋白ε亚型在小鼠卵母细胞GV、GVBD期均稳定表达。
- 孟峻侯艳军张永梅呼格吉乐刘洋宿瑞俊
- 关键词：卵母细胞
