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高鹏: 作品数：11 被引量：21H指数：3; 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划吉林省科技发展计划基金“重大新药创制”科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学理学更多>>

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一种鸡痘病毒载体穿梭质粒及其应用: 本发明提供了一种鸡痘病毒载体穿梭质粒pTGP3，其包括：重组臂TKL和TKR、双向启动子PE/L、荧光蛋白表达盒、抗性标记基因和复制起点ori，在所述双向启动子PE/L上下游分别具有多克隆位点MCSL和MCSR、在所述荧...; 金宁一李霄李昌鲁会军田明尧金扩世陈漉刘妍高鹏杨恩成

一种双特异抗肿瘤重组腺病毒及其构建方法和应用: 本发明提供了一种双特异抗肿瘤重组腺病毒，其包括腺病毒载体和引入其中的表达盒，所述腺病毒载体的复制必须基因突变，所述表达盒包括由肿瘤特异性启动子与E1a基因组成的表达盒和由真核启动子与Apoptin基因组成的表达盒。本发明...; 金宁一李霄李昌鲁会军田明尧金扩世陈漉刘妍高鹏杨恩成; 文献传递

一种鸡痘病毒载体穿梭质粒及其应用: 本发明提供了一种鸡痘病毒载体穿梭质粒pTGP3，其包括：重组臂TKL和TKR、双向启动子PE/L、荧光蛋白表达盒、抗性标记基因和复制起点ori，在所述双向启动子PE/L上下游分别具有多克隆位点MCSL和MCSR、在所述荧...; 金宁一李霄李昌鲁会军田明尧金扩世陈漉刘妍高鹏杨恩成; 文献传递

一种双特异抗肿瘤重组腺病毒及其构建方法和应用: 本发明提供了一种双特异抗肿瘤重组腺病毒，其包括腺病毒载体和引入其中的表达盒，所述腺病毒载体的复制必须基因突变，所述表达盒包括由肿瘤特异性启动子与E1a基因组成的表达盒和由真核启动子与Apoptin基因组成的表达盒。本发明...; 金宁一李霄李昌鲁会军田明尧金扩世陈漉刘妍高鹏杨恩成

抗肿瘤双特异免疫导向治疗制剂CAtin的表达及活性分析被引量：7: 2009年; 结合生物信息学方法与已知癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单链抗体(Single chainFv fragment,scFv)核苷酸序列,经分子设计和密码子优化后,通过化学方法合成CEA二硫键稳定性单链抗体(Disulfide stabilized single chain Fv fragments,scdsFv)基因片段.将凋亡素基因(Apoptin)通过一段柔性连接肽(Linker)连接在CEA scdsFv基因下游,并克隆入大肠杆菌表达载体质粒pET28a,转化BL21感受态菌后经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导,表达融合蛋白CAtin.SDS-PAGE和Western-Blot分析表明,目的蛋白得到良好表达,经条件优化后表达量最高可达44.1 mg/L.融合蛋白经分步洗涤法和谷胱甘肽对表达的目的蛋白进行初步纯化和复性后,利用人肝癌细胞(HCC)对所制备融合蛋白进行亲和力测定、细胞结合活性测定和特异性细胞杀伤活性分析.结果显示,所制备融合蛋白不仅能够有效地与上述肿瘤细胞结合,并对其具有明显的杀伤活性,表明成功制备了具有特异性识别和特异性杀伤活性的双特异抗肿瘤免疫导向制剂.; 李霄金宁一李昌田明尧陈漉贾鹏刘立明刘妍高鹏; 关键词：癌胚抗原凋亡素基因原核表达

含新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组腺病素的构建及鉴定被引量：4: 2009年; 目的：构建表达新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶（Hemagglutinin—neuramidinase，FIN）基因的重组腺病毒，为进一步研究HN基因对消化道肿瘤的抑制作用及分子机制建立基础。方法：用BamHI和XbaⅠ双酶切质粒pVHN，将获得的HN基因片段连接入穿梭质粒pacAd5 CMV K-N pA，构建含HN基因的穿梭质粒pacAd5-HN。利用PacI单酶切对pacAd5-HN和腺病毒基因组质粒（pAd5）进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞，分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定，并测定所获得重组病毒的滴度。结果：所构建重组病毒可有效表达HN基因，表达产物分子量约为63kD，重组病毒滴度为10^8～10610PFU／ml。结论：成功构建含HN基因的重组腺病毒，所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求。; 陈漉金宁一李霄刘立明贾鹏刘妍高鹏陆蕴松李明迟宝荣; 关键词：NDV HN基因重组腺病毒抗肿瘤

含Apoptin基因重组腺病毒的构建及鉴定被引量：2: 2008年; 目的:构建携凋亡素(Apoptin)基因重组腺病毒,为进一步研究Apoptin基因抗肿瘤作用分子机制建立基础.方法:利用BamHⅠ和SpeⅠ双酶切质粒pVAX1-Apoptin,获得Apoptin片段并连接入pacAd5 CMV K-N pA,构建含Apoptin基因的穿梭质粒pacAd5-Apoptin.利用PacⅠ单酶切对pacAd5-Apoptin和腺病毒基因组质粒(pAd5)进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞,分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:所构建重组腺病毒中的Apoptin基因得到了正确转录,表达产物的相对分子质量约为13kDa,与CVA阳性对照一致;所获得重组腺病毒可有效表达Apoptin蛋白,该蛋白与CAV阳性血清具有反应原性,重组病毒滴度为1011PFU/L.结论:成功构建含Apoptin基因的重组腺病毒,所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求.; 陈漉金宁一李霄刘立明贾鹏刘妍高鹏陆蕴松迟宝荣; 关键词：腺病毒载体逆转免疫印迹法

表达鸡新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因的重组腺病毒对肝癌细胞HepG-2的抑制作用被引量：6: 2010年; 目的探讨表达鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的重组腺病毒Ad-HN对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用。方法应用Ad-HN感染HepG-2细胞,采用MTT法检测Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制作用;AnnexinV染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡;AO/EB染色法和DAPI染色法对Ad-HN感染的肿瘤细胞及细胞核进行形态学观察;底物显色法检测Caspase1、Caspase3、Caspase6和Caspase8活性的变化。结果Ad-HN能够有效抑制HepG-2细胞的增殖,当感染剂量为100MOI,作用时间为48h时,Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制率达峰值(17.20%～35.04%);AnnexinV染色结果显示,Ad-HN感染48h后HepG-2细胞凋亡率为29.39%;Ad-HN感染导致HepG-2细胞呈现细胞浓缩、细胞核皱缩进而碎裂等凋亡特征;Ad-HN感染可显著上调HepG-2细胞的Caspase酶活性。结论Ad-HN能够诱导HepG-2细胞凋亡,并对HepG-2细胞产生抑制效应。; 温中梅李霄刘妍高鹏阚式绂王卓越王宇航彭丽萍金宁一; 关键词：新城疫病毒重组腺病毒肝癌抗肿瘤作用

检测猪粪便中基因4型戊型肝炎病毒的实时荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：3: 2010年; 针对基因4型戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)基因组ORF3设计特异性引物和探针,建立了一套TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法。评价了该方法的准确性和灵敏性,同时与常规RT-PCR和巢式RT-PCR方法进行了对比分析。结果表明,生成的标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数(r2)为0.994,斜率为-3.312,PCR效率为100%。组内和组间重复性试验相同稀释度标准质粒Ct值之间差异均不显著,并且能够准确的从HEV阳性猪粪便样品中检测到基因4型HEV RNA,具有较好准确性。可检测到戊型肝炎病毒数量为(1.7×101)copies,比普通RT-PCR的灵敏度高100倍,比Nested RT-PCR高10倍。; 贾鹏金宁一李霄朱光泽刘妍高鹏徐晓红杨恩成孟日增阚式绂; 关键词：戊型肝炎病毒 RT-PCR

实验室内痘苗病毒的危险性分析: 痘苗病毒(Vaccinia Virus)在实验室研究中被广泛使用。痘苗病毒非高度减毒株对人类来说具有致病性,在美国目前形势下,操作痘苗病毒非高度减毒株的实验室人员被推荐使用生物安全二级实验室设施。尽管这样,实验室相关的痘...; 阚式绂金宁一李霄刘妍高鹏徐晓红贾鹏温中梅; 关键词：痘苗病毒预防接种感染病例 TK基因; 文献传递

高鹏

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