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Rab蛋白调控巨噬细胞中TLR9信号转导通路的研究: TLRs是一类重要的模式识别受体,天然免疫细胞通过识别病原微生物中保守的病原体相关分子模式,产生细胞因子和趋化因子,启动天然免疫应答,从而构成了机体免疫反应的第一道防线。然而,TLRs的活化异常或者过分活化,可能使自身免...; 王娜; 关键词：RAB5A CPG; 文献传递

Rab7真核表达载体的构建及其在小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞中的表达被引量：1: 2012年; 目的构建Rab7的真核表达载体,研究其在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达。方法 RT-PCR方法分析Rab7在组织和细胞中的表达。以RAW264.7细胞的cDNA为模板,根据GenBank公布的小鼠Rab7全长序列设计引物,扩增Rab7基因的开放阅读框。将其与真核表达载体pcDNA3.1(-)连接,构建pcDNA-Rab7重组质粒。用脂质体将Rab7真核表达载体瞬时转染RAW264.7细胞,RT-PCR和Western blot法鉴定Rab7的过表达。结果 Rab7重组载体测序结果与GenBank中报道的Rab7序列的同源性为100%。RT-PCR和Western blot结果显示Rab7真核表达载体瞬时转染RAW264.7细胞后,Rab7表达显著增高。结论成功构建了Rab7真核表达载体。为今后研究Rab7在巨噬细胞中的功能奠定了基础。; 蔡富娟谢基明康鸿斌孙晓琳王娜李云旭王玉珍; 关键词：巨噬细胞真核表达载体过表达

Rab5a的组织表达分析及其真核表达载体的构建: 2013年; 目的:观察小鼠各脏器中Rab5a表达情况,并构建Rab5a真核表达载体并验证其表达情况。方法:采用RT-PCR和Real-time PCR方法检测Rab5a在小鼠组织中的表达。以小鼠巨噬细胞RAW264.7的cDNA为模板,根据GenBank中公布的小鼠Rab5a全长序列设计引物,扩增Rab5a的开放阅读框。将目的基因与真核表达载体pcDNA3.1/Flag(-)B连接,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆,酶切鉴定后测序。将Rab5a真核表达载体转染RAW264.7细胞,RT-PCR及Real time PCR检测Rab5a表达水平。结果:在小鼠的心、肝、肺、肾、脾、睾丸、小肠和结肠中均有Rab5a表达,在脾和小肠中的表达量最高。Rab5a真核表达载体测序的结果显示与GenBank中报道的序列的同源性为100%。用Rab5a真核表达载体转染RAW264.7后Rab5a的表达量显著高于对照质粒转染细胞。结论:Rab5a广泛表达于小鼠各组织。我们成功构建了Rab5a真核表达载体,并在RAW264.7中成功表达。; 王娜谢基明孙晓琳宋亮王玉珍; 关键词：RAB5A 真核表达载体转染

Rab7负向调控巨噬细胞中CpG诱导的细胞因子的表达被引量：3: 2012年; 目的:研究Rab7过表达及失活突变(Rab7T22N)对CpG刺激的RAW264.7巨噬细胞中分泌细胞因子的影响。方法:采用RT-PCR和Real-time PCR检测RAW264.7细胞中Rab7在CpG刺激下表达模式。将Rab7真核表达质粒及失活突变质粒Rab7T22N通过脂质体法转染RAW264.7细胞,G418稳定筛选,Western法鉴定表达效果。用CpG刺激稳定表达Rab7的RAW264.7细胞系,RT-PCR和Real-time PCR检测细胞因子IL-6、IL-1β、IFN-β的表达量变化。结果:CpG刺激RAW264.7后,Rab7 mRNA表达水平逐渐增高,在8小时达到高峰,表达增高近4倍。Rab7过表达后,CpG刺激后产生的IL-6、IL-1β、IFN-β显著降低。巨噬细胞中Rab7失活突变后,在CpG刺激后IL-6、IL-1β、IFN-β的表达又显著增加。结论:CpG促进RAW264.7巨噬细胞中Rab7 mRNA的表达,Rab7抑制了CpG刺激的巨噬细胞中IL-6、IL-1β、IFN-β的表达,该抑制作用的发挥与其酶活性的GTP结合有关。该研究为进一步阐明Rab7在CpG/TLR9信号通路中的作用奠定了基础。; 王娜王玉珍万永青谢基明康鸿斌刘春霞; 关键词：CPG RAW264.7细胞

Rab7基因沉默对LPS活化的巨噬细胞中NO/iNOS的影响被引量：1: 2011年; 目的:研究Rab7基因沉默后对LPS刺激的巨噬细胞系RAW264.7表达NO/iNOS的影响。方法:设计并化学合成三对靶向于Rab7基因的干扰RNA:siRNA1、siRNA2、siRNA3。应用脂质体法将siRNA瞬时转染RAW264.7细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测转染后Rab7的沉默效果。通过MTT法分析瞬时转染siRNA后RAW264.7细胞的生长特性。以LPS刺激Rab7基因沉默后的RAW264.7不同时间,检测NO和iNOS的表达量变化。结果:与对照相比,转染Rab7干扰序列siRNA3后,Rab7蛋白水平表达最低,Real-time PCR的结果显示,Rab7的mRNA水平降低50%(P<0.05)。Rab7基因沉默后48小时显著促进了巨噬细胞RAW264.7的生长(P<0.01)。Rab7干扰后,LPS刺激RAW264.7细胞12小时NO的表达显著增高(P<0.05)。RT-PCR的结果和Real-time PCR的结果证实,Rab7干扰后iNOS基因mRNA的表达显著高于对照(P<0.01)。结论:巨噬细胞RAW264.7中转染siRNA3沉默Rab7基因的效果最好。Rab7沉默后促进了LPS活化的巨噬细胞中NO和iNOS的表达。该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础。; 刘帅谢基明王玉珍宋亮王娜李云旭孙晓琳; 关键词：脂多糖 SIRNA 诱导型一氧化氮合成酶一氧化氮

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王娜