卢晶
- 作品数：16 被引量：23H指数：3
- 供职机构：首都医科大学附属北京同仁医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京同仁医院院科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- β位淀粉样前体蛋白裂解酶2基因敲除斑马鱼动物模型的构建及其初步应用
- 2015年
- 目的构建β位淀粉样前体蛋白裂解酶2(β-site APP-cleaving enzyme 2,BACE2)基因敲除斑马鱼动物模型并及其初步探索其应用。方法运用CRISPR/Cas9技术,在斑马鱼中设计针对靶点的gRNA,使之诱导靶点突变,经测序鉴定得到突变体。结果BACE2纯合突变体在早期部分无法存活,RT-PCR结果显示BACE2基因在斑马鱼的早期发育中持续表达。结论 BACE2基因敲除的斑马鱼动物模型将为进一步研究BACE2基因在斑马鱼胰腺发育中的作用和针对糖尿病的药物靶点筛选提供有效工具。
- 卢晶吴谦谢荣荣仇海燕程呈杨金奎
- 关键词：基因敲除斑马鱼
- 基于CRISPR/Cas9研究RFX6对斑马鱼胰腺发育的影响被引量：4
- 2015年
- 目的构建RFX6基因敲除斑马鱼动物模型及初步探究RFX6对斑马鱼胰腺发育的影响。方法应用CRISPR/Cas9技术,设计针对靶点的gRNA,诱导靶点突变,经测序鉴定得到突变体。结果成功构建了RFX6基因敲除斑马鱼动物模型,初步研究发现RFX6纯合突变体生长发育迟滞、体型瘦小、呈现糖尿病消瘦体型并且不能产生后代。结论 RFX6在斑马鱼胰腺的发育中占据重要地位,是控制斑马鱼胰腺发育的关键因子。
- 程呈吴谦卢晶仇海燕李倩杨金奎
- 关键词：基因敲除斑马鱼胰腺发育
- 增殖期糖尿病视网膜病变的血清代谢组学研究被引量：11
- 2020年
- 目的采用代谢组学检测技术,探索增殖期糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)的“代谢图谱”及其相关的发病机制。方法从1024名2型糖尿病患者中,按照性别、年龄组间匹配的原则,选择42例患者分为PDR组和糖尿病病程10年以上且眼底完全正常(non-diabetic retinopathy,NDR)的对照组,每组各21例。应用液相色谱-质谱技术,对受试者血清代谢物进行检测,获取代谢谱。应用单维、多维统计学方法分析PDR组与NDR组之间的差异代谢物以及相关的代谢通路。结果PDR组与NDR组患者血清样本中共鉴定出136个差异代谢物质,其中包括有机酸(78%)、有机氮化合物(4%)、脂类及类脂分子(3%)等。这些代谢差异物在30条KEGG通路中富集,其中3条通路显著富集(P<0.05),分别为硫代谢、鞘脂代谢以及半胱氨酸和蛋氨酸代谢。结论PDR组与NDR组患者相比具有独特的代谢特征,硫代谢、鞘脂代谢以及半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路显著富集。这些特征的揭示可能有助于探索新的糖尿病视网膜病变的发病机制。
- 朱晓蓉杨芳远卢晶卢晶杨光燃曹曦冯建萍杨光燃
- 关键词：2型糖尿病增殖期糖尿病视网膜病变代谢组学
- KCNH6基因肝脏特异性敲除小鼠的构建及其初步应用
- 2020年
- 目的构建KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠,并监测其肝脏血脂变化。方法运用Cas9技术构建KCNH6 flox/flox转基因小鼠,将其与肝脏细胞特异性表达Cre重组酶工具鼠(Alb-cre)进行杂交,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法鉴定基因型。监测基因敲除小鼠和同窝对照小鼠的体质量和进食量。分别检测8周和20周雌雄各两组小鼠的三酰甘油、胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇。结果成功构建KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠,其基因型为KCNH6 flox/flox/Cre T。与同窝对照组相比,基因敲除小鼠的体质量和进食量均无明显变化。8周雄性和雌性小鼠的血脂无明显变化。20周时雄性小鼠的胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇均有明显升高。结论成功构建了KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠动物模型,成年雄性小鼠存在肝脏血脂代谢异常。动物模型的构建为探讨KCNH6基因在肝脏脂代谢中的作用提供重要研究平台。
- 卢晶李奇朱晓蓉谢荣荣杨金奎
- 关键词：脂代谢
- Unc13基因胰岛β细胞条件性敲除小鼠模型的构建和鉴定被引量：2
- 2020年
- 目的构建Cre重组酶系统调控的Unc13基因胰岛β细胞条件性敲除小鼠,为Unc13基因在胰岛素分泌中扮演的角色和作用机制的体内实验研究提供更特异的动物模型。方法运用CRISPR/Cas9技术构建Unc13 flox/flox转基因小鼠,将其与胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶(Ins2-cre)工具鼠进行杂交,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和测序等方法对其子代小鼠的基因型进行鉴定,并对该基因敲除(knock out,KO)小鼠及其同窝野生(wild type,WT)小鼠的体质量、糖耐量、胰岛素分泌水平进行测定。结果成功构建胰岛β细胞特异性Unc13基因条件性敲除小鼠(以下简称为Unc13 KO鼠)。进一步研究显示Unc13 KO鼠与WT鼠相比,体质量无明显变化,但糖耐量受损,胰岛素第一时相分泌下降。结论成功构建了Unc13基因胰岛β细胞条件敲除小鼠动物模型,为探讨Unc13基因在糖尿病发生、发展中的作用提供研究平台。
- 李奇卢晶朱晓蓉熊枫然杨金奎
- 关键词：基因敲除胰岛素分泌
- 血管紧张素转化酶2减少胰岛细胞的氧化应激及凋亡被引量：4
- 2017年
- 目的探讨血管紧张素转化酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)在胰岛素分泌中的作用及可能的机制。方法提取C57BL/6小鼠的胰岛,用棕榈酸诱导氧化应激及凋亡。用ACE2及对照GFP的腺病毒对胰岛进行感染。ELISA方法检测胰岛素分泌功能。DHE探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度。蛋白质印记(Western blotting)方法检测糖代谢及凋亡水平。结果 1)ACE2腺病毒感染后,胰岛素分泌增加。2)ACE2腺病毒感染降低了氧化应激水平。3)ACE2腺病毒感染减低胰岛凋亡。结论 ACE2改善胰岛素分泌功能,其机制可能与ACE2对氧化应激和凋亡的保护作用有关。
- 史婷婷杨芳远曹曦卢晶卢晶袁明霞谢荣荣
- 关键词：肾素血管紧张素系统血管紧张素转化酶2胰岛素氧化应激凋亡
- hERG钾通道通过降低氧化应激改善肝细胞糖代谢被引量：2
- 2017年
- 目的研究hERG钾通道(human ether-α-go-go related gene channels)在肝细胞中与糖代谢的关系。方法用hERG钾通道过表达载体转染人类肝癌细胞系(liver hepatocellular carcinoma,HepG2)细胞,通过荧光定量PCR(real-time PCR,RTPCR)和蛋白印迹(Western blotting)法检测糖代谢、糖异生、氧化应激及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide 2'-phosphate,NADPH)相关亚基的表达。结果 hERG钾通道蛋白可在肝脏细胞中表达,将hERG钾通道过表达于HepG2细胞后,糖异生相关基因葡萄糖-6-磷酸激酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase)表达显著降低,而磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)表达有降低。胰岛素表达相关基因葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter type 2,GLUT2)、胰岛素受体底物2(insulin receptor substrate,IRS-2)和腺苷酸活化蛋白激酶α亚基2[(adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase),AMPKα2]的表达水平均显著增高。NADPH4种亚基p22、p47、p67和p91表达均显著降低。结论 hERG钾通道可以通过降低氧化应激改善肝细胞内糖代谢。
- 卢晶沈涵程呈程呈张怡尘宋丽妮袁明霞杨金奎
- 关键词：氧化应激糖代谢
- KCN基因对小鼠脂代谢的影响及其机制初探
- 2017年
- 目的研究钾离子电压门控通道(potassium voltage-gated channel,KCN)基因对小鼠脂代谢的影响及其相关信号通路,为治疗糖尿病的脂肪异常提供新的治疗靶点。方法采用KCN基因敲除的小鼠模型及对照C57BL/6野生小鼠动物模型,检测三酰甘油、胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等脂代谢相关指标。HE染色观察小鼠肝脏组织脂肪变。Western blotting法测定小鼠肝脏组织腺苷酸激活蛋白激酶[adenosine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]通路相关蛋白的表达。结果 KCN基因敲除小鼠较野生型对照小鼠血清中三酰甘油、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇浓度均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)高密度脂蛋白明显降低,肝脏HE染色显示基因敲除小鼠肝脏内脂滴的数目和体积均与野生型有明显差异,Western blotting结果显示KCN基因敲除小鼠肝脏组织中磷酸化蛋白激酶B(phosphate-protein kinase B,Phos-AKT)、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(phosphate-acetyl CoA carboxylase,Phos-ACC)、phos-AMPK浓度均较正常对照组小鼠表达量降低,phosACCα水平较正常对照组小鼠明显增高差异有统计学意义(P<0.05)。结论 KCN基因对小鼠血脂代谢有保护作用,其作用机制与AMPK的脂肪酸氧化有关。
- 刘敬怡卢晶卢晶
- 关键词：VOLTAGE-GATED脂代谢
- Kcnh6点突变单基因糖尿病家系的小鼠模型构建及表型分析
- 2021年
- 目的通过CRISPR/Cas9技术构建Kcnh6基因P235L位点基因敲入定点突变小鼠模型,并验证该突变能否成功复制人类糖尿病家系表型,为接下来研究Kcnh6基因在糖尿病发病中的作用提供更精确的实验工具。方法设计针对已知糖尿病家系点突变位点的sgRNA(small guide RNA,sgRNA),同时制作一个携带靶位点同源臂、突变位点序列的供体DNA敲入载体。将sgRNA、cas9 mRNA和敲入载体通过显微注射移入小鼠的受精卵,选取其中存活的受精卵将其移植入假孕小鼠子宫,繁育得到子代小鼠。采用聚合酶链反应和基因测序等方法检测子代小鼠Kcnh6基因碱基突变情况。监测基因敲入小鼠的体质量和并对小鼠做糖耐量和胰岛素分泌实验。结果成功构建Kcnh6-P235L位点基因敲入纯合子小鼠。在高脂饲料喂养条件下,与同窝野生型(wild type,WT)小鼠相比,Kcnh6基因插入(knock in,KI)点突变小鼠的体质量增加,糖耐量及胰岛素分泌功能受损。结论成功构建了Kcnh6基因点突变敲入小鼠模型,且此模型具有糖尿病相关表型。
- 熊枫然卢晶张英超谢荣荣赵儒轩李奇杨金奎
- 关键词：定点突变糖耐量异常
- 基于CRISPR/Cas9研究rfx6对斑马鱼胰腺发育的影响
- 程呈卢晶李倩史婷婷杨金奎
