李爱芳
- 作品数：8 被引量：34H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金重庆市渝中区科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 微环境中S100A6直接和间接促进结直肠癌LoVo细胞迁移被引量：5
- 2018年
- 目的:深入探讨微环境中S100A6对结直肠癌LoVo细胞迁移的作用及其可能的分子机制。方法:制备并鉴定重组蛋白谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)和融合蛋白GST-人S100A6(GST-human S100A6,GST-hS100A6)。用GST-hS100A6(终质量浓度为30μg/mL)处理LoVo细胞后,采用划痕愈合实验检测细胞的迁移能力变化,采用蛋白质印迹法检测LoVo细胞中总蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)和磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)的表达变化。分别用磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/Akt信号通路抑制剂LY294002和GST-hS100A6单独或联合处理LoVo细胞后,采用划痕愈合实验检测细胞迁移情况。用GST-hS100A6刺激LoVo细胞后的条件培养液(CM-A6-LoVo)处理巨噬细胞,然后采用实时荧光定量PCR法检测该巨噬细胞中M2型标志物CD206和M1型标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达水平;进一步将该巨噬细胞与LoVo细胞共培养后,采用划痕愈合实验检测LoVo细胞的迁移能力。结果:成功获得GST-hS100A6和GST蛋白(作为对照)。与GST组相比,GST-hS100A6处理后的LoVo细胞划痕愈合率明显升高(P<0.05),而且LoVo细胞中p-Akt蛋白表达明显上调(P<0.05)。与单独GST-hS100A6处理组相比,LY294002联合GST-hS100A6处理后LoVo细胞的划痕愈合率明显降低(P<0.05)。与GST-hS100A6组相比,CM-A6-LoVo条件培养液处理后的巨噬细胞中CD206表达水平升高(P<0.05),而iNOS表达无明显变化(P>0.05);并且该巨噬细胞与LoVo细胞共培养可明显提高LoVo细胞的划痕愈合率(P<0.05)。结论:微环境中S100A6可直接和间接地促进结直肠癌LoVo细胞迁移,该作用机制可能与调控PI3K/Akt信号通路以及诱导巨噬细胞向M2型分化有关。
- 赵佳丽谢佳卿谷月李爱芳陈露黄茂彭琪曾宗跃周兰
- 关键词：肿瘤微环境巨噬细胞活化S100A6PI3K/AKT信号通路
- Notch信号参与BMP4诱导的间充质干细胞成骨分化及其机制的初步探讨被引量：7
- 2017年
- 目的:探讨Notch信号对骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)诱导间充质干细胞成骨分化的影响以及作用机制。方法:(1)DAPT或Ad-dominant-negative mutants of Notch1(Addn Notch1)和BMP4-CM处理小鼠胚胎成纤维细胞,检测早期成骨指标碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP);(2)茜素红S染色实验检测晚期成骨钙盐沉积情况;(3)半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测成骨分化相关基因ALP,Runx2,Col1a1的表达;(4)免疫细胞化学检测p-Smad1/5/8的表达;(5)结晶紫染色和流式细胞术检测细胞的增殖及周期改变。结果:(1)DAPT抑制BMP4诱导的早期成骨分化,且呈浓度依赖性;(2)Delta-like 1(DLL1)促进BMP4诱导的成骨分化,DAPT和dn Notch1抑制BMP4诱导的成骨分化;(3)DLL1促进BMP4诱导的成骨相关基因ALP,Runx2,Col1a1的表达,DAPT抑制这些基因的表达;(4)DLL1促进BMP4诱导的细胞核内p-Smad1/5/8的表达,而DAPT抑制其表达;(5)DLL1促进BMP4诱导的细胞增殖,而DAPT抑制BMP4诱导的细胞增殖。结论:Notch信号通过BMP/Smads信号通路促进BMP4诱导的MSCs成骨分化,在此过程中也有促细胞增殖的作用。
- 曹俊杰李爱芳卫亚琳廉静唐敏
- 关键词：NOTCH信号间充质干细胞成骨分化
- 葡萄籽原花青素对人骨肉瘤143B细胞的作用及机制研究被引量：5
- 2017年
- 该文研究葡萄籽原花青素(grape seed procyanidins,GSP)对人骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡的影响及其机制。用不同剂量GSP处理骨肉瘤143B细胞,结晶紫染色和集落形成试验分别用于检测细胞增殖和集落形成能力的变化;流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Western blot法检测周期和凋亡相关蛋白;RT-PCR和Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的变化;采用腺病毒Adβ-catenin感染以过表达β-catenin,探讨GSP抑制143B细胞增殖的作用是否与Wnt/β-catenin信号通路相关。结果显示,GSP在20~60μg/m L剂量范围内呈剂量和时间依赖性抑制143B细胞增殖活力和降低细胞克隆形成能力;GSP引起G0/G1周期阻滞和周期相关蛋白cyclin D1下调,还使细胞凋亡率明显增高,并伴有活化的凋亡相关蛋白cleaved PARP(poly ADP-ribose polymerase)和cleaved caspase-8的水平增高;GSP降低143B细胞中β-catenin m RNA水平及核内与总β-catenin蛋白质水平,抑制GSK3β磷酸化并上调GSK3β蛋白质水平;过表达β-catenin可部分减弱GSP对该细胞增殖活性的抑制作用。结果表明,GSP抑制骨肉瘤143B细胞的增殖和促进其凋亡,其机制涉及Wnt/β-catenin信号通路的抑制。
- 谢佳卿赵佳丽李爱芳谷月陈露黄茂彭棋曾宗跃周兰
- 关键词：葡萄籽原花青素骨肉瘤细胞增殖凋亡WNT/Β-CATENIN信号通路
- S100A6促宫颈癌细胞增殖、迁移及其可能机制研究被引量：10
- 2017年
- 目的:探讨S100A6对人宫颈癌细胞系HeLa和SiHa增殖、迁移的影响及其机制。方法:首先采用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测宫颈癌细胞HeLa、SiHa和CaSki中S100A6 mRNA的基础表达,再分别采用重组腺病毒AdS100A6和AdsiS100A6干预HeLa和SiHa细胞,Western blot验证腺病毒感染是否成功;MTT法检测细胞增殖能力,划痕愈合试验检测细胞迁移能力,Western blot检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)指标E钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)、N钙粘蛋白(N-cadherin,N-cad)及p-Akt的蛋白水平,半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription and polymerase chain reaction,RT-PCR)检测PI3K-Akt信号通路下游靶基因Snail、Twist的表达。结果:与对照组相比,AdS100A6组的HeLa细胞3天时的OD_(492)值和划痕愈合率均明显升高,并伴随E-cadherin降低和N-cadherin升高;而AdsiS100A6组的SiHa细胞5天时的OD_(492)值和3天时的划痕愈合率明显降低,并伴随E-cadherin升高和N-cadherin降低;同时,在HeLa细胞中上调S100A6后p-Akt蛋白水平增加,该通路的下游靶基因Snail和Twist表达也明显上调。结论:S100A6可以增强宫颈癌细胞的增殖和迁移能力,其机制可能涉及EMT和PI3K-Akt信号通路的激活。
- 李爱芳谷月李雪茹孙晖查何谢佳卿赵佳丽周兰
- 关键词：宫颈癌S100A6上皮间质转化PI3K-AKT信号通路
- S100A9对宫颈癌Hela细胞的增殖和迁移的影响及其机制探讨被引量：4
- 2015年
- 为初步探讨S100A9在宫颈癌中的生物学作用,利用携带有人S100A9基因的腺病毒(Adh S100A9)感染于低表达S100A9的宫颈癌Hela细胞,通过MTT法检测细胞增殖能力,划痕愈合试验和Transwell试验检测细胞迁移能力,通过倒置显微镜观察细胞形态变化,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测上皮细胞标志蛋白E-钙黏着蛋白(E-cadherin,E-cad)、间质细胞标志蛋白波形蛋白(vimentin,Vim)及Wnt/β-联蛋白(β-catenin,β-cat)信号通路相关分子的表达。结果显示,与对照组相比,过表达S100A9的Hela细胞增殖活性增强、迁移率增高,细胞形态由"铺路石"样向"梭形"转变,排列紊乱,伴随E-cad降低(P<0.05)和Vim升高(P<0.01);同时,过表达S100A9的Hela细胞中Wnt/β-cat信号通路的关键分子β-联蛋白水平增加(P<0.01),并且入核增多(P<0.01),该通路的下游靶基因c-myc、Snail及Twist表达也明显上调。该研究结果提示,S100A9促进宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),激活Wnt/β-cat信号通路;S100A9促进增殖和迁移作用的机制可能与其促进EMT和激活Wnt/β-cat信号通路相关。
- 李雪茹孙晖查何段亮李欢袁世梅李爱芳谷月周兰
- 关键词：S100A9宫颈癌迁移上皮间质转化
- 外源性S100A6蛋白对人结直肠癌细胞S100A6基因转录的影响及机制探讨
- 2016年
- 目的:探讨钙周期蛋白S100A6对人结直肠癌细胞系HCT116及SW480中S100A6基因转录的影响及机制。方法:首先采用原核表达方法制备重组人S100A6蛋白(recombinant human S100A6,rh S100A6)并鉴定;rh S100A6蛋白(终浓度为10μg/ml)、重组腺病毒Adsiβ-catenin(可表达β-catenin的siRNA)处理结直肠癌细胞HCT116、SW480及正常肠上皮细胞FHC,采用半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription and polymerase chain reaction,RT-PCR)及定量实时聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,q PCR)检测S100A6 mRNA的水平,采用RT-PCR检测细胞中E-cadherin mRNA水平,采用Western blot检测并比较HCT116及SW480细胞核中β-catenin蛋白的水平变化,采用细胞免疫荧光法检测细胞中β-catenin分布的变化。结果:成功制备rh S100A6蛋白;外源性rh S100A6蛋白上调HCT116及SW480细胞中S100A6 mRNA水平和细胞核中的β-catenin蛋白水平并促进β-catenin发生核移位,同时下调细胞中E-cadherin mRNA水平;Adsiβ-catenin与rh S100A6联合处理组的S100A6 mRNA水平明显低于单独rh S100A6处理组。所有差异均具有统计学意义。结论:胞外的S100A6蛋白增强结直肠癌细胞中S100A6基因的转录,其机制可能涉及β-catenin通路的激活。
- 孙晖李雪茹查何段亮袁世梅李欢李爱芳谷月周兰
- 关键词：结直肠癌S100A6Β-CATENIN
- BCL6B抑制结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移及其可能机制研究被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨B细胞淋巴瘤6B(B cell lymphoma 6 member B,BCL6B)对人结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移的影响及机制。方法:采用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,q PCR)和Western blot检测和比较人正常肠上皮细胞FHC及人结直肠癌细胞HCT116中BCL6B的内源性表达;用脂质体法将pc DNA3.1-BCL6B转入HCT116细胞,同时设转入空载体的对照组;运用MTT法、流式细胞术、划痕愈合及Transwell试验检测BCL6B对癌细胞增殖、周期及迁移能力的影响;采用Western blot检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(p-GSK3β)、细胞周期蛋白(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果:q PCR和Western blot结果显示,与正常肠上皮细胞FHC相比,BCL6B在结直肠癌细胞HCT116中呈明显低表达(P=0.017);转染pc DNA3.1-BCL6B后,细胞内BCL6B表达水平明显升高(P=0.000)。与阴性对照组相比,BCL6B组HCT116细胞4 d时的增殖活性降低41.79%(P=0.040),且G1期细胞百分比增加62.09%(P=0.001);同时,BCL6B组HCT116细胞48 h划痕愈合率及穿膜细胞数均明显减少(P=0.001)。Western blot结果表明,BCL6B组HCT116细胞内β-catenin、p-GSK3β、Cyclin D1和MMP-7的表达水平较阴性对照组分别降低65.66%(P=0.028)、62.03%(P=0.001)、60.87%(P=0.021)和50.88%(P=0.030),E-钙黏蛋白的表达升高63.64%(P=0.018)。结论:BCL6B可抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖及迁移,其机制可能涉及Wnt/β-catenin通路的抑制。
- 谷月李爱芳赵佳丽谢佳卿彭棋陈露黄茂周兰
- 关键词：结直肠癌WNT/Β-CATENIN信号通路
- BCL6B对人结直肠癌LoVo细胞增殖和迁移的影响及机制被引量：3
- 2017年
- 目的:研究B细胞白血病/淋巴瘤6B(BCL6B)在人正常肠上皮细胞FHC及结直肠癌细胞LoVo中的表达水平及BCL6B对LoVo细胞增殖和迁移的影响,并探讨其相关分子机制。方法:采用RT-PCR及Western blot检测FHC细胞和LoVo细胞中BCL6B的内源性表达;用脂质体法将重组质粒pc DNA3.1-BCL6B转入LoVo细胞,运用MTT、集落形成、细胞划痕及Transwell小室实验检测BCL6B对LoVo细胞增殖和迁移的影响,采用RT-PCR及Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,Western blot检测蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。结果:与正常肠上皮细胞FHC相比,BCL6B在LoVo细胞中呈明显低表达;转染pc DNA3.1-BCL6B后的LoVo细胞内BCL6B水平显著增高。过表达BCL6B的实验组细胞72 h的增殖活性及划痕愈合力分别较对照组降低28.33%(P<0.01)和36.11%(P<0.05)。实验组细胞cyclin D1和MMP-9的m RNA水平分别降低39.90%(P<0.01)和77.36%(P<0.05),同时cyclin D1、MMP-9和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白水平分别降低44.00%(P<0.05)、47.06%(P<0.01)和32.88%(P<0.05)。结论:BCL6B可抑制结直肠癌LoVo细胞的增殖和迁移,其机制可能涉及PI3K/AKT信号通路的抑制。
- 谷月李爱芳孙晖李雪茹查何赵佳丽谢佳卿周兰
- 关键词：结直肠癌细胞增殖细胞迁移PI3K/AKT信号通路
