魏迎辉
- 作品数：13 被引量：17H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 一种猪ICSI操作的方法
- 本发明公开了一种猪ICSI操作的方法。本发明的方法包括如下步骤：(1)用脂酶或脂酶溶液水解离体动物精液的精子，收集水解产物，得到用于制备ICSI受精卵的精子。(2)将所述用于制备ICSI受精卵的精子注射到离体卵母细胞中，...
- 李奎刘志国魏迎辉
- 文献传递
- 一种基因敲除载体以及制备CD163基因敲除猪成纤维细胞的方法
- 本发明提供了一种基因敲除载体以及制备CD163基因敲除猪成纤维细胞的方法，所述基因敲除载体包括CRISPR/Cas9载体骨架以及连接到该载体骨架上的一段DNA片段，所述DNA片段的序列如SEQ ID NO：2所示。通过该...
- 牟玉莲刘志国李巨浪魏迎辉徐奎李奎
- 文献传递
- 一种猪ICSI操作的方法
- 本发明公开了一种猪ICSI操作的方法。本发明的方法包括如下步骤：(1)用脂酶或脂酶溶液水解离体动物精液的精子，收集水解产物，得到用于制备ICSI受精卵的精子。(2)将所述用于制备ICSI受精卵的精子注射到离体卵母细胞中，...
- 李奎刘志国魏迎辉
- 小鼠Wip1基因的表达及其对受精能力的影响被引量：2
- 2019年
- 本研究旨在探讨Wip1基因的表达及其对精子受精能力的影响,为阐明Wip1基因对雄性繁殖的影响提供新的着眼点。选取相同饲养环境、同一遗传背景的8周龄左右的野生型雄鼠,利用实时荧光定量PCR技术检测Wip1基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑组织及雄性生殖器官中的表达情况,利用免疫荧光技术检测Wip1蛋白在睾丸组织及精子细胞中的分布情况。以Wip1敲除型雄鼠为试验组,野生型雄鼠为对照组,利用ELISA试剂盒检测两组小鼠血清中睾酮水平;通过体外受精试验比较两组的2-细胞率及囊胚率。结果显示,Wip1基因mRNA在野生型雄鼠各组织中广泛表达,且在雄性生殖器官中表达量较高,其中睾丸中表达量最高,附睾体、附睾头、附睾尾次之;Wip1蛋白主要定位于睾丸组织中的长形精子细胞及附睾成熟精子细胞的头部。ELISA检测结果发现,与野生型雄鼠相比,Wip1敲除型雄鼠血清内睾酮含量极显著下降(P<0.01)。体外受精结果表明,Wip1敲除后2-细胞率及囊胚率均极显著下降(P<0.01)。结果表明,Wip1基因敲除能够引起雄性小鼠受精能力降低,这可能与Wip1基因在精子发生过程中发挥作用相关。
- 邱乙卿高倩魏迎辉刘莎莎牟玉莲李奎
- 关键词：小鼠受精
- 一对特异性识别猪MSTN基因启动子的sgRNA及其编码DNA与应用
- 本发明公开了一对特异性识别猪MSTN基因启动子的sgRNA及其编码DNA与应用。本发明提供成套sgRNA，由sgRNA‑L‑1和sgRNA‑R‑2组成；所述sgRNA‑L‑1中识别靶序列的片段的核苷酸序列为序列1；所述s...
- 李奎刘志国牟玉莲魏迎辉郑新民
- 文献传递
- 一对特异性识别猪IGF2基因内含子的sgRNA及其编码DNA与应用
- 本发明公开了一对特异性识别猪IGF2基因内含子的sgRNA及其编码DNA与应用。本发明提供成套sgRNA，由sgRNA‑L‑1和sgRNA‑R‑2组成；所述sgRNA‑L‑1中识别靶序列的片段的核苷酸序列为序列1；所述s...
- 李奎刘志国牟玉莲魏迎辉郑新民
- 文献传递
- PNPLA5基因敲除对大鼠睾丸形态学及精子运动能力的影响
- 2019年
- 旨在研究PNPLA5基因对雄性大鼠繁殖性能的影响。本研究以PNPLA5敲除型雄性大鼠(KO)为试验组,野生型大鼠(WT)为对照组,分别饲喂普通饲料,并采集大鼠附睾精子及睾丸组织。利用繁殖试验检测配种后雌鼠的妊娠率及平均产仔数,精子运动性能分析检测精子运动能力,Western blot检测精子中线粒体功能相关细胞色素C(cytochrome C,Cytc)与细胞色素C氧化酶亚基IV(cytochrome c oxidase subunit IV,COX IV)的表达水平,HE染色检测睾丸组织形态。结果表明:与野生型雄性大鼠相比,PNPLA5敲除型雄鼠与野生型雌鼠配种后,雌鼠的妊娠率极显著下降(P<0.01);精子的曲线运动速度显著降低(P<0.05)及渐进运动精子的百分率极显著降低(P<0.01);PNPLA5敲除型大鼠精子中细胞色素C表达量下调,细胞色素C氧化酶亚基IV表达量上调,但差异均不显著(P>0.05);PNPLA5基因缺失引起大鼠睾丸组织结构疏松,曲细精管中各阶段生精细胞排列紊乱,上皮细胞脱落至管腔。综上表明,本研究发现PNPLA5基因敲除能够引起雄性大鼠繁殖能力降低,为家畜繁殖研究提供重要的参考依据。
- 胡言青徐奎魏迎辉邱乙卿张秀玲王冰源刘志国牟玉莲李奎
- 关键词：睾丸精子运动能力
- 猪卵胞浆内单精子显微注射(ISCI)技术的研究进展
- 2016年
- 卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技术集显微操作技术与体外受精于一体,先后在人和多种家畜动物上成功获得后代,并且被广泛应用于人类辅助生殖、动物性控胚胎制备、转基因动物生产和哺乳动物受精机制等方面的研究。文章以猪为研究对象,综述了猪ICSI技术的研究现状、影响因素及其存在的问题。
- 魏迎辉刘志国樊俊华
- 关键词：精子卵母细胞
- CRISPR/Cas9介导的猪IPEC-J2细胞CD13基因敲除细胞系的建立被引量：5
- 2019年
- 旨在利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术制备CD13基因敲除的IPEC-J2(猪空肠上皮细胞系)细胞,揭示细胞表面分化抗原13(cluster of differentiation 13,CD13)在肠道病原微生物感染肠道细胞中所起的作用。本研究在猪CD13基因第2外显子区域设计2个向导RNA(guide RNA,gRNA),命名为g3、g5,然后分别将g3和g5克隆到pX330-GFP和pX330-RFP载体骨架上,电转染IPEC-J2细胞,48 h后通过流式细胞术分选具有双荧光标记的细胞,培养并获得单克隆细胞,PCR扩增、测序,从而获得CD13基因纯合敲除的阳性细胞系。对获得的20个细胞单克隆进行PCR,并挑取部分克隆PCR产物测序,发现共有7个克隆发生了基因片段缺失,其中1个克隆为单等位基因片段缺失,3个克隆为双等位基因杂合片段缺失,3个克隆为双等位基因纯合片段敲除。本研究检测双等位基因纯合片段敲除细胞的蛋白表达水平,其结果显示,在该纯合敲除细胞中CD13蛋白几乎不表达,表明成功构建了CD13敲除的IPEC-J2细胞系。本研究获得的CD13基因敲除细胞系为探究CD13在猪肠道病原微生物感染肠道细胞中所起的作用奠定了基础。
- 王晓朋徐奎魏迎辉张秀玲刘莎莎邱乙卿刘颖赵海全牟玉莲李奎
- CD163双等位基因编辑猪的制备及传代被引量：10
- 2018年
- 【目的】猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),俗称"蓝耳病",是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种高致死性传染病,对世界养猪业造成了巨大的经济损失。由于PRRSV遗传变异性较大,因此国内外并未有理想疫苗能够对此病进行有效防制。Cluster of differentiation 163(CD163)是PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)的受体之一,研究旨在利用CRISPR/Cas9技术结合体细胞核移植技术制备CD163基因编辑的大白猪。【方法】针对猪CD163基因的第7外显子设计构建CRISPR/Cas9基因编辑载体;转染大白猪胎儿成纤维细胞,获得基因编辑阳性细胞克隆;以基因编辑细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎;胚胎移植到受体母猪生产CD163基因编辑猪,并进行后续的扩繁试验。【结果】设计的g RNA能够高效的识别靶位点。对获得的127个细胞单克隆进行PCR和测序显示,共有21个克隆发生突变,其中14个克隆为单等位基因突变或双等位基因杂合突变,7个克隆为双等位基因纯合突变。通过体细胞核移植技术,成功获得了CD163双等位基因编辑的纯合大白猪;并获得首批F1代CD163基因编辑仔猪,目前健康状态良好。随后将有更多的F1代CD163基因编辑猪陆续出生。【结论】制备的无抗性筛选标记的CD163双等位基因编辑猪,能够安全并快速地为培育抗PRRSV新品种猪提供育种材料。
- 魏迎辉刘志国刘志国徐奎Paul Dyce李继良李继良周伟良冯保亮牟玉莲牟玉莲李奎
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征
