李浏
- 作品数：9 被引量：9H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 表没食子儿茶素没食子酸酯通过活化p38α诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞凋亡被引量：1
- 2016年
- 该文研究了表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)诱导NB4细胞凋亡的可能分子机制。不同浓度梯度EGCG处理NB4细胞,或预先用p38α抑制剂PD169316处理NB4细胞,再用EGCG处理。用CCK-8(cell counting kit-8)方法检测细胞增殖情况,用FITC-Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况,用Western blot检测p38α、P-p38α、Bcl-2和Bax蛋白质表达水平。结果显示,随着EGCG浓度的升高,NB4细胞增殖率逐渐降低,细胞凋亡率明显升高。P-p38α和Bax蛋白质表达水平升高,与EGCG浓度呈正相关;而Bcl-2蛋白质表达水平降低。p38α抑制剂处理后,NB4细胞增殖率升高,凋亡率降低,Bax蛋白质表达水平降低,而Bcl-2蛋白质表达水平无明显变化。以上结果表明,EGCG可能通过活化p38α诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞凋亡。
- 淦柳根刘北忠单志灵肖春兰徐婷宋浩李浏杨蓉钟梁
- 关键词：EGCGNB4细胞凋亡
- NLS-RARα对人白血病细胞NB4分化抑制及其机制的研究
- 2016年
- 该文旨在探讨带核定位信号的维甲酸受体α(nuclear localization signal retinoic acid receptor alpha,NLS-RARα)对人急性早幼粒白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞株NB4分化的影响及其机制。免疫印迹实验检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导的NB4细胞分化标志物C/EBPβ、CD11b和p38α蛋白质水平;利用慢病毒介导的NLS-RARα基因过表达,进一步用免疫印迹实验验证过表达效率并检测NLS-RARα对NB4细胞分化标志物C/EBPβ、CD11b和p38α蛋白质水平的影响;间接免疫荧光实验分析NLS-RARα与p38α的空间共定位;免疫共沉淀实验分析NLS-RARα与p38α的相互作用。结果显示,生理浓度和药理浓度的ATRA促进NB4细胞分化的同时也激活了p38α,且p38α的活性变化与髓系分化标志物C/EBPβ变化一致;髓系分化表面标志物CD11b表达量在药理浓度ATRA(1μmol/L)处理下达到最高;NLS-RARα抑制NB4细胞的分化,且只有在ATRA存在的条件下,NLS-RARα抑制NB4细胞的分化与下调p38α活性相关;NLSRARα与p38α存在空间共定位且NLS-RARα与p38α直接相互作用。该研究结果提示,当存在ATRA诱导时,NLS-RARα与p38α直接相互作用后下调p38α的活性进而抑制NB4细胞的分化。
- 肖春兰刘北忠徐婷单志灵淦柳根宋浩杨蓉李浏钟梁
- 关键词：NB4细胞
- 重组慢病毒LV5-NE的构建及NE促进NB4细胞增殖被引量：1
- 2016年
- 目的构建重组慢病毒LV5-NE筛选纯NB4/LV5-NE细胞株,探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖的影响,为研究NE致白血病的可能机制奠定基础。方法以质粒p CMV-myc-NE为模板得到PCR产物NE,将NE基因连接到穿梭载体p GLV10/U6/GFP/Puro后酶切验证,将序列正确的质粒与包装质粒p Gag/Pol、pRev、p VSV-G共转染293T细胞。测定病毒滴度。实验分为空白组、LV5-NC组和LV5-NE组,病毒感染NB4细胞72 h后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞。用Western blot检测NE在NB4细胞中的蛋白表达以及其切割作用;CCK-8法观察NB4细胞增殖能力;流式细胞术测定NB4细胞周期和凋亡;Western blot检测p Akt和Akt以及Bax和Bcl-2蛋白表达。结果成功构建表达NE的慢病毒LV5-NE,筛选得到纯NB4/LV5-NE细胞株,NE对NB4细胞的增殖有明显促进作用(P<0.05)结论 NE在NB4细胞株中稳定表达后中可促进NB4细胞的增殖,其增殖作用可能通过激活PI3K/Akt通路调节。
- 杨蓉钟梁刘北忠阳小群蒋开玲李浏宋浩
- 关键词：中性粒细胞弹性蛋白酶增殖NB4细胞
- NLS-RARα通过激活AKT调节白血病NB4细胞的增殖被引量：1
- 2016年
- 目的构建携带NLS-RARα的重组慢病毒,感染白血病NB4细胞并观察其对NB4细胞增殖和AKT蛋白的影响。方法以质粒p CMV-HA-NLS-RARα为模板,PCR扩增NLS-RARα基因,将其亚克隆到慢病毒表达载体质粒LV5中,经DNA测序鉴定重组载体,用4质粒系统共转染293T细胞,收集病毒上清,浓缩鉴定,测定重组慢病毒的滴度;重组慢病毒感染NB4细胞,经过嘌呤霉素筛选获得稳定转染NLS-RARα的NB4细胞株;CCK-8法检测NLSRARα对NB4细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期和感染效率;Western blot分别检测NLS-RARα、t-AKT和p-AKT的表达。结果 NLS-RARα克隆入LV5的多克隆位点,慢病毒浓缩后滴度为2×108Tu/m L;感染效率为86.54%;NLS-RARα能够明显促进细胞增殖,S期细胞增多,G1和G2期细胞减少;NLS-RARα基因在NB4细胞中稳定的表达,同时p-AKT明显增高,用PI3K抑制剂LY294002处理后p-AKT明显降低。结论 NLS-RARα通过激活AKT促进白血病NB4细胞的增殖。
- 宋浩李浏钟梁蒋开玲阳小群杨蓉刘北忠
- 关键词：急性早幼粒细胞白血病增殖AKT
- PKM2在白血病NB4细胞系的分布及对c-Myc蛋白的影响
- 2017年
- 探讨PKM2在白血病NB4细胞中的分布情况及对c-Myc蛋白的影响。免疫荧光技术检测PKM2在NB4细胞中的分布情况。将含靶点序列的GV248载体、包装质粒Helper 1.0和Helper 2.0共转染293T细胞,包装慢病毒。收集病毒上清,浓缩纯化后感染NB4细胞,荧光显微镜观察感染效率,Western blotting检测PKM2和c-Myc蛋白的表达变化。CCK-8实验检测细胞增殖情况。结果显示,PKM2在NB4细胞核及细胞质中均有表达,细胞核中比例较大。成功构建LV-PKM2-RNAi病毒,感染的细胞PKM2和c-Myc表达下调(p<0.05),细胞增殖能力降低(p<0.05)。这些结果表明PKM2主要分布在NB4细胞核,抑制PKM2表达可明显抑制NB4细胞增殖,并抑制c-Myc蛋白表达。
- 单志灵刘北忠淦柳根肖春兰徐婷杨蓉宋浩李浏钟梁
- 关键词：NB4细胞
- ATRA诱导SP100蛋白表达及其对白血病NB4细胞增殖的影响
- 2017年
- 目的探讨SP100蛋白在全反式维甲酸(ATRA)作用NB4细胞过程中的表达及其对NB4细胞增殖和周期的影响。方法实时定量PCR检测SP100 mRNA的表达;Western blot检测SP100蛋白的表达;免疫荧光检测SP100的定位;CCK-8检测NB4细胞的增殖;流式细胞术检测NB4细胞的周期。结果 ATRA能明显促进NB4细胞中SP100mRNA水平和蛋白水平,并将SP100由弥散的小点状转变为较大的斑块状;感染SP100-shRNA的NB4细胞增殖活力明显高于未感染组和病毒空载组(P<0.05),并使G2/M期的细胞增多。结论 ATRA促进NB4细胞中SP100蛋白的表达,SP100蛋白可能参与NB4细胞增殖活力的调节。
- 徐婷刘北忠肖春兰单志灵淦柳根杨蓉李浏宋浩钟梁
- 关键词：急性早幼粒细胞白血病NB4细胞
- 重组慢病毒表达PML核定位信号缺失体抑制急性早幼粒白血病细胞系c-Myc蛋白表达被引量：1
- 2016年
- 目的构建携带PML(ΔNLS)基因的重组慢病毒,研究其对NB4细胞中c-Myc蛋白表达的影响。方法以质粒p CMV-HA-PML(ΔNLS)为模板,PCR扩增PML(ΔNLS)基因,克隆入慢病毒载体LV5-EF1a-GFP/puro,与p Helper 1.0和p Helper 2.0共转染293T细胞,包装病毒。收取病毒上清液,纯化后感染NB4细胞,荧光倒置显微镜观察感染效率,RT-PCR法检测PML(ΔNLS)mRNA的转录水平,Western blot检测PML(ΔNLS)、β-catenin、γ-catenin和c-Myc蛋白表达的变化。CCK-8实验观察细胞增殖。结果成功构建PML(ΔNLS)过表达慢病毒,病毒感染NB4细胞,感染效率达82.74%,LV5-PML(ΔNLS)携带的PML(ΔNLS)能够在NB4细胞中稳定表达;感染LV5-PML(ΔNLS)的NB4细胞中β-catnin、γ-catenin和c-Myc蛋白表达下降(P<0.05);NB4细胞增殖活力明显高于未感染组和空病毒载体组(P<0.05)。结论成功构建了重组慢病毒PML(ΔNLS),PML(ΔNLS)过表达可促进NB4细胞体外增殖,并抑制c-Myc蛋白表达。
- 李浏宋浩钟梁阳小群蒋开铃杨蓉刘北忠
- 紫草素通过下调c-MYC蛋白的表达抑制白血病NB4细胞的增殖被引量：6
- 2016年
- 目的研究紫草素对人白血病NB4细胞增殖的影响及其作用机制。方法 CCK-8法检测NB4细胞增殖。流式细胞术检测细胞周期和凋亡。Western blot检测细胞c-MYC、ERK、p-ERK蛋白表达。用SPSS17.0软件包进行单因素方差分析及t检验。结果 NB4细胞经紫草素处理后,细胞活力受到明显抑制(P<0.01);G1期细胞增多(P<0.01),G2期和S期细胞减少(P<0.01);细胞凋亡率明显增加(P<0.01);c-MYC蛋白表达水平明显降低(P<0.05),p-ERK水平明显升高(P<0.01)。结论紫草素抑制NB4细胞增殖,可能机制是通过下调c-MYC蛋白的表达,EKR信号通路蛋白可能参与了这一过程。
- 单志灵刘北忠淦柳根肖春兰徐婷杨蓉宋浩李浏钟梁
- 关键词：紫草素NB4细胞增殖C-MYC
- PML(ΔNLS)和氯化锂对白血病NB4细胞增殖与凋亡影响的研究
- 本文分析了PML(ΔNLS)和氯化锂对白血病NB4细胞增殖与凋亡影响。本研究分为两个部分： 第一部分：重组慢病毒LV5-PML（ΔNLS）的构建及其对NB4细胞增殖与凋亡的影响。 目的：通过重组慢病毒介导的PML(Δ...
- 李浏
- 关键词：白血病细胞增殖蛋白表达病理细胞学
- 文献传递
